杂色云芝产漆酶的发酵条件研究*

本文对杂色云芝（Coriolus versicolor）产漆酶的发酵条件作了研究。结果表明摇瓶实验产漆酶（Laccase）的最佳培养基成分为：可溶性淀粉 2g/L, NH4Cl 24mmol/L, 微量元素混合液 7ml/L, pH3.0柠檬酸—Na2HPO4缓冲溶液 0.01mol/L, KH2PO4 1.4×10-2 mol/L, MgSO4·7H2O 2.03×10-3mol/L, CaCl2·2H2O 6.8×10-4 mol/L, VB1 2.97×10-6 mol/L, 吐温80 4.0g/L, 愈创木酚0.01mmol/L, CuSO4 ·5H2O 0.005mmol/L,最佳发酵条件为培养基初始pH3.0, 菌体生长6d,培养基装量为250ml三角瓶中25ml培养液,25℃条件下振荡培养(150r/min)9d。     

一种酶免疫传感器的制备和性能测试

这种酶免疫传感器是采用丝素蛋白溶液将待测抗原(兔IgG)固定在基础电极表面,选用抗体(山羊抗兔IgG-HRP)与其识别结合。利用H2O2将抗原抗体结合的电位响应信号放大而检测抗原的浓度。该传感器测定抗原的最低检测浓度1.0×10-10 mol/L,线性范围1.0×10-8~1.0×10-10 mol/L,响应时间为10s。通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合,反应时间由原来的90min缩短到30min,这在国内外鲜有报道。这种以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶免疫传感器,在临床检测、生物医学研究等领域将会有广阔的应用前景。     

厚叶景天组织传感器的研究

利用厚叶景天的叶和茎组织作为生物催化材料,分别同二氧化碳气敏电极和氨气敏电极组合,研制了L－精氨酸传感器及,L－赖氨酸传感器。两种传感器的线性范围分别为1.0×10^-4 1.O×10^-3mol/L和8．0×10^-5—3.0×10^-3mol/L．检测下限分别为3．2×10^-5mol／L和2.2×10^-5mol/L,响应斜率分别为42.2mV／dec和41．4mv／dec。考察了两种传感器的回收率．结果表明,L－精氨酸传感器和L－赖氨酸传感器的回收率平均值分别为98．6％和101.6％,标准偏差分别为4.6％和4.0％。     

青霉菌m8产胞外木聚糖酶的纯化及其性质研究

青霉菌m8产胞外木聚糖酶的适合培养基 (g/L) :含麦草粉 4 0 ,(NH4) 2 SO44.5 ,KH2 PO41.0 ,MgSO4·7H2 O 0 .5 ,NaCl 0 .3,Tween80 3.0 ,CaCO3 1.0。培养物中该酶经过离子交换和分子筛层析两步处理 ,粗酶被浓缩了 31倍 ,比活力达 4 6 7,收率为 5 0 %。该酶的最适 pH值为 4 .5 ,最适反应温度为 5 5℃ ,可被K+ ,Ca2 + ,Mg2 + 离子激活 ,而被Ag+ ,Fe3 + 和Cu2 + 离子纯化 ,其Km值为 4 .8× 10 -2 g/L。     

再生丝素固定的酶免疫传感器及其应用前景的研究

酶免疫传感器是采用再生丝素将待测抗原 (免IgG)固定在石墨电极表面 ,选用抗体 (山羊抗兔IgG-HRP)与其识别结合。利用H2 O2 将抗原抗体结合的电位响应信号放大 ,采用直接电位法检测IgG的浓度。该传感器测定IgG的最低检测浓度可达 1.2× 10 -10 mol/L ,标准曲线的线性范围在 4.1× 10 -7～ 1.2× 10 -10 mol/L ,响应时间为 15s。通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合 ,反应时间由原来的 90min缩短到 30min ,这在国内外鲜有报道。以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶免疫传感器 ,不仅在临床检测、生物医学研究领域中 ,而且在动植物疾病检测、环境监测、HLA个人身份鉴定、PC安全、物理访问 (门禁 )、军事等领域都有着广阔的应用前景。     

再生丝素固定的酶标免疫传感器的研究

所研究的酶标免疫传感器是采用再生丝素将待测抗原 (兔IgG)固定在石墨电极表面 ,选用抗体 (山羊抗兔IgG HRP)与其识别结合。利用H₂O₂ 将抗原抗体结合的电位响应信号放大采用直接电位法检测IgG的浓度。该传感器测定IgG的最低浓度可达 1.2×10^-10 mol/L ,标准曲线的线形范围在4.1×10^-7～1.2×10^-10 mol/L ,回归方程为: E=-1049+721g[IgG],响应时间为 15s。通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合 ,反应时间由原来的 90min缩短到 3 0min。这种以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶标免疫传感器 ,在临床检测、环境监测、HLA个人身份鉴定等领域都有着广阔的应用前景。     

林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶的纯化和性质

采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素52柱层析、亲和蓝柱层析和琼脂糖凝胶Sepharose6B柱层析的方法,分离纯化了林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶,用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为单一组分。以凝胶过滤和聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得该酶的分子量为170000,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得其亚基分子量为42500,表明林肯链霉菌丙氨酸脱氢酶由四个相同的亚基组成。该酶加氨反应最适pH为9．0,脱氨反应最适pH为9．5,加氨反应和脱氨反应的最适温度均为50℃。加氨反应丙氨酸脱氢酶的表现米氏常数km值为：丙酮酸2．08×10－4mol／L,NH4+2．00×10-2mol／L,NADH2．38×10-5mol／L;脱氨反应的Km为：L-Ala1．43×10-2mol／L;NAD+6．67×10-5mol／L。     

球衣菌合成聚羟基烷酸(PHA)的发酵研究

研究了球衣菌 (Sphaerotilussp.)W991 3 6合成聚羟基烷酸 (PHA)的培养基配方及发酵条件。结果表明 ,W991 3 6适宜发酵培养基配方为 :葡萄糖 1 0 2 5g/L ,蛋白胨 2 6 3g/L ,MgSO4·7H2 O 0 1 7g/L ,CaCl2 0 0 5g/L ,NaH2 PO4·2H2 O 0 0 2g/L ,K2 HPO40 0 4g/L ,KH2 PO40 0 3g/L ;最佳接种量为 0 1 3 8g (干 ) / 1 0 0mL ,培养基适宜初     

Nafion膜固定的亚甲基蓝为介体的生物传感器

制成了以亚甲基蓝为介体的电流型过氧化氢生物传感器,通过离子交换牢固地固定在Nafion膜中的亚甲基蓝,能有效地在辣根过氧化物酶和玻碳电极之间传递电子.探讨了pH值、温度、工作电位和抗坏血酸等物质对此传感器生物电催化还原H₂O₂的影响.此生物传感器选择性好、灵敏度高,对H₂O₂线性响应范围为5.0×10^-7～2×10^-4 mol/L,响应时间少于30 s.     

青霉菌m8产半纤维素酶条件及酶性质研究

半纤维素酶可用于造纸工业的生物制浆和废水处理。通过碳、氮源对产胞外半纤维素酶的影响确定了青霉菌m8的适宜培养基 ,即 4 .5 %麦草粉 ,0 .5 0 % (NH4 ) 2 SO4 ,0 .1%KH2 PO4 ,0 .0 5 %MgSO4 ·7H2 O ,0 .0 3%NaCl,0 .33%Tween80 ,0 .15 %CaCO3。在上述培养基中 ,2 8℃恒温振荡 (12 0r min)培养 4 - 6d ,半纤维素酶活力可达 80u ml左右。用DNS法研究了该酶的性质。结果表明 ,其最适pH值为 4 .5 ,最适反应温度为 5 5℃ ;表观Km值为 4 .6× 10 - 2 g L ;该酶的耐热性比较强 ,可被K+ 、Ca2 + 、Mg2 + 离子激活 ,而被Ag+ 、Fe3+ 和Cu2 + 离子抑制。