影响九华山千层塔石杉碱甲含量的主要环境因子分析

为了确定九华山千层塔[Huperzia serrata（Thunb．）Trev．]的最佳采收期和采收部位,根据千层塔不同部位的石杉碱甲含量及各环境因子的变化趋势,运用灰色关联分析法对影响九华山千层塔石杉碱甲含量的主要环境因子进行了分析。结果表明,千层塔各部位的石杉碱甲含量不同,其中根中的含量最低,叶和茎中的含量较高;4月份叶和茎中的石杉碱甲含量最高,分别为0．0559％和0．0444％。影响九华山千层塔石杉碱甲含量的主要环境因子是根际土壤有机质含量、全氮含量和全磷含量,温度和降水量与石杉碱甲含量变化的相关性最小。研究结果表明,在九华山,千层塔的最佳采收期为4月份,最佳采收部位是叶和茎。     

石杉科植物石杉总碱含量的测定及基于紫外光谱的除趋势对应分析

对来自浙江、福建境内石杉科植物蛇足石杉（Huperzia serrata）、柳叶马尾杉（Phlegmariurus cryptomerianus）10个不同地理居群的石杉总碱含量进行了测定．并基于紫外光谱,对它们的表型分化进行了除趋势对应分析。结果表明：①石杉科这两种植物叶片的石杉总碱含量普遍高于茎中的含量;②来自浙江磐安的蛇足石杉居群的叶、茎石杉总碱含量都明显高于其它居群。可以选择该居群作为栽培蛇足石杉的种源;③DCA排序发现,产自磐安的蛇足石杉样品,特别是叶的提取液,其紫外光谱明显不同于其它样品．表明紫外光谱法能够用于鉴别石杉总碱含量较高的蛇足石杉药材。     

武夷山脉石杉科植物石杉碱甲含量的研究

石杉植物因所含Hup A为高效、可逆、高选择性的中枢性乙酰胆碱酯酶抑制剂而受关注。实地采集标本并用改进的HPLC法测定了武夷山脉4种石杉科植物及不同居群间的石杉碱甲(Hup A)含量。结果显示石杉碱甲在长柄石杉、四川石杉、有柄马尾杉和华南马尾杉中均有分布,其中以有柄马尾杉中含量最高,达0.1510%;含量最低的是四川石杉,为0.016%。该地区优势种长柄石杉（千层塔）11个居群的石杉碱甲含量测定显示武平县梁野山和三元区中村乡两个居群含量较高,分别为0.0636%和0.0519%。对石松科部分种进行石杉碱甲测定,认为藤石松等不含石杉碱甲。结果表明武夷山脉地区拥有优良的石杉碱甲植物资源。     

药用植物蛇足石杉研究新进展

蛇足石杉[Huperzia serrata（Thunb．）Trey．]是石杉科石杉属多年生小型草本植物,土生、附生或生于苔藓层中,喜阴凉潮湿环境。蛇足石杉含石杉碱甲,为目前治疗老年痴呆等疾病的特效药。对蛇足石杉的分类学、生物学特性（形态学、生态学、生理学与共生真菌研究）、繁殖与栽培、药用成分及含量测定等方面的研究新进展进行综述。并对其应用与保护前景进行展望。     

HPLC法检测蛇足石杉内生真菌胶胞炭疽发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙的含量

建立了高效液相色谱(HPLC)测定蛇足石杉(Huperzia serrate)内生真菌胶胞炭疽发酵液中石杉碱甲(Huperzina A)和石杉碱乙(Huperzine B)含量的方法,并以此方法检测胶胞炭疽发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙含量的积累。内生真菌发酵液经氯仿萃取、甲醇溶解、过滤后进行高效液相检测分析,选用Agilent Eclipse plus-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.015 mol/L乙酸铵(p H 6.8)和甲醇溶液(70∶30)为流动相进行等度洗脱,流速1 mL/min,检测波长为308 nm,连续检测内生真菌胶胞炭疽发酵液中第6–15天石杉碱甲和石杉碱乙的含量积累。结果表明,发酵提取液中的石杉碱甲和石杉碱乙可在25 min内进行很好的分离和分析,石杉碱甲在1.50-48.00μg/mL范围内线性关系良好(相关系数r为0.999 5),石杉碱乙在0.25-7.50μg/mL范围内线性关系良好(相关系数r为0.999 7),石杉碱甲和石杉碱乙的平均加标回收率分别为106.83%、108.06%,相对标准偏差(RSD)分别为3.34%、3.60%。该方法简便、快速、精密度高、结果准确,适用于内生真菌发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙含量检测。在发酵过程中,内生真菌发酵液中石杉碱甲和石杉碱乙的含量呈现先增后减,随后有所增加继而又减少的趋势。石杉碱甲和石杉碱乙的含量分别在内生真菌发酵第14天、第8天达到最高,分别为12.417 0μg/mL、4.660 3μg/mL。该方法学的建立为内生真菌胶胞炭疽合成石杉碱甲与石杉碱乙的机制研究提供了检测手段,从而有利于药物新资源的开发。     

蛇足石杉中产石杉碱甲内生真菌的分离和鉴定

【目的】从野生蛇足石杉(Huperzia serrata)中分离筛选产石杉碱甲的内生真菌。【方法】采用薄层层析及高效液相色谱法对内生真菌代谢产物进行测定和分析以期分离获得产石杉碱甲菌株,运用形态及ITS序列分析方法对产石杉碱甲菌株进行鉴定,并利用连续传代方法考察菌株遗传稳定性。【结果】经筛选获得一株产石杉碱甲内生真菌NSH-5,经形态学鉴定及ITS序列分析鉴定为轮枝镰孢菌(Fusarium verticillioides),其石杉碱甲产量为11.76 mg/100 m L,菌株经20次连续传代后遗传稳定。【结论】NSH-5菌株为一株具有产石杉碱甲能力的轮枝镰孢菌,该菌株的发现为生物合成石杉碱甲提供了新的菌种资源。     

蛇足石杉产石杉碱甲内生真菌SNZ-12的分离及鉴定北大核心CSCD

为了获取具有应用价值的产石杉碱甲内生菌,本文从蛇足石杉分离得到60株内生真菌,采用高效液相色谱法和质谱法分别检测各个真菌的提取物,发现内生真菌SNZ-12的提取物具有与石杉碱甲标品相近的色谱特征峰和保留时间(8. 994 min)以及相同的质谱特征峰((M+H)+=243. 1),说明内生真菌SNZ-12可以产石杉碱甲,其石杉碱甲产量约为1. 01 mg/L;并通过结合内生真菌SNZ-12的形态特征和18S r DNA序列分析,将其鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。本文结果为利用微生物发酵生产石杉碱甲研究提供了潜在的菌种资源。     

蛇足石杉原叶体的培养及孢子体的诱导

以蛇足石杉孢子囊为材料培养得到蛇足石杉原叶体,进一步对原叶体进行增殖培养并诱导产生蛇足石杉孢子体。结果表明,适合蛇足石杉原叶体增殖的培养基是无激素的MS培养基,在该培养基上培养60d,原叶体的增殖倍数达到131．1;较高浓度的外源激素对原叶体的增殖有抑制作用,而低浓度的外源激素对原叶体的增殖影响不大;原叶体在无激素培养基上培养90d,孢子体的诱导频率为4．0％;通过HPLC检测蛇足石杉原叶体中石杉碱甲的含量为0．0059％,是野生孢子体中含量的0．25倍。     

氨基酸对蛇足石杉叶状体增殖及石杉碱甲积累的影响

通过在培养基中添加不同浓度的天冬氨酸、赖氨酸和色氨酸, 探究其对蛇足石杉(Huperzia serrata)叶状体生长、石杉碱甲积累及SOD酶活性的影响。结果表明: 添加天冬氨酸后, 叶状体干重生物量比对照提高18.50%-25.75%, 石杉碱甲含量亦明显高于对照, 其最适天冬氨酸浓度为0.5 mmol·L^-1; 添加1 mmol·L^-1色氨酸后, 叶状体相对增殖率显著高于对照, 但其石杉碱甲积累量略低于对照; 添加赖氨酸后, 叶状体相对增殖量、干重生物量及石杉碱甲含量均低于对照。添加一定浓度的天冬氨酸使SOD酶活性适当提高, 同时叶状体石杉碱甲积累量增加, 而长期保持高水平的SOD酶活性对叶状体积累石杉碱甲不利。     

蛇足石杉离体培养产生有效成分的研究

本研究报道了以庐山野生蛇足石杉成年株新生枝茎为外植体,运用植物离体培养技术获得了产生石杉碱甲的叶状体。实验结果表明:适宜叶状体发生的培养基为6,7-V+IAA 0.5 mg/L,诱导率达50%;叶状体增殖的最佳培养基是无激素的MS(其中蔗糖用量20 g/L),叶状体继代培养55 d,其相对增殖率达1362.6%(即收获量是接种量的14.6倍)。通过薄层层析(TLC)和高效液相(HPLC)法检测叶状体提取物中的目标成分,表明本研究建立的叶状体具有累积与原植物相同的有效成分石杉碱甲的能力。     

一株产石杉碱甲的蛇足石杉内生真菌的分离和鉴定

从药用蕨类植物蛇足石杉叶中分离得到53株内生真菌,在马铃薯葡萄糖液体培养基（PDB）中发酵后对内生真菌发酵提取物液进行TLC、HPLC 和ESI-MS检测,结果表明菌株LF40为产石杉碱甲内生菌株,含量达80.1μg/gdcw,并具有体外乙酰胆碱酯酶抑制活性;运用形态学及ITS-rDNA序列分析方法对菌株LF40进行鉴定,确定为黄曲霉Aspergillus flavus LF40。     

Structural Identification of Huperzine G

A new lycopodium alkaloid, huperzine G was isolated from the n-butanol fraction of Huperzia serrata (Thunb.) Trev. The structure of this alkaloid was determined through IR, MS, ID-and 2D-NMR spectral analyses.     

石杉碱庚的结构鉴定

从石杉（Ｈｕｐｅｒｚｉａｓｅｒｒａｔａ（Ｔｈｕｎｂ．）Ｔｒｅｖ．）的正丁醇提取部分分离得到一个新的水溶性石杉类生物碱,通过ＩＲ、ＭＳ、１ＤＮＭＲ和２ＤＮＭＲ确定了其化学结构,命名为石杉碱庚（ｈｕｐｅｒｚｉｎｅＧ）。     

HPLC法分析不同年限及不同部位掌叶大黄9种成分的积累特征

为研究不同年限及部位掌叶大黄9种成分含量及其变化特征。利用HPLC法进行分析,色谱柱为武本C18 (5μm,4.6 mm×250 mm),流动相为甲醇-磷酸水(0.2%),检测波长260 nm,柱温30℃,体积流量1.0 mL/min,进样量10μL。线性范围良好(R^2>0.995),精密度、稳定性、重复性RSD均小于2%,加样回收率97.30%~108.20%。含量分析表明:同一部位,随着年限增加,除根中没食子酸、根茎中大黄素、叶片中大黄酚的含量无变化外,其他8成分的含量均随年限增加而增加或者第4年增加、第5年无显著变化。同一年限,大黄酚-8-O-葡萄糖苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量次序为根>根茎>叶片;3年生芦荟大黄素,4年生没食子酸、番泻苷B叶片中含量与根中大致相等且高于根茎;5年生大黄素-8-O-葡萄糖苷的含量次序为叶片>根茎>根,根与根茎中没食子酸、大黄酚的含量相当且高于叶片。本实验成功建立简便快捷、重现性好的HPLC分析方法,明确了不同年限及部位掌叶大黄9种成分积累特征,为大黄质量评价和药材高效生产提供理论依据。     

Isolation and characterization of endophytic huperzine A-producing fungi from Huperzia serrata

Huperzia serrata is a producer of huperzine A (HupA), a cholinesterase inhibitor (ChEI). Over 120 endophytic fungi were recovered from this plant and screened for Hup-A and nine were found. These nine represented seven different fungal genera with the most significant producer being Shiraia sp. A total of 127 endophytic fungi isolates obtained from the root, stem, and leaf segments of H. serrata were grouped into 19 genera based on their morphological traits and sequence analysis of the internal transcribed spacers (ITS1-5.8S-ITS2), indicating endophytic fungi in H. serrata are diverse and abundant. Aspergillus, Podospora, Penicillium, Colletotrichum, and Acremonium were the frequent genera, whereas the remaining genera were infrequent groups. Overall, 39 endophytic fungi isolates showed acetylcholinesterase (AChE) inhibition in vitro. Nine endophytic fungi isolates from seven distinct genera were capable of producing HupA verified by thin-layer chromatography and reverse-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC). Among the HupA-producing fungi, the yield of HupA produced by the Shiraia sp. Slf14 was 327.8 μg/l in potato dextrose broth, and the fungal HupA was further validated by mass spectrometry (ESI-MS). The present study demonstrated that H. serrata was a fascinating fungal reservoir for producing HupA and other ChEIs.     

从蛇足石杉中超声提取石杉碱甲和石杉碱乙

用正交试验确立了超声提取蛇足石杉生物碱的最佳条件。以石杉碱甲和石杉碱乙回收率为指标,考察了溶剂倍数、溶剂浓度、超声时间、超声功率等因素的影响。结果表明,在室温下超声提取的最优条件为：酸浓度O．8％(v／v),液固比例20：1,超声功率600W,超声15min。三次重复实验所得石杉碱甲和石杉碱乙回收率分别是9r7．3％和93．5％,相对标准偏差分别为1．31％和1．40％(n=3)。与传统的回流提取工艺相比,过程时间从2h缩短为15min,回收率提高了10％以上。     

石杉碱甲结构改造的研究进展

石杉碱甲是高效、高选择性的可逆性乙酰胆碱酯酶抑制剂,是治疗早老性痴呆症的一个有前景的药物.本文概述了石杉碱甲的性质、结构和构效关系,从结构简化、C10、吡啶酮环、脂桥环、环外双键和桥头氨基等方面综述了石杉碱甲结构改造的研究进展,并描述了所得的新型石杉碱甲类似物的抗乙酰胆碱酯酶的生物活性.在已合成的大量的石杉碱甲类似物中,部分类似物的活性优于天然石杉碱甲,石杉碱甲结构改造的研究取得了可喜的进展.