住院8天过敏性紫癜患儿肠道菌群的变化研究

目的研究住院1～8d过敏性紫癜患儿肠道菌群的变化。方法（1）提取43例过敏性紫癜患儿（观察组）住院1～8d和43例健康儿童（对照组）粪便标本的细菌DNA,测量并比较对照组和观察组标本细菌的DNA-A240值;（2）采用16SrRNA／DNA荧光定量PCR技术进行对照组和观察组粪便标本中双歧杆菌、乳酸杆菌和大肠埃希菌的定量分析和比较。结果（1）粪便标本中细菌的DNA-A240值分别为：对照组d0（3605．9±1096．9）ng／μl,观察组治疗前1天d1（2225．9±616．1）ng／μl,治疗第3～4天d2（1780．3±547．4）ng／μl,治疗第7～8天d3（2055．6±570．2）ng／μl;对照组和观察组治疗前以及观察组治疗不同时期相比,d0与d1差异有显著性（P〈0．05）,d1与d2差异有显著性（P〈0．05）,d1与d3差异有显著性（P〈0．05）,d2与d3差异无显著性（P〉0．05）;（2）粪便标本中3种细菌量的对数值比较差异均有显著性（P〈0．05）。观察组双歧杆菌和乳酸杆菌数量在治疗第3—4天较低,第7—8天有所回升;大肠埃希菌的对数值亦有减少,治疗第3—4天较低,但第7～8天没有明显回升。结论（1）过敏性紫癜患儿肠道菌群总DNA-A260量和健康儿童相比有减少;（2）过敏性紫癜患儿肠道双歧杆菌、乳酸杆菌和大肠埃希菌量与正常儿童相比有下降,治疗的第7天有回升的趋势。过敏性紫癜患儿肠道益生菌数量减少可能影响其发病和转归。     

新生儿胆汁淤积症患儿肠道菌群与分娩方式及喂养方式的关系

目的分析新生儿胆汁淤积症患儿肠道菌群特征及其与分娩方式、喂养方式的关系。方法选择2018年6月至2019年6月我院收治的40例新生儿胆汁淤积症患儿作为观察组,选择同期入院的120例健康新生儿作为对照组,比较两组对象肠道菌群分布情况。各组对象进一步按不同喂养方式分为母乳喂养组和混合喂养组,按不同分娩方式分为阴道分娩组和剖宫产组,分析各组新生儿肠道菌群与分娩方式、喂养方式的相关性。结果观察组新生儿粪便中双歧杆菌、乳杆菌数量及双歧杆菌/大肠埃希菌值[(7.53±0.57)lg copies/g、(8.12±0.71)lg copies/g、1.06±0.18]明显少于对照组[(9.58±0.64)lg copies/g、(8.64±0.75)lg copies/g、1.39±0.22],大肠埃希菌数量[(7.28±0.85)lg copies/g]明显多于对照组[(6.81±0.63)lg copies/g]。观察组中,阴道分娩与剖宫产分娩患儿粪便中双歧杆菌、乳杆菌、大肠埃希菌数量及双歧杆菌/大肠埃希菌值差异均有统计学意义(P0.05)。观察组中,母乳喂养与混合喂养新生儿粪便中双歧杆菌、乳杆菌、大肠埃希菌数量及双歧杆菌/大肠埃希菌值差异均有统计学意义(P0.05)。结论新生儿胆汁淤积症患儿肠道菌群存在异常,且受到分娩方式和喂养方式的影响。     

荧光定量PCR检测大剂量甲氨喋呤化疗急性淋巴细胞白血病患儿肠道乳酸杆菌和大肠埃希菌量的变化

目的研究大剂量甲氨喋呤（HDMTX）化疗急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿肠道菌群的变化,并和健康儿童进行比较。从微生态的角度分析HDMTX化疗与肠道菌群变化的相互关系,为微生态制剂用于HDMTX化疗副作用的预防和治疗提供依据。并探讨荧光定量PCR技术在该领域应用的实用性和可行性,以便推广应用。方法收集36例HDMTX化疗前后ALL患儿及36例健康对照组儿童的粪便标本,并提取目标细菌DNA,用分子生物学专用分光光度仪进行DNA的A值测量。用细菌的16S rRNA/DNA序列设计乳酸杆菌和大肠埃希菌的引物,行常规PCR完成细菌的定性,然后取准确定量的两种细菌DNA,经系列稀释后做荧光定量PCR,制作出标准曲线,待测样品同时进行荧光定量PCR反应,并和标准曲线进行比较,获得各样品中两种细菌的量。结果HDMTX化疗ALL患儿的肠道菌群与健康儿童比较发生了明显的变化,患儿化疗前1天、化疗后第3天、化疗后第7天和对照组儿童的粪便标本中细菌的A260值分别为（2436.3±768.6）、（1496.5±577.1）、（1966.6±598.3）和（3479.3±870.5）ng/μl;患儿化疗前1天、化疗后第3天、化疗后第7天和对照组的肠道乳酸杆菌数量的对数值分别为（8.10±0.43）、（6.73±0.45）、（7.45±0.43）和（9.12±0.50）ng/μl,而大肠埃希菌数量的对数值分别是（6.62±0.4）、（5.96±0.42）、（7.02±0.42）和（7.52±0.43）ng/μl。对照组和ALL组,ALL组化疗前和后,大便标本中乳酸杆菌和大肠埃希菌数量的对数值差异均有非常显著性（P〈0.01）。结论HDMTX化疗ALL患儿肠道中乳酸杆菌和大肠埃希菌的数量较正常对照组明显减少。在HDMTX化疗治疗过程中,采用微生态制剂,调整细菌比例,使肠道内益生菌的数量尽快恢复正常是必要的。16S rRNA/DNA荧光定量PCR技术在临床细菌定量分析中切实可行。     

低出生体重儿肠道微生态构建影响因素的 动态监测

目的动态监测低出生体重儿肠道菌群,分析不同体重、不同喂养方式及疾病状态等因素对患儿肠道微生态的影响,为规范临床低出生体重儿宫外营养支持措施及治疗手段提供依据。方法应用16SrRNA荧光定量PCR技术检测正常新生儿和低出生体重儿生后第1、3、7天粪便中大肠埃希菌、肠球菌、乳杆菌及双歧杆菌的含量。结果 (1)在生后7d内,无论正常新生儿还是低出生体重儿,其粪便中大肠埃希菌、肠球菌、乳杆菌和双歧杆菌的含量均随日龄的增加而增加,且生后7d内正常新生儿的粪便中大肠埃希菌、肠球菌、乳杆菌和双歧杆菌的含量均显著高于低出生体重儿(P0.05),正常新生儿生后7d内粪便中各细菌的增长率均高于低出生体重儿。(2)体重2 000~2 500g的低出生体重儿粪便中大肠埃希菌和肠球菌在各日龄中的含量明显高于体重2 000g的新生儿(P0.05);同时其粪便中双歧杆菌和乳杆菌含量在3日龄和7日龄阶段明显高于体重2 000g的新生儿(P0.05)。(3)3日龄和7日龄母乳喂养组的低出生体重儿粪便中双歧杆菌和乳杆菌含量明显高于乳制品喂养组(P0.05);且母乳喂养组新生儿生后7日内粪便中大肠埃希菌、乳杆菌和双歧杆菌含量的增长率均高于乳制品喂养组,尤其是双歧杆菌的增长率(126.49%vs 54.81%)。(4)合并并发症的3日龄和7日龄的低出生体重儿,粪便中乳杆菌和双歧杆菌含量均明显低于无合并症的低出生体重儿(P0.05);且无并发症组的低出生体重儿其粪便中肠球菌、乳杆菌和双歧杆菌的增长率均高于有并发症组的低出生体重儿,大肠埃希菌增长率则低于有并发症组。结论低出生体重儿肠道菌群的定植时间晚且数量少,体重、喂养方式及有无并发症是影响新生儿肠道菌群丰度的重要因素。母乳喂养可促进低出生体重儿肠道中益生菌的定植。疾病因素会导致肠道菌群丰度的降低,使肠道菌群紊乱,其程度可能与病情的严重程度相关。     

应用实时荧光定量PCR定量检测溃疡性结肠炎肠道大肠埃希菌、乳酸杆菌及双歧杆菌属的变化

目的应用实时荧光定量PCR（RT—PCR）法对溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）患者粪便中大肠埃希菌、乳酸杆菌及双歧杆菌属的数量进行定量检测分析。方法根据细菌的16SrDNA基因序列设计大肠埃希菌、乳酸杆菌及双歧杆菌属的种属特异性引物。收集溃疡性结肠炎患者及正常对照者新鲜粪便标本各35例,从待测粪便标本中提取细菌基因组DNA,进行实时荧光定量PCR反应,定量分析不同细菌的数量。结果正常对照组与病例组粪便中细菌数量分别为大肠埃希菌（4．62±1．10;5．27±1．02）、乳酸杆菌属（4．99±0．75;4．65±0．95）、双歧杆菌属（5．07±0．95;4．93±0．99）,病例组大肠埃希菌数量明显增多（t=2．540,P=0．013）,而乳酸杆菌及双歧杆菌属数量与正常组比较差异无统计学意义（t1=0．488,P,=0．530;t2=-0．533,P：=0．596）。结论溃疡性结肠炎患者粪便中大肠埃希菌的数量较正常对照明显增多,而乳酸杆菌及双歧杆菌属的数量无明显变化,提示大肠埃希菌与溃疡性结肠炎的发病或复发有关系,而乳酸及双歧杆菌属与此病的关系有待进一步研究。     

益气健脾中药颗粒剂对早期断奶仔猪肠道菌群的影响

目的研究中药复方颗粒剂对断奶仔猪肠道微生态的影响。方法实验选用人工感染大肠埃希菌引起腹泻的28日龄断奶仔猪54头,随机平均分为3组,每组3个重复,Ⅰ组抗生素治疗组、Ⅱ组中药复方颗粒剂治疗组、Ⅲ组不用任何药物治疗的空白对照组。分别于用药后第14天时,每组随机抽取1头屠宰,无菌采集空肠,回肠和盲肠内容物,利用平板计数法测定各肠段大肠埃希菌、双歧杆菌和乳酸杆菌数量。结果 Ⅰ组双歧杆菌、乳酸杆菌及大肠埃希菌的数量均显著小于Ⅲ组（P〈0.05）;Ⅱ组双歧杆菌和乳酸杆菌的数量显著大于Ⅲ组（P〈0.05）,大肠埃希菌数量显著小于Ⅲ组（P〈0.05）; n组双歧杆菌和乳酸杆菌的数量极显著大于Ⅰ组（P〈0.01）,Ⅱ组与Ⅰ组大肠埃希菌数量差异无统计学意义（P〉0.05）。结论该中药复方颗粒剂具有显著增加断奶仔猪肠道中双歧杆菌和乳酸杆菌的数量,降低大肠埃希菌数量,减少腹泻频率的作用。     

实时荧光定量PCR检测非酒精性脂肪性肝炎新西兰兔肠道内菌群的变化

目的 应用实时荧光定量-聚合酶链反应法(fluorescent real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法对高脂喂养诱导非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)新西兰兔的粪便中大肠埃希菌、乳酸杆菌及双歧杆菌属的数量进行定量检测分析.方法 14只雄性新西兰兔随机分为模型组和对照组,分别用普通饲料和高脂饲料喂养12周,取粪便提取细菌组DNA,根据细菌的16S rDNA基因序列设计大肠埃希菌、乳酸杆菌及双歧杆菌属的种属特异性引物,进行实时荧光定量PCR反应,定量分析不同细菌的数量.结果 模型组动物病理学检测肝细胞脂肪变性,提示模型成功.对照组与模型组动物粪便中细菌数量分别为大肠埃希菌(11.48 ±1.09,7.39 ±0.81)、乳酸杆菌(4.94±0.95,5.65 ±0.91)、双歧杆菌属(4.07 ±0.97,6.45±0.90),经统计学分析表明模型组较对照组大肠埃希菌数量明显增多(t=-3.282,P =0.013),而乳酸杆菌、双歧杆菌属数量变化无统计学意义(t1=-1.204,P1=0.268;t2=0.423,P2=0.683).结论 NASH模型组粪便内大肠埃希菌数量较正常组增多,提示大肠埃希菌数量与非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)有关,而乳酸杆菌及双歧杆菌数量无明显变化,其与NAFLD的关系有待进一步研究.     

喂养不耐受早产儿肠道菌群的研究

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术从微生物生态学的角度分析比较喂养不耐受(feeding intolerance,FI)早产儿与对照组早产儿肠道菌群的变化。方法以2016年3月至2017年3月于我院儿科新生儿病房确诊的FI早产儿为FI组。选择与FI组胎龄、日龄、出生体重相匹配的非FI早产儿作为对照组。采集出现FI的早产儿和同时段健康早产儿的粪便标本,进行Real-time PCR表达谱分析,比较两组早产儿肠道菌群的差异。结果临床资料统计分析显示FI组和对照组在性别构成、胎龄、出生体重、生产方式和喂养方式方面差异无统计学意义。Real-time PCR表达谱分析结果显示FI组早产儿肠道大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌明显高于对照组,粪肠球菌、乳杆菌和双歧杆菌明显低于对照组。结论肠道菌群结构的改变参与早产儿FI的发生,该研究结果从微生物学角度为临床儿科医师认识早产儿FI的发生机制和治疗提供了新的思路。     

乳酸杆菌对大鼠细菌性阴道感染动物模型疗效观察

目的探讨乳酸杆菌对大鼠阴道菌群抑制及阴道菌群的调理作用。方法通过大鼠阴道混合感染葡萄球菌和大肠埃希菌的动物模型,以阴道分泌物的菌群分析和阴道黏膜炎症的治愈程度为指标,观察乳酸杆菌治疗组的治疗效果,用乳酸杆菌菌液冲洗治疗来去除大肠埃希菌和葡萄球菌在大鼠阴道的定植。结果通过各组大鼠阴道冲洗液检出的平均对数值比较,乳酸杆菌治疗组的大鼠阴道内大肠埃希菌和葡萄球菌的数量明显较对照组的数量减少（P〈0．05）,而且治疗组黏膜炎症的治愈程度显著好于对照组。结论乳酸杆菌能有效地去除大肠埃希菌和葡萄球菌的大鼠阴道定植和改善大鼠外阴的炎症症状。     

喂养不耐受早产儿大便大肠埃希菌、粪肠球菌和肺炎克雷伯菌的数量变化

目的观察早产儿喂养不耐受肠道中大肠埃希菌、粪肠球菌和肺炎克雷伯菌的变化。方法采用实时荧光定量PCR技术,分别对15例喂养不耐受早产儿和15例喂养耐受早产儿（对照组）生后第一天,出现喂养不耐受,喂养不耐受恢复后大便标本中的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和粪肠球菌进行定量分析。结果喂养不耐受组中大肠埃希菌的拷贝数对数值（lg copies／g）分别为2．62±0．22、5．47±1．28、3．04±0．70,对照组分别为2．56±0．19、2．82±0．4、2．80±0．39;肺炎克雷伯菌的拷贝数对数值（1gcopies／g）分别为4．37±0．22、6．56±O．27、4．17±0．27,对照组分别为4,35±0．22、4．19±0．14、4．15±0．25;粪肠球菌的拷贝数（copies／g）分别为79．17±93．46、42。84±47．57、101。68±43．78,对照组分别为70．16±78．41、740．05±657．71、104．57±38．39。出现喂养不耐受时,两组的3种细菌拷贝数比较差异具有统计学意义（P〈0．05）,而出现之前和恢复后两组细菌拷贝数差异无统计学意义（P〉0．05）。结论喂养不耐受时大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌数量显著增高,可能参与喂养不耐受的发生,而粪肠球菌降低,可能起保护作用。     

正常和不同疾病儿童肠道细菌DNA含量的动态测量

目的了解正常和不同疾病儿童住院期间肠道细菌量的变化。方法收集正常儿童、足月儿、早产儿、急性淋巴细胞白血病(ALL)、过敏性紫癜(HSP)和支气管肺炎患儿住院不同时间的粪便标本,提取标本中细菌DNA,用分子生物学专用分光光度仪测量所收集标本的细菌DNA-A260值(ng/μL)。结果粪便标本中细菌的DNA-A260值足月儿组生后第1、3和7天的分别为476.53±83.52、825.38±95.84和952.73±95.57。早产儿组生后第1、3和7天的分别为377.20±93.40、560.10±93.56和710.00±94.02。ALL患儿大剂量甲氨蝶呤(HDMTX)化疗前1天、化疗后第37、天和对照组儿童的分别为2436.3±768.61、496.5±577.1、1966.6±598.3和3479.3±870.5。HSP患儿治疗前1天、治疗后第3、7天和对照组儿童的分别为2225.9±616.1、1780.3±547.42、055.6±570.2和3605.9±1096.9。支气管肺炎患儿治疗后第1、3、7天和对照组分别为2353.17±868.71、1448.47±534.81、1905.97±703.52和3433.90±897.22。结论正常儿童粪便细菌DNA-A260值比ALL、HSP和支气管肺炎患儿高,足月儿比早产儿高。治疗患儿在治疗早期细菌的DNA-A260值减低明显,治疗后期有逐渐恢复至正常的趋势。结果提示不同疾病患儿在住院和治疗期间的肠道菌群有紊乱,其紊乱程度各有不同。     

Development of intestinal lactobacilli in normal piglets

The development of intestinal Lactobacillus spp. in 18 normal piglets from six litters was investigated from 1 to 45 d after birth. Faecal Lactobacillus strains isolated from piglets and their dams were identified at species and biovar levels on the basis of carbohydrate fermentation. A definite pattern was observed in the changes of four species and 20 biovars of lactobacilli appearing in faeces, with growth of the piglets. Lactobacillus reuteri colonized the animals on the first day of birth. The Lact. acidophilus group appeared 1 week after birth and maintained high levels in the intestine. Biovars B, C and E of Lact. reuteri were recovered as major biovars on the first to fourteenth days after birth. In the third and fourth weeks after birth, however, biovars F and G of Lact. reuteri were mainly recovered from piglet faeces. By the seventh week, biovars B, C and E predominated again in the intestine. No change in the composition of species and biovars of the genus Lactobacillus in the dams was detected.     

Intestinal Microbiota is Different in Women with Preterm Birth: Results from Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism Analysis

Preterm birth is a leading cause of perinatal morbidity and mortality. Studies using a cultivation method or molecular identification have shown that bacterial vaginosis is one of the risk factors for preterm birth. However, an association between preterm birth and intestinal microbiota has not been reported using molecular techniques, although the vaginal microbiota changes during pregnancy. Our aim here was to clarify the difference in intestinal and vaginal microbiota between women with preterm birth and women without preterm labor. 16S ribosomal ribonucleic acid genes were amplified from fecal and vaginal DNA by polymerase chain reaction. Using terminal restriction fragment length polymorphism (T-RFLP), we compared the levels of operational taxonomic units of both intestinal and vaginal flora among three groups: pregnant women who delivered term babies without preterm labor (non-PTL group) (n = 20), those who had preterm labor but delivered term babies (PTL group) (n = 11), and those who had preterm birth (PTB group) (n = 10). Significantly low levels of Clostridium subcluster XVIII, Clostridium cluster IV, Clostridium subcluster XIVa, and Bacteroides, and a significantly high level of Lactobacillales were observed in the intestinal microbiota in the PTB group compared with those in the non-PTL group. The levels of Clostridium subcluster XVIII and Clostridium subcluster XIVa in the PTB group were significantly lower than those in the PTL group, and these levels in the PTL group were significantly lower than those in non-PTL group. However, there were no significant differences in vaginal microbiota among the three groups. Intestinal microbiota in the PTB group was found to differ from that in the non-PTL group using the T-RFLP method.     

腹腔镜手术联合微生态制剂对结直肠癌患者肠道菌群和肠道屏障功能的影响

目的观察腹腔镜手术联合微生态制剂对结直肠癌患者肠道菌群和肠道屏障功能的影响,为临床治疗提供依据。方法选择我院2016年12至2018年12月收治的84例结直肠癌患者为研究对象。入选患者分为观察组和对照组。观察组患者采用腹腔镜手术联合口服益生菌治疗,对照组患者单纯采用腹腔镜手术治疗。比较两组患者术后恢复情况、并发症情况、肠道菌群变化和肠道屏障功能。结果观察组患者第1次完全进食时间、术后住院总时间(d)均短于对照组(9.54±0.52 vs 11.56±0.24、11.61±2.14 vs 14.94±3.65,P<0.05);观察组患者术后并发症总发生率低于对照组(9.5%vs 28.6%,P<0.05)。观察组患者术后第1次排便时肠道乳杆菌、双歧杆菌数量(lg CFU/g)大于对照组(7.21±0.35 vs 6.78±0.21、7.12±0.23 vs 6.84±0.25,P<0.05),大肠埃希菌、球杆菌数量低于对照组(8.12±0.56 vs 9.55±0.54、8.24±0.24 vs 8.85±0.25,P<0.05)。观察组患者术后第15天肠道乳杆菌、双歧杆菌数量大于对照组(9.51±0.56 vs 8.21±0.45、9.61±0.44 vs 7.85±0.23,P<0.05),大肠埃希菌、球杆菌数量低于对照组(7.22±0.36 vs 9.15±0.35、7.68±0.54 vs 8.25±0.55,P<0.05)。观察组患者术后第15天粪便sIgA水平(mg/g)大于对照组(1.21±0.13 vs 1.05±0.14,P<0.05);血清D-乳酸、尿L/M水平(μg/mL)低于对照组(5.48±0.85 vs 0.62±0.54、3.24±0.28 vs 2.68±0.54,P<0.05)。结论腹腔镜手术联合益生菌制剂可纠正并改善结直肠癌患者术后肠道微生态失调,修复并增强肠道屏障功能。     

乳酸杆菌对攻毒小鼠的保护作用和对肠道菌群的影响

将含有乳酸杆菌Lactobacillus casei Zhang的悬浮液分组饲喂小鼠,然后分别用E.coliO157和K88攻毒观察发病情况。攻毒4d后取对照组和喂菌组未死亡小鼠的肠内容物,用选择性培养基分离纯化大肠杆菌和乳酸菌,提取分离到菌株的总DNA,进行ERIC-PCR扩增分析。发现灌服L.casei Zhang可以降低攻毒后小鼠的死亡率,在停止饲喂乳酸菌的第4d从小鼠肠道内分离到L.casei Zhang,从饲喂组未分离到E.coliO157和K88,喂L.casei Zhang使小鼠肠道中大肠杆菌总数极显著低于对照组。表明所饲喂的乳杆菌可以在小鼠肠道内定殖并对小鼠起到保护作用。     

早期肠内免疫微生态营养在重症肺炎治疗中的应用观察

目的研究早期肠内免疫微生态营养对重症肺炎肠道菌群分布及肠道黏膜屏障的影响,为重症肺炎患者选择可靠的营养支持方式提供依据。方法选取2017年1月至2019年1月在我院接受治疗的82例重症肺炎患者。采用随机数字表法随机分为观察组(n=41)与对照组(n=41)。所有患者入院即采用常规治疗,对照组患者在常规治疗基础上建立全胃肠外营养(TPN),观察组患者给予早期肠内营养(EN)及肠内免疫微生态营养。详细记录两组患者基线资料。记录观察组与对照组干预第0、7、14 d时活菌数的分布情况,分别计算双歧杆菌、粪肠球菌、大肠埃希菌、弯曲杆菌、乳酸杆菌活菌数,并进行组间比较。检测血清内毒素、D-乳酸和二胺氧化酶(DAO)水平。比较两组的预后情况。结果治疗7 d、14 d后,观察组患者的双歧杆菌与乳酸杆菌数量显著高于对照组,而治疗7 d后观察组患者大肠埃希菌数量显著低于对照组,治疗14 d后,观察组患者大肠埃希菌、粪肠球菌、弯曲杆菌数量显著低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗第7 d,观察组血清内毒素、D-乳酸和DAO水平低于对照组,差异具有有统计学意义(P<0.05)。观察组弥漫性血管内凝血、呼吸衰竭、心力衰竭、菌血症等严重并发症的发生率低于对照组(P<0.05)。观察组无死亡,对照组1例死亡。结论早期肠内免疫微生态营养能够调节肠道菌群,保护肠道黏膜屏障,促进疾病康复,减少感染和并发症。