盐肤木体细胞胚胎发生及植株再生

以盐肤木(Rhus chinensis Mill.)幼胚为外植体,研究不同植物生长调节剂组合对其愈伤组织诱导及体细胞胚胎发生的影响,以建立盐肤木体细胞胚胎发生及植株再生体系。结果表明,最适愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 0.2 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L,诱导率为84.57%,诱导出的初代愈伤组织白色或淡黄色,质地疏松,表面光滑,为非胚性愈伤。初代愈伤组织转移到1/2 MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基上培养1个月后,长出淡黄色质地紧密的胚性愈伤组织,诱导率高达100%,在此培养基上胚性愈伤组织增殖倍数为854.73%。所获得的胚性愈伤组织转接到1/2 MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖4%的培养基上培养1个月后可诱导体细胞胚胎发生,诱导率可达32.67%。诱导得到的体细胞胚胎经历球形胚、心形胚、鱼雷胚、子叶胚进一步分化发育成苗。无菌苗炼苗后栽种到泥炭土∶蛭石∶珍珠岩为2∶1∶1的生长基质上,能100%稳定成活。经过细胞学观察分析,体细胞胚的发育与合子胚相似。     

白刺花胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生和萌发

探讨不同因素对白刺花下胚轴、子叶2种外植体胚性愈伤组织诱导及体细胞胚发生和萌发的影响。以B5和MS为基本培养基,研究2,4-D、6-BA和TDZ对白刺花下胚轴和子叶胚性愈伤组织的诱导;在MS培养基上添加不同浓度2,4-D,研究胚性愈伤组织增殖情况;采用ABA,探究对体细胞胚发生的影响。结果表明:下胚轴比子叶更易诱导胚性愈伤组织,筛选出2种外植最佳的胚性愈伤组织诱导培养基均为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L TDZ+0.5 mg/L 6-BA,胚性愈伤组织诱导率分别为77.3%和41.0%。15.0 mg/L ABA、0.2 mg/L 2,4-D和2.0 mg/L 6-BA有利于体细胞胚发生,1/3MS+0.2 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA+2.0 g/L活性炭+25 g/L蔗糖+7 g/L琼脂的培养基可使体细胞胚萌发率达80%以上,再生植株移栽成活率高达90%。白刺花外植体种类及培养基类型均会影响胚性愈伤组织的诱导,其中下胚轴诱导效果优于子叶;MS培养基较适合启动细胞脱分化形成愈伤组织,2,4-D对胚性愈伤组织的增殖保持有调控作用,ABA有利于体细胞胚的发生。     

激素对洋桔梗植株再生的影响及生根培养的研究

以MS为基本培养基 ,附加不同浓度的 6 BA、KT、NAA和IBA诱导洋桔梗叶片外植体的再生植株。结果表明 :MS +6 BA 0 .5～ 1 .0mg/L(单位下同 ) +NAA 0 .2和MS +6 BA 0 .5～ 1 .0 +IBA 0 .2培养基都能诱导外植体产生愈伤组织 ,但 6 BA的浓度必须小于 1 .0mg/L ,否则会导致组织的严重玻璃化 ;MS +KT 1 .0～2 .0 +NAA 0 .2或MS +KT 1 .0～ 2 .0 +IBA 0 .2培养基也能诱导外植体产生愈伤组织 ,愈伤组织出现的时间较早且质地较好 ,适合分化。继代培养时 ,MS培养基中仅加 6 BA 0 .5mg/L或KT 0 .5mg/L ,即能获得较高的分化率。生根培养研究中 ,培养液为 1 /2MS+5 0g/L糖 +IBA 2mg/L的前处理 ,生根效果较好 ,生根率接近基质生根培养的生根率。     

枸杞原生质体培养及高效成株体系的建立

由枸杞髓部组织诱导出胚性愈伤组织,并由此愈伤组织建立起稳定的细胞悬浮系,从悬浮细胞游离的原生质体在改良KM培养基（1．5mg/L 6-BA,0.5mg/L NAA和0．5mg/L2,4-D)中进行液体浅层培养,3－4d后出现第一次分裂,第7d统计分裂频率为50．3％,15d左右可形成细胞团,3－4周后形成肉眼可见的愈伤组织,愈伤组织植板率为1．25％,将细胞团转移到液体分化培养基（MS＋6－BA 1．5mg/L 2,4-D 0.2mg/L)8-10d可形成大量胚状体,及时将胚性愈伤组织块转移到固体分化培养基上（MS 6-BA 0.2mg/L)可形成大量绿芽,分化率54．17％。绿芽在生根培养基（MS＋NAA 0．2mg/L)可形成完整植株,移栽后成活良好。     

银杏幼嫩茎段培养诱导愈伤组织及其细胞学研究

将银杏幼嫩茎段培养于含NAA和BA的MS和改良MS培养基中获得球型胚。培养基类型对愈伤组织的诱导和分化有明显影响,MS培养基优于DCR培养基。所有的MS和改良MS培养基上有胚性细胞的分化。在含有4mg／L的NAA的MS和改良MS培养基中,有三细胞和四细胞的原胚出现,并在MS 2mg／L NAA 0．1mg／L BA的培养基中观察到球形胚的分化。     

何首乌体细胞胚的诱导及植株再生研究

以何首乌茎尖、茎段为外植体,经体细胞胚发生途径,进行胚性愈伤组织诱导、体细胞胚的诱导、植株再生的研究.并采用临时压片法对体细胞胚的发育过程进行观察.结果表明愈伤组织诱导最适培养基为Ms＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L,体细胞胚诱导最适培养基为MS＋6-BA 1.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L.将产生的体细胞胚首先接种于MS基本培养基使其充分发育后转入MS＋6-BA 2.0 mg/L培养基中诱导出芽,出芽率高于直接采用Ms＋6-BA 2.0 mg/L培养基诱导.体细胞胚的发育过程是首先在愈伤组织表面形成许多瘤状突起即胚性细胞团,胚性细胞团继续发育成球形胚、盾形胚,球形胚、盾形胚成熟后发育成植株.     

新疆雪莲体细胞胚胎发生

通过体细胞胚胎发生途径实现了新疆雪莲(Saussurea involucrata Kar.et Ki r.)的植株再生。选用新疆雪莲子叶为外植体, 接种于MS+0.5 mg.L-1 2,4-D+0.05-1 mg.L-1 BA的固体培养基上, 进行愈伤组织的诱导。从第1次继代培养的愈伤组织中挑选出黄绿色、颗粒状、质地致密的胚性愈伤组织, 转移到含0.05-0.1 mg.L-1 2,4-D 的MS液体培养基中进行悬浮培养,20天后可分化产生大量球形胚。继代过程中相继加入PEG和GA3 , 可以促进体细胞胚的分化和生长。体细胞胚在含有5 mg.L-1 GA3 的MS固体培养基上, 可发育成完整的植株。     

防风组织培养中畸形胚状体的发生和控制

采用组织培养和石蜡切片法,分析多种因素对防风畸形胚状体发生和发育过程的影响及控制。结果表明,诱导正常体细胞胚高频发生的培养基组合是：启动胚性愈伤组织的培养基是MS 0．5mg／L 2．4-D,蔗糖浓度3％;分化培养基是MS 1mg／L 6-BA 0．2mg／L NAA 0．5mg／L ABA,蔗糖浓度4％～5％;成熟培养基是MS培养基,蔗糖浓度3％。结论：一定浓度的生长素是诱导防风胚性愈伤组织的关键因素,细胞分裂素在体细胞胚的分化和发育过程中起协同作用;蔗糖浓度、ABA、接种方法以及适宜的培养条件和培养容器等均可有效降低畸形胚状体的发生率。     

鱼腥草体细胞胚胎发生和植株再生

目的:利用鱼腥草的叶片和叶柄为材料,进行体细胞胚胎诱导及植株再生研究。方法:运用正交设计试验,考察在改良的MS固体培养基上添加不同种类、不同浓度的植物生长物质组合及其配比对鱼腥草愈伤组织诱导、体细胞胚胎发生及植株再生的影响。结果:鱼腥草无菌苗叶片在含有2,4-D 1.0 mg/L 6-BA 0.5 mg/L的改良MS培养基上能诱导出胚性愈伤组织;胚性愈伤组织在含有6-BA 1.0 mg/L的改良的MS培养基上诱导体细胞胚的发生;叶柄在含有6-BA 1.0 mg/L改良MS培养基上直接产生体细胞胚。体细胞胚在改良的MS NAA0.1 mg/L 6-BA 1.0 mg/L的培养基上能够快速繁殖,形成大量不定芽,在不加任何激素的MS培养基上就可以萌发出不定根,发育为成完整植株,在MS IBA 1.0 mg/L的固体培养基上能够形成大量的根。结论:建立了鱼腥草体细胞胚胎发生及植株再生的体系。     

沙打旺胚性原生质体培养优化及高频再生植株

外植体类型和光照条件决定沙打旺胚性愈伤组织的形成。用生长10d的胚性愈伤组织可分离到1.2×10⁶个/g(原生质体/细胞),活力超过80%。当原生质体以1.0×10⁵/mL的植板密度培养在含0.6%琼脂糖附加1.5mg/L 2,4-D、0.5mg/L BA和0.5mol/L葡萄糖的培养基(无机盐降为1/4)中,植板率为16.8%。条件培养基显著促进原生质体的生长发育。长大的细胞克隆经2周4℃低温处理后转到含0.1mg/L NAA和1.0mg/L BA分化培养基上,体细胞胚胎发生频率高达70%,每克细胞产生的体细胞胚数在200个以上。成熟的体细胞胚转到无激素的1/2MS培养基中即分化成苗,再生植株为正常的二倍体。     

紫色大花矮牵牛组织培养与植株再生

矮牵牛叶片外植体在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培养基上培养3周后产生致密的浅绿色愈伤组织;转入芽分化培养基MS+6-BA 0.5mg/L+4-PU 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L 1周后,从愈伤组织表面不断分化产生幼芽;待幼芽长至3cm时转接至生根培养基1/2MS+NAA 1.0 mg/L+GA₃0.5mg/L中生根,长成完整植株。     

木薯离体培养与快速繁殖

选取3个木薯品种的腋芽作为外植体,分别接种于MS基本培养基上进行离体培养及快速繁殖。结果表明, 6-BA不同浓度对木薯品种不定芽诱导效果不一,在MS+6-BA 0.5~1.0mg/L中,3个品种均可诱导产生幼芽;在MS+6-BA 3.0mg/L中,3个品种的幼芽诱导率高达100%;MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.1mg/L对继代效果较好;MS+NAA 0.1mg/L对生根效果最佳。     

绿巨人叶柄离体培养及植株再生

在MS基本培养基中添加不同植物生长调节剂(mg/L)对绿巨人无菌苗的叶柄进行离体培养,结果表明,MS+6-BA 1.0+NAA 2.0+2,4-D 1.0诱导效果最好,产生愈伤组织并分化出丛芽;MS+6-BA 2.0~3.0+NAA 0.2+0.2% PVP对芽的增殖效果好;附加0.2%PVP对防止褐变有一定效果;生根培养基选用1/2MS+NAA 0.1~0.5+IBA 1.0的组合。     

地涌金莲组培快繁技术研究

以地涌金莲吸芽为外植体,在MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L培养基上培养30d后产生幼芽;丛芽增殖培养基为MS+6-BA0.3mg/L+IBA0.1mg/L,增殖系数达2.83以上;生根诱导最佳培养基为MS+NAA1.0mg/L,生根率达100%。移栽成活率95%以上。     

水母雪莲体细胞胚胎发生及其植株再生

水母雪莲（Saussurea medusa Maxim.)茎和叶片的切段接种于MS＋2mg/L NAA 0.5mmg/L 6-BA的培养基上,20d后产生黄褐色的愈伤组织,经过几个月的继代培养,愈伤组织仍保持旺盛的增殖能力,但部分由黄褐色逐渐变为红色,将红色愈伤组织转到MS＋0．1mg/L NAA＋0．2mg/L 6-BA 5mg/L GA3的培养基上,30d后可分化出大量的体细胞胚,体细胞胚成熟后转到1／2MS＋0．2mg/L IAA 0.5%活性炭的培养基上,30d后可长出2－4cm的根,带根的小苗经锻炼后移栽到土壤中,成活率达76％,细胞组织学观察表明,发育成熟的体细胞胚具有胚根,胚轴和胚芽的完整结构,具有独立的维管系统。     

雌雄栝楼的组织培养研究

对雌雄栝楼（Trlctmsanthes kirilowii Maxim）分别进行组织培养的研究结果表明：在雌雄栝楼组织培养过程中,愈伤组织的诱导和分化适宜的培养基均存在性别差异。愈伤组织诱导的适宜培养基分别是,雌性栝楼培养基为MS＋NAA0．5mg／L＋IBA0．5mg／L＋6-BA1．5mg／L;雄性栝楼培养基为MS＋NAA0．1mg/L＋IBA0．5mg／L＋6-BA0．5mg／L和MS＋NAA0．1mg／L＋IBA1．0mg／L＋6-BA1．0mg/L。愈伤组织分化的适宜培养基分别是,雌性栝楼培养基为MS＋NAA0．1mg／L＋IBA0．4mg／L＋6-BA1．2mg／L;雄性栝楼培养基为MS＋NAA0．3ms／L＋IBA0．2mg／L＋6-BA0．8mg／L;雌雄栝楼无根苗生根的适宜培养基均为MS＋NAA0．1mg／L。     

领春木体细胞胚胎发生及植株再生

以领春木（Eupteleapleiospermum Hook．f.etThoms．）种子幼胚为试验材料,对领春木体细胞胚胎发生进行了研究。结果表明：在附加1．0mg·L-1 2,4．D＋0．5mg·L-1 6-BA＋3％蔗糖＋0．8％琼脂的Ms培养基上可诱导出愈伤组织。愈伤组织在附加0．5mg·L-1 NAA＋0．5mg·L-1 6．BA的培养基上可形成体细胞胚;体胚在附加0．5mg·L-1 6-BA＋0．05mg·L-1 NAA＋0．1％PVP的1／2MS培养基上能大量增殖;将成熟体胚转移到不添加任何植物生长调节剂的MS培养基上,培养60d,形成正常植株。     

珍稀濒危植物香果树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生

以香果树（Emmenopterys henry,）未成熟种子为试材,探讨不同的接种量、基本培养基、糖浓度及植物生长调节物质等对体细胞胚胎生长的影响,建立稳定的香果树胚性细胞悬浮培养与植株再生体系。结果表明：悬浮培养条件下,最适接种量为2％（鲜重）：较适合的基本培养基为MS;蔗糖浓度为1％时容易使球形胚聚合体愈伤化,浓度为3％和6％适合球形胚聚合体增殖。浓度为9％则容易使球形胚聚合体褐化：添加0．5mg·L^-1 6-BA和0．5mg·L^-1NAA的MS液体培养基,当初始蔗糖浓度为3％。然后逐步提高到6％则有利于香果树各个发育阶段的同步化;子叶胚转到不含任何植物生长调节物质的MS固体培养基中可以长成正常植株。     

白花蛇舌草叶片离体培养及试管无性系的建立

以白花蛇舌草叶片为材料,建立了白花蛇舌草叶片高效不定芽发生、植株再生体系。研究了不同激素及其组合对外植体不定芽发生的效应。结果显示,在MS基本培养基中单纯添加6BA,当6BA浓度为0.1mg/L和0.5mg/L时,不能诱导离体叶片发生不定芽,6BA浓度在1.0～5.0mg/L范围内,诱导率随BA浓度升高而增加,适宜浓度为3.0mg/L;当6BA与NAA配合使用时,其诱导率随着培养基中6BA与NAA的相对比值的提高而提高;以MS+BA3mg/L+NAA0.01mg/L作为继代培养基,建立起白花蛇舌草高效、稳定的试管无性系,为白花蛇舌草遗传转化研究奠定了基础。