人工合成冬性六倍体小麦的研究

以冬性四倍体硬粒小麦(Triticum durum,2n=28,AABB)为母本与粗山羊草(Aegilops tauschii,2n=14,DD)杂交,得到的单倍体幼胚(n=21,ABD)经组织培养拯救,获得的幼苗经染色体加倍而成为合成小麦(AABBDD)。从中鉴定、筛选出冬性的合成小麦。幼胚仅在1/2 MS培养基上培养,成苗率为75.81%;根据幼胚的发育状态,将发育较完善的幼胚直接接种在1/2 MS培养基上,将发育不良的幼胚先接种于1/2 MS+2 mg/L 2,4-D培养基上进一步养育幼胚,之后视幼胚发育状况再将其转入1/2 MS培养基中培养成苗,此方法的成苗率为92.44%,较前者的成苗率提高了16.63%。染色体加倍在冬季塑膜拱棚内用0.05%秋水仙素进行半根法处理,较容易获得健壮苗,并且分蘖多。     

普通小麦与粗山羊草正,反交的育性研究

普通小麦与粗山羊草杂交需借助幼胚培养方可获得杂种,取授粉１２～１６天的幼胚进行拯拯救,成苗率较高,效果较好。而不同杂交方式对共杂种成胚率、成苗率及思胚拯救率影响很大。以普通小麦为母本,粗山羊草为父杂交时,１５个杂交组合平均杂种成胚率,成苗率及幼胚拯率分别为５．３５％和５８．７３％,而在１２个反交组合中,其平均成胚率,成苗率及幼胚拯救率分别为９８．８８％、１７．１０％和２４．４４％。由此可见,普通小     

低温贮存小麦同球茎大麦杂交未成熟的胚对其植株再生的影响

冷贮处理胚,增加了植株的再生频率。然而,实验表明,这种再生频率提高的原因并不是冷贮本身。而供培养胚的发育状况对植株的再生是重要的因素。个体仅0.2—0.4mm,发育差的小胚,再生成植株的频率较低。随着胚发育状况的改善,植株再生频率明显提高。同时,个体发育已超过0.5mm的胚,低温冷贮对植株再生无明显影响。2℃的低温不影响幼胚     

三七的胚状体发生和植株再生

植物名称:三七(Panax notoginseng)。材料类别:茎、叶柄、叶。培养条件:(1)诱导愈伤组织和胚状体发生培养基为MS 2,4-D0.5—1.0mg/L(单位下同)(2)胚状体成苗培养基为M8 BAI GA1。培养温度26士1℃,愈伤组织诱导至胚状体发生过程为暗培荞;胚状体成苗为光培养,每日光照10小时,光照度1000～1500lx。生长与分化情况:取还未完全展开幼叶的小苗,按常规消毒后,以茎、总叶柄、小叶柄和叶外植体分别切成小段或小块,切段长度为0.5～0.7cm,叶片切块面积为0.7～1.0cm~2,接种于培养基(1)中,     

节节麦×普通小麦杂种的胚援救和胚愈伤组织再生植株

通过活体-离体胚培养和胚愈伤组织培养有效地克服了节节麦(Aegilops tauschii Cosson.)×小麦(Triticum aestivum L.)杂种幼胚的败育,产生了大量的杂种植株。采用活体-离体胚培技术,节节麦×小麦三个组合杂种幼胚的成苗率为55%,是前人所用传统胚培方法成功率的5—20倍。杂种幼胚在添加有2 mg/L 2,4-D的MS培养基上诱导为愈伤组织,经继代产生全能性愈伤组织,继而分化出再生植株。愈伤组织经继代保存150天仍不丧失分化能力。本文还对两种产生杂种的组织培养方法进行了比较研究。     

芸苔属蔬菜小孢子胚状体再生成苗及倍性鉴定

研究影响大白菜、甘蓝和红菜薹小孢子胚状体再生成苗的几个生理因素的结果表明,在1．0％～1．2％的琼脂中胚状体再生成苗率显著高于0．8％琼脂的。4℃处理10d可显著提高大白菜和甘蓝胚状体再生成苗率。大白菜和红菜薹胚状体再生成苗的最适胚龄为20—29d,甘蓝则为30—35d。培养基B,和MS对再生成苗率影响不大。检测3种芸苔属蔬菜小孢子再生植株的倍性结果表明,大白菜和红菜薹小孢子植株自然加倍率较高,均超过70％;甘蓝较低,仅为30％左右。同一物种的不同品种间胚状体再生成苗所需的条件和加倍效率基本一致。     

八倍体小黑麦单倍性胚性细胞无性系的建立

取异源八倍体小黑麦“h739”的植株和花粉植株护颖分化期的幼穗,培养在附加2mg/l2,4-D 的 MS 培养基上,接种后20天形成愈伤组织。诱导频率达98.3%。转分化培养,植株再生率为95.2%。选出了 HC-2、HC-3、HC-4、HC-5和 HC-0 5个无性繁殖系,这些系经892天的长期继代培养,植株再生率仍保持在90%以上。HC-2、HC-3经细胞学观察表明,大部分细胞为单倍体(2n=28)。组织学和电镜观察表明 HC-3系是由不同发育阶段的胚状体组成。     

玉米幼胚高效再生系统的建立

建立了玉米幼胚高效再生系统。经研究发现,苏玉1号、农大3138、农大108的幼胚培养在含有2,4－D（2.5mg/L）的IM培养基上后,大多数幼胚能愈伤化并增大,形成基部相连、上部分开的微芽结构;微芽结构在转移到BM培养基上后,形成小植株;进一步转移到RM培养基上,它们长根并形成完整杆株。玉米幼胚高效再生植株与下列因素有关：玉米基因型、幼胚大小、幼胚长芽至分化时间、6－BA、IBA、Gelrite。不同品种玉米再生能力有显著差异,幼胚大小在1－2mm之间再生能力强,幼胚长芽至分化时间4－6d最好。激素6－BA浓度在0.5-0.6mg/L之间有利于微芽形成小植株,IBA浓度在0.6-1.0mg/L促进生根。Gelirte可代替琼脂粉用于玉米生根。     

小麦—簇毛麦杂种幼胚无性系的建立及植株再生的研究

普通小麦与簇毛麦杂交十分困难,得到的植株很少。然而通过杂种幼胚无性系培养,不但能获得大量的再生植株,而且利用愈伤组织能较长时间保存杂种种质。经过继代培养十个月共九代,由四个杂种幼胚的愈伤组织获得试管苗1957株,其中秋水仙碱处理1350株,成活1122株。套袋自交后获种子664粒,并获得自然授粉种子508粒。对幼胚愈伤组织和再生植株根尖进行了细胞学观察,绝大多数染色体数目为2n=28,变异率分别为33.04%和12.90%。愈伤组织保存一年后,仍有很强的分化能力,幼苗分化率为85%。     

小麦不同生理状态的幼穗和幼胚盾片与诱导分化能力关系的研究

用植物组织培养的方法,研究了冬小麦品种鄂恩1号和品系鄂55072不同生理状态的幼穗和幼胚盾片与诱导分化的关系。结果表明,长度在0.4-2.0cm间的幼穗和直径在0.4-1.5mm间的盾片随生理状态不同,其诱导和分化频率有明显的差异,幼嫩的材料再生频率较高。经SAS统计分析,发现0.5-1.0cm长的幼穗和直径为0.4-1.1mm的盾片是处于诱导分化的最佳生理时期的实验材料,平均每个胚性愈伤组织的植株再生分别达到3.17和5.63株。通过比较幼穗和幼胚盾片的植物组织培养结果,发现幼胚盾片比幼穗愈伤组织出现早,生长快,植株再生绿苗率高,这表明小麦幼胚盾片是较好的植物组织培养的材料。     

通过和玉米杂交诱导硬粒小麦单倍体

硬粒小麦（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ ｄｕｒｕｍ Ｄｅｓｆ．）ＤＲ１４７授以超甜玉米（Ｚｅａ ｍ ａｙｓ Ｌ．） ｓｓ ７７００的花粉后,在８３．４％ 的柱头上观察到花粉萌发及花粉管长入胚囊,有９．９％ 的子房发生了卵细胞的单受精,１．９％ 的子房发生了中央细胞的单受精,３２．７％ 的子房发生了双受精。尽管双受精后可同时形成胚和胚乳,但胚乳往往发育迟缓,甚至败育。硬粒小麦×玉米形成的杂合子核型高度不稳定,在最初的几次细胞分裂中,来自父本玉米的染色体逐步被排除,最后形成硬粒小麦单倍体胚。在授以玉米花粉４ ｈ 后用１００ ｐｐｍ ２,４－Ｄ溶液浸蘸硬粒小麦穗部,可以有效地促进幼胚在缺乏胚乳或胚乳败育情况下的生长和发育。授粉９—１３ ｄ 后由５３３个硬粒小麦子房解剖出２５个胚,得胚率为４．７％ 。通过幼胚拯救获得１１棵正常植株,植株获得率为２．１％ 。根尖细胞染色体计数表明,它们为单倍体（２ｎ＝ ２ｘ＝ １４）。     

玉米幼胚高效再生系统的建立

建立了玉米幼胚高效再生系统.经研究发现,苏玉1号、农大3138、农大108的幼胚培养在含有2,4-D(2 5 mg/L)的IM培养基上后,大多数幼胚能愈伤化并增大,形成基部相连、上部分开的微芽结构;微芽结构在转移到BM培养基上后,形成小植株;进一步转移到RM培养基上,它们长根并形成完整植株.玉米幼胚高效再生植株与下列因素有关玉米基因型、幼胚大小、幼胚长芽至分化时间、6-BA、IBA、Gelrite.不同品种玉米再生能力有显著差异,幼胚大小在1～2mm之间再生能力强,幼胚长芽至分化时间4～6 d最好.激素6-BA浓度在0.5～0.6 mg/L之间有利于微芽形成小植株,IBA浓度在0.6～1 0 mg/L促进生根.Gelrite可代替琼脂粉用于玉米生根.     

几种影响羽衣甘蓝小孢子胚状体成苗的因素

羽衣甘蓝成熟小孢子胚转到固体培养基上可直接萌发成苗。成苗率与基因型、培养基成分和培养温度有关。MS+1.0%琼脂+3%蔗糖是适宜的成苗培养基;100MG·L-1活性炭对鱼雷形胚成苗起促进作用;10℃低温培养10D可提高成苗率。     

辣椒游离小孢子细胞团培养的胚状体形成

从预培养15天后的花药中机械游离小孢子及其细胞团,经28℃液体悬浮暗培养．30天后,获得了自球形期胚到子叶期胚发育程度不等的各类胚状体。从12个花药中可以形成高达22个胚状体,且子叶期胚的比例约为23％。显微镜检表明,这些胚状体来自游离的小孢子细胞．经核的对称分裂形成多核细胞或者早期形成多细胞团,最后经细胞的分裂分化形成。胚状体体表具毛,活力有差异。在适当培养基上,具活力的鱼雷期及子叶期胚状体均能发育成正常植株。7℃、32℃、35℃8天的胁迫处理均能诱导小孢子胚状体发生。但花药培养中7℃、35℃处理下的出胚率较32℃下高,而游离小孢子细胞团培养中以35℃、32℃下较好。7℃处理下获得的胚状体数很少．对产生这种现象的原因进行了探讨。出胚率在基因型间,不同胁迫处理温度间表现明显差异。而在温度处理的不同天数间差异不明显。流式细胞仪对再生株真叶的DNA含量分析表明．获得的再生株中具有单倍体、双单倍体以及单倍一双倍嵌合体植株。本结果为进一步开展辣椒雄性生殖途径的胚状体发育研究。提高辣椒成熟胚状体的频率提供了实验体系。     

农杆菌介导的玉米幼胚遗传转化体系的优化

本实验以玉米品种HiⅡ(PA*PB和PB*PA)的幼胚为材料,用根瘤农杆菌菌株EHA105和LBA4404对幼胚进行转化,将PTF102-GUS导入玉米中,借助GUS基因的瞬时表达率,对影响农杆菌介导玉米幼胚转化的部分因素进行优化。研究表明使用EHA105侵染HiⅡ幼胚;农杆菌浓度在OD550=0.3,侵染时间在10min;幼胚大小为1.0mm时,GUS染色瞬时表达率较高。     

低能氮离子注入对小麦组织培养影响的研究

以普通小麦为材料,研究了氮离子注入对小麦花药、成熟胚培养过程中愈伤诱导、植株再生的影响。结果表明：离子注入引起花药出愈率下降,但对分化率基本无影响,而且对成苗有利,在处理剂量下,成苗率比对照提高了４６．２％ ;而离子注入可以在基本不影响成熟胚出愈率的情况下,显著提高愈伤的分化率。     

越橘茎尖离体培养条件的研究

为提高越橘苗木繁殖速度及苗木品质,本研究以越橘茎尖为材料,建立茎尖离体培养诱导成苗的快繁体系。结果表明：茎尖诱导最佳培养基为WPM（改良）+ZT 0.05 mg·L^-1+IBA 0.5 mg·L^-1+GA₃ 0.1 mg·L^-1,0.1~0.3 mm长的茎尖诱导成苗率仅为28%,0.3~0.5 mm长的茎尖诱导成苗率能达到68%;茎尖长度达到0.5~0.7 mm时,茎尖诱导成苗率为79%,当茎尖长度为0.7~1.0 mm时,茎尖诱导成苗率高达94%。     

低能氮离子注入对小麦组织增减影响的研究

以普通小麦为材料,研究了氮离子注入对小麦花药、成熟胚培养过程中愈伤诱导、植株再生的影响。结果表明：离子注入引起花药出愈率下降,但对分化率基本无影响,而且对成苗有利,在处理剂量下,成苗率比对照提高了４６．２％;而离子注入可以在基本不影响成熟胚出愈率的情况下,显著提高愈伤的分化率。     

小麦远缘杂种幼胚胚状体的发生、发育及低温对愈伤组织分化能力的影响

通过普通小麦与滨麦、簇毛麦及山羊草属7个种杂交幼胚培养,获得8个体细胞胚性无性系(8个组合10个胚)及大量试管苗。愈伤组织及胚性愈伤组织诱导率分别为65.79%和26.32%。形态学及细胞学鉴定结果,均为真杂种。不同染色体组及同一染色体组不同基因型的幼胚,在组织培养中有明显差异。非整倍体细胞具有遗传的全能性,但当染色体数目严重偏离双单倍体数目时,其全能性即丧失。胚状体的发育具有与合子胚极相似的典型结构。由愈伤组织表层和深层细胞产生的胚状体,在形态结构上有明显区别。低温(4℃)处理早代胚性愈伤组织180—240天,以及严格筛选和及时转移,可使培养65—80代(5—6年)的愈伤组织植株分化率保持在77.73%以上。     

韭菜幼小子房培养时胚囊的发育和一些异常现象

对韭菜开花前1天左右的子房进行培养可获得大量的单倍体植株。观察表明单倍体植株起源于未受精的卵细胞和反足细胞。为了探索培养不同发育时期的子房对单倍体原胚发生频率的影响,我们又对大孢子母细胞时期的幼