甲壳动物精子学研究概况Ⅱ. 精子发生与精子的生化组成

在前文阐述了甲壳动物精子形态和结构的基础上,本文着重概述其精子发生与精子的生化组成.     

甲壳动物精子学研究概况Ⅰ.精子的形态与结构

甲壳纲是整个动物界中物种最为丰富的一个纲,其精子形态、结构各异.八个亚纲(按椎野1964年的分类系统)中的三个亚纲--须虾亚纲(Mystacocaride)、蔓足亚纲(Cirripedia)、鳃尾亚纲(Branchiura)的精子具鞭毛,能运动.其它五个亚纲的精子形状各不相同,无鞭毛且不运动.自上世纪后半叶以来,已在光镜水平进行了大量的研究.近年来,对其亚微结构的研究正不断深入.电镜细胞化学、免疫学、分子生物学等相关学科的渗透,更为甲壳动物精子学研究提供了新手段,开拓了新领域.全文分两部分,从精子的形态结构、精子发生及精子的生化组成等方面概述甲壳动物的精子学研究进展.本文着重阐述精子的形态与结构.     

多色荧光原位杂交检测小鼠精子非整倍体

比多色荧光原位杂交技术评价了２－（４－噻唑）苯丙咪唑（ＴＢ）在雄性小鼠生殖形成过程中的非整倍体诱发效应。根据小鼠精子发育周期,以口饲法处理动物１１天,间隔２２天后取小鼠精子涂片,聚合应用８号,Ｘ及Ｙ染色体特异性ＤＮＡ探针进行多色ＦＩＳＨ,检测精子中出现的二倍体、双体、和缺本频率。结果发现：在２００ｍｇ／ｋｇ剂量组,上述３类异常精子频率均显著高于溶剂对照,其他２个剂量组的非整倍体精子频率与对照无显著     

猪精子中与卵透明带糖蛋白ZP3结合的蛋白质

依次经ＰＳＬ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析柱和纤维素ＣＭ－５２离子交换层析柱,从猪精子的ＣＨＡＰＳ抽提液分离得４个蛋白质组分。用固相透明带精蛋白结合试验（ＩＺＰＧＢＡ）检测;表明精子蛋白ＳＰ１和ＳＰ２具有结合透明带糖蛋白ＺＰ３的活性,ＳＰ２并显示凝集血球的活性。精子蛋白ＳＰ１与卵预温育明显抑制精卵结合,抑制活性与加入的精子蛋白的浓度呈正相关。用生物素标记的ＺＰ３和蛋白质印迹技术,证明ＳＰ１中的６８ｋＤ精子蛋白与ＺＰ３结合,提示６８ｋＤ精子蛋白参与精卵结合。     

蝗总科精子超微形态比较及其在系统分类上的意义（直翅目）

通过对８科１９属２３种蝗虫精子超微形态结构的观察和比较,发现其精子有４种类型。这４种类型精子间的主要差异反映在中心粒侧体及线粒体衍生体的超微形态结构方面。经过比较和分析,确认８科中癞蝗科种类（除友谊华癞蝗外）的精子最原始,斑腿蝗科、斑翅蝗科、网翅蝗科、槌角蝗科、剑角蝗科（除中华蚱蜢外）种类的精子最进化。根据精子的演化类型建立了蝗总科精子系统,在这个系统里蝗总科８科昆虫在演化趋势上可分为３大类群     

猪血清及某些血清免疫球蛋白对猪精子的作用

新鲜猪血清对猪精子具有毒性作用。灭活补体的血清失去了杀精子作用,但使精子产生头对头凝集。分子筛层析证明,血清凝精子活性存在于富含免疫球蛋白的洗脱峰内。从５头处女猪的混合血清中制备出电泳纯的ＩｇＭ和ＩｇＧ（ＩｇＧ２和ＩｇＧ２的混合物）、ＩｇＭ在０．０２５－０．０５ｍｇ／ｍｌ（３×１０７个精子）时就引起明显的精子凝集,而ＩｇＧ在浓度为１．４１ｍｇ／ｍｌ（３×１０７个精子）时仍无凝精子作用。精浆对血清引起的精子凝集有抑制作用。在自身血清中,被精浆的猪红细胞自动凝集。环状沉淀显示,由分子筛层析得到的具有凝精子活性的洗出液可与精浆作用产生沉淀。双向免疫扩散显示,精浆跟血清作用形成一条沉淀线。以上结果提示：新鲜血清的杀精子作用可能与补体反应有关;ＩｇＭ是血清中主要的精子凝集团子;精子凝集可以跟精浆中的某种物质有关,这种物质可以竞争性地抑制血清的凝精子作用。     

蛙科精子形态结构研究进展

本文对已有的蛙科精子形态结构的研究进行总结,归纳了蛙科精子形态结构及量度的特征和类型,以及蛙科精子结构与其它两栖类精子结构的异同,探讨蛙科精子形态结构研究中存在和亟待解决的问题。     

乳酸脱氢酶C4的精子免疫荧光定位特性

用１４个抗小鼠ＬＤＨ－Ｃ４的单克隆抗体对小鼠、树鼯和人精子的ＬＤＨ－Ｃ４进行了间接免疫荧光定位。结果显示：不同的单抗可以结合到小鼠精子表面不同的位置，其中ＰＡ１（Ｋ０２１）在尾部，ＰＡ２（Ｋ０２２）、ＰＡ４和ＰＡ５（Ｋ０２３）在中段和尾部，ＳＭ１、ＳＭ２和ＰＧ２的中段，ＳＭ３和ＳＭ４在顶体，ＳＭ５在顶体和赤道板。人和树鼯精子表面的ＬＤＨ－Ｃ４也呈现类似的情况。这些研究表明精子表面的ＬＤＨ－Ｃ４呈现     

长牡蛎精子超低温冷冻后超微结构损伤研究

采用程序降温仪分步降温冷冻保存长牡蛎（Crassostrea gigas）精液,并用扫描电镜、透射电镜研究了精子的超微结构损伤。超低温冷冻保存后长牡蛎精子的运动率、受精率及孵化率与鲜精无显著差异。鲜精中84.5%的精子形态结构正常,冻精中73%的精子形态结构正常。形态结构正常的精子表现为顶体、质膜、线粒体与鞭毛结构完整、染色质形状规则,顶体、线粒体及中心粒结构正常,鞭毛形态完整、微管结构清晰;形态结构异常的精子表现为顶体脱落、解体,精子头部质膜膨胀、破裂、染色质肿胀、破裂、解体,线粒体移位、脱落、膨胀,嵴退化或消失,鞭毛弯折、断裂,微管解聚。结果显示,以10% DMSO为抗冻保护剂,HBSS溶液为稀释液,1:4的稀释比例,添加海藻糖,采用分步降温法冷冻保存,对长牡蛎精子具有较好的抗冻保护作用,合适的冻存方法可以有效的保护太平洋牡蛎精子冷冻过程中结构损伤。研究有助于长牡蛎种质资源的收集保存及应用。     

猪精子凝集素的纯化,性质及其作用

用胎球蛋白－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析和凝胶过滤层析从精子和精浆中分离纯化了猪精子凝集素（简称ＢＳＬ）。ＢＳＬ的血凝活性只被若干糖蛋白和聚糖所抑制。ＢＳＬ的分子量为５６ｋｄ,由分子量分别为１３．６ｋｄ（β）和１６．０ｋｄ（α）的两个不同的亚基以α１β３所组成。ＢＳＬ为糖蛋白,含中性糖３．２％,不含唾液酸。用ＥＬＩＳＡ法测定猪精子中ＢＳＬ的含量及分布,表明７０％嵌入在精子膜中,２５％结合在精子表面,     

长吻鮠精子超微结构的观察

用透射电镜和扫描电镜观察了长吻（ＬｅｉｏｃａｓｓｉｓｌｏｎｇｉｒｏｓｔｒｉｓＧｕｎｔｈｅｒ）精子的超微结构。长吻精子具有椭圆的头部和复杂的中片;近侧中心粒和远侧中心粒靠近核的中央;鞭毛呈９＋２轴丝结构,并具有由外膜折迭形成的波浪形的鳍状结构。研究表明,长吻精子具有某些区别于其它鱼类精子的不同结构。     

东方扁虾精子的超微结构

利用电镜研究了东方扁虾（Ｔｈｅｎｕｓ ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）精子的形态和结构。精子由核、膜复合物区和顶体区３部分组成。核内含非浓缩的染色质、微管及细纤维丝,外被核膜;５～６条辐射臂自核部位伸出,臂内充满微管。膜复合物区位于核与顶体之间,由许多膜片层结构及其衍生的囊泡共同组成。顶体区由顶体囊和围顶体物质组成,顶体结构复杂,由顶体帽、内顶体物质和外顶体物质等构成;围顶体物质呈细颗粒状,主要分布于顶体囊     

小鼠精子表面Con A结合糖复合物的形成与变化

用辣根过氧化物酶标记的ＣｏｎＡ（伴刀豆素Ａ）对小鼠睾丸与附睾切片,以及对取自附睾和子宫（交配后）内的精子涂片进行了标记,旨在认识精子在发生、成熟和获能过程中表面糖复合物的形成与变化。本研究表明,睾丸内的生精细胞和支持细胞均呈ＣｏｎＡ标记阳性。附睾的输出小管和附睾管上皮细胞,ＣｏｎＡ标记呈中度至强阳性,有部位的差别。附睾头和附睾尾内精子表面的标记无明显差别,标记位置均主要在顶体区和尾部。精子在子宫内存留１．５小时后,顶体后区出现中度阳性标记,但存留３小时和６小时后,顶体和顶体后区的标记均减弱或消失。这些结果提示,（１）精子发生期即可合成ＣｏｎＡ结合糖复合物,（２）精子在附睾成熟过程中表面的ＣｏｎＡ结合糖复合物无明显变化,（３）精子获能后顶体后区出现的ＣｏｎＡ结合糖复合物可能与受精能力有关。     

纹藤壶精子发生和成熟精子的超微结构

甲壳动物的精子形态各异.其中3个亚纲的精子具鞭毛,能运动,其它5个亚纲的精子无鞭毛且不运动.     

精子性别化对奶牛性别控制的试验

本试验获得牛犊雌性控制率达８１．８％（Ｔａｂｌｅ１）。十头母牛产犊十一头：二雄,九雌,其中一头产异性双犊。于１．０８－１．１０蔗糖密度梯度之间,可以清楚地观察到Ｙ精子能被荧光素染色（Ｔａｂｌｅ２）;Ｈ－Ｙ抗血清处理能改变Ｙ精子的荧光染色,说明对Ｙ精子有抑制作用（Ｔａｂｌｅ３）．制备有一定纯度和效价的Ｈ－Ｙ抗血清ＩｇＧ用以性别化处理精子;通过人工受精技术、使母牛得到受处理的精子而正常受胎．本试验结果对奶牛性别控制的前景是美好的。     

GABA和孕酮对人及豚鼠精子的体外获能作用

为了探讨γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）是否参与人及豚鼠精子体外获能的调节,将生育男子和豚鼠清子分别悬浮于ＢＷＷ和低Ｃａ＾２＋最小获能培养基（ＬＣａ＾２＋－ＭＣＭ）中,加入ＧＡＢＡ、孕酮（Ｐ４）、ＧＡＢＡＡ受体激动剂及其拮抗剂,在５％ＣＯ２孵箱３８．５℃培养２ｈ。然后用ｉｏｎｏｐｈｏｒｅ Ａ２３１８７激发精子顶体反应（ＡＲ）和超激活运动（ＨＡＭ）。以精子与金霉素（ＣＴＣ）荧光结合类型、ＡＲ和ＨＡＭ为指标来     

藏酋猴精子的电镜观察

本研究利用扫描电镜,透射电镜及光间首次对我国特有的灵长类动物藏酋猴的精子形态结构进行了观察研究,藏酋猴精子在大体结构上,如头的形状,顶体大小,核的结构等,与猕猴属其它种类相似,其主要特征是顶体发达,总长（79．96±0．29）um,及头长（5．97±0．05um),尾中段（11．98±05um)与尾主段的长度（62．01±0．32um）与红面猴（Macaca arctoides)及猕猴属其它种类存在明显差异P＜001,结果表明藏酋猴与红面猴应分属于不同的种组,与Fooden关于藏尊猴分类的结论一致。     

鱼类精子携带源基因导入

将鲤鱼（或泥鳅）精子在保存液内与人生长激素（ｈＧＨ）重组质粒ＤＮＡ保温,再与鲤（或泥鳅）卵受精。由此发育的鱼苗经ＤＮＡ分子杂交和ＰＣＲ检测证明,３３．３％（或３７．０％）的个体带ｈＧＨ基因,其拷贝数在４－１５０／细胞之间。在一定条件下,精子可作为携带外源基因的载体,通过受精作用产生转基因鱼。     

斑腿蝗科三个种类精子的比较研究：直翅目：蝗总科

本文通过对日本黄脊蝗Ｐａｔａｎｇａｊａｐｏｉｎｃａ（Ｉ．Ｂｄ）,短角直斑腿蝗ＳｔｅｎｏｃａｔａｎｔｏｐｓｍｉｓｔｓｈｅｎｋｏｉＷｉｌｌ和霍山蹦蝗ＳｉｎｏｐｏｄｉｓｍａｈｏｕｓｈａｎａＨｕａｎｇ精子的比较,发现了它们的精子的线粒体衍生体和中心粒侧体的超微形态结构十分相似,在精子发生过程中７、８两期精细胞线粒体衍生体周围微管的排数相一致,这３个种精子间的差异主要反映在外形头和尾的长度,线粒体衍生体的大     

鱼类精子携带的外源基因导入

将鲤鱼（或泥鳅）精子在保存液内与人生长激素（ｈＧＨ）重组质粒ＤＮＡ保温,再与鲤（或泥鳅）卵受精。由此发育的鱼苗经ＤＮＡ分子杂交和ＰＣＲ检测证明,３３．３％（或３７．０％）的个体带ｈＧＨ基因,其拷贝数在４—１５０／细胞之间。在一定条件下,精子可作为携带外源基因的载体,通过受精作用产生转基因鱼。