小麦叶绿体中细胞分裂素结合蛋白的功能

采用ＢＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６Ｂ亲和层析法从小麦叶绿体中纯化了ＣＴＫ结合蛋白并制备了抗体。小麦叶绿体经ＣＴＫ结合蛋白的抗体处理后,表现出：希尔反应活力降低;ＭＶ（包括光系统Ｉ和Ⅱ）和ＰＭＳ（包括光系统Ｉ）系统的毫秒延迟发光的慢相强度下降;光合磷酸化活力受到抑制。说明小麦叶绿体中的ＣＴＫ结合蛋白存在状态的改变会影响叶绿体的能量转换过程。     

小麦叶片中叶绿体细胞分裂素结合蛋白的定位

小麦叶片中叶绿体细胞分裂素结合蛋白的定位张华敏,刘愚,王美琪,沈允钢（中国科学院上海植物生理研究所,上海２０００３２）关键词：小麦叶片细胞,ＣＴＫ结合蛋白,放射自显影,胶体金自从Ｂｅｒｒｉｄｇｅ等（１９７０）首次在高等植物的核糖体上发现了细胞分裂素（...     

小麦叶绿体中细胞分裂素结合蛋白的特性

小麦叶绿体中的ＣＴＫ结合蛋白属热敏感蛋白,它与６－ＢＡ结合的最适温度约为２５℃;最适ｐＨ为８左右;在其蛋白分子上存在两类ＣＴＫ结合位点,高亲和力位点与６－ＢＡ结合的Ｋα值为１．１×１０－９ｍｏｌ／Ｌ,低亲和力位点的Ｋα值为９×１０－７ｍｏｌ／Ｌ;激动素、玉米素对６－ＢＡ的结合只有部分抑制作用,而ＡＢＡ、ＧＡ３、ＩＡＡ及腺嘌呤则无竞争作用。ＣＴＫ结合蛋白分子中的中性氨基酸含量很高,在中性介质中带弱负电。     

小麦D^2型光敏性细胞质雄性不育系在不同光照条件下可溶性蛋白的比较分析

小麦Ｄ＾２＋型细胞质与特定的核结合,对长光照（≥１５小时）反应敏感,表现为雄蕊雌化,花粉败育。本实验通过扫描电镜观察了雌蕊横切面,发现有类似于胚珠的结构,但没有胚珠组织,也没有花药壁和花粉粒的结构。同时应用单向ＳＤＳ－ＰＡＧＥ技术,对（Ｃ）－Ｎ２６（Ｄ＾２型细胞质）小麦和Ｎ２６（Ｂ型细胞质,核基因组相同）小麦的细胞质可溶性蛋白、叶绿体可溶性蛋白、线粒体可溶性蛋白多钛进行了比较分析,结果表明：在短光     

恶性疟原虫多抗原表位基因的融合与表达

以霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）基因为载体,构建了含不同抗原表位的恶性疟原虫的融合基因ＣＴＢ／ＡＴＥ和ＣＴＢ／ＡＷＴＥ。前者除含有恶性疟原虫裂殖子表面主要抗原表位杂合多肽基因ＳＰｆ６６外,还含有很强的Ｔ辅助细胞表位ＣＳＴ３和Ｔｃ细胞表位;后者在此基础上将我国发现的Ｂ细胞表位ＮＫＮＤＤ基因经８次串联后融合其中。两种形式的融合基因经测序正确后转入大肠杆菌ＴＫ１０４６中,产量分别为１０ｍｇ／Ｌ及５ｍｇ／Ｌ。表达产物ＣＴＢ／ＡＷＴＥ经亲和层析纯化双抗夹心ＥＬＩＳＡ测定表明,该融合蛋白在保留了与抗ＣＴＢ抗体结合的同时,与抗ＮＫＮＤＤ单抗的结合效价达１：８０００。     

细胞分裂素结合蛋白的研究进展

迄今为止,已从多种植物中分离到细胞分裂素结合蛋白（ＣＢＰｓ）,它们可能在细胞分裂素的信号转导、体内运输及代谢中起作用。根据现有研究结果认为,大多数ＣＴＫｓ受体可能位于膜上,通过与Ｇ－蛋白耦联的信号转导系统或双组分信号转导系统完成ＣＴＫｓ信号的跨膜转导。少数ＣＴＫｓ受体可能位于细胞质中,与胞内ＣＴＫｓ结合后进入细胞核,直接调节基因的表达。本文综述了近年来对ＣＢＰｓ的研究进展,分析了ＣＴＫｓ受体的可能     

NBS修饰^241Trp对33kD外周蛋白与PSⅡ的结合及放氧活 …

高等植物光系统Ⅱ（ＰＳⅡ）中膜结合的３３ｋＤ外周蛋白对锰分子的稳定及ＰＳⅡ高放氧活力的维持具有重要意义。本文通过ＮＢＳ对菠菜３３ｋＤ蛋白中唯一的色氨酸残基（近Ｃ端＾２４１Ｔｒｐ）的修饰研究了该残基在光合放氧系统中的作用。     

脓青素对光抑制条件下菠菜叶绿体的保护作用

在有氧条件下,脓青素可以缓解强光对菠菜叶绿体电子传递的抑制作用。加入解联剂尼日利亚菌素消除跨膜质子梯度会加剧叶绿体的光抑制,但脓青素的保护作用并不消失。脓青素对光系统Ⅰ与光系统Ⅱ均表现出保护作用,但对ＰＳⅡ的保护在光抑制初期较明显;在厌氧条件下,脓青素加剧叶绿体的光抑制,引起ＤＣＩＰ光还原与水到ｐ－ＢＱ电子传递活力的降低。推测脓青素可能通过促进细胞色素ｂ５５９介导的ＰＳⅡ循环电子传递,减轻了叶绿体的光抑制。     

人类嗜T细胞白血病Ⅰ型病毒TAX蛋白对NF—kB转录因子的作用

人类嗜Ｔ细胞白血病Ⅰ型病毒（ＨＴＬＶ－Ⅰ）是成人Ｔ细胞白血病（ＡＴＬ）的致病因子,其编码的ＴＡＸ蛋白的反式激活在白血病形成中有重要作用。ＮＦ－ｋＢ是细胞活化和产生细胞因子的重要转录调控因子。正常情况下,ＮＦ－ｋＢ因子与抑制性蛋白ＩＫＢ结合,形成复合物存在于胞质中。ＴＡＸ蛋白可与ＩＫＢ激酶γ（ＩＫＫγ）直接结合,而后启动ＴＡＸ对ＩＫＫα和ＩＫＫβ的结合,并使之发生磷酸化。后者使ＩＫＢ蛋白降解,ＮＦ－     

霍乱毒素B亚基融合蛋白表达系统的构建

霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）是良好的免疫佐剂和载体蛋白。本研究通过定点突变,在ＣＴＢ基因（ｃｔｘＢ）３＇端终止密码前引入了限制性内切酶ＥｃｏＲＩ,构建了质粒ＰＭＣ０５,ＰＭＣ０５中ＣＴＢ与下游ｌａｃＺ＇基因阅读框架相同,转化大肠杆菌后能够表达ＣＴＢ与β－半乳糖苷酶α肽的融合蛋白;所表达的融合蛋白能与ＧＭ１结合,说明融合蛋白保持ＣＴＢ的基本高级结构和生物学活性;融合蛋白能与抗－ＣＴＢ抗体结合,说明融合蛋     

霍乱毒素B亚基融合蛋白表达系统的构建

霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）是良好的免疫佐剂和载体蛋白。本研究通过定点突变,在ＣＴＢ基因（ｃｔｘＢ）３′端终止密码前引入了限制性内切酶ＥｃｏＲＩ,构建了质粒ｐＭＣ０５。ｐＭＣ０５中ＣＴＢ与下游ｌａｃＺ′基因阅读框架相同,转化大肠杆菌后能够表达ＣＴＢ与β－半乳糖苷酶α肽的融合蛋白;所表达的融合蛋白能与ＧＭ１结合,说明融合蛋白保持ＣＴＢ的基本高级结构和生物学活性;融合蛋白能与抗－ＣＴＢ抗体结合,说明融合蛋白具有ＣＴＢ的抗原性。以上结果表明：通过将外源抗原决定簇基因融合至ｃｔｘＢ的３′端,在大肠杆菌中表达融合蛋白,构建基因工程肽苗是可行的。还探索了转录终止序列对融合基因蛋白表达水平的影响,构建了高效表达融合蛋白的载体－宿主系统。     

NBS修饰~(241)Trp对33kD外周蛋白与PSⅡ的结合及放氧活性恢复的影响

高等植物光系统Ⅱ（ＰＳⅡ）中膜结合的３３ｋＤ外周蛋白对锰分子簇的稳定及ＰＳⅡ高放氧活力的维持具有重要意义。本文通过ＮＢＳ对菠菜３３ｋＤ蛋白中唯一的色氨酸残基（近Ｃ端２４１Ｔｒｐ）的修饰研究了该残基在光合放氧系统中的作用。结果表明２４１Ｔｒｐ位于３３ｋＤ蛋白内部的疏水区。修饰后的３３ｋＤ外周蛋白对ＰＳⅡ颗粒的重组能力减弱。部分重组上经ＮＢＳ修饰的３３ｋＤ蛋白的ＰＳⅡ颗粒放氧活力得不到恢复。表明２４１Ｔｒｐ对３３ｋＤ蛋白与ＰＳⅡ的结合及功能的实现有着特殊意义。     

ＰＳⅠ颗粒光抑制的可能机理

从菠菜（Spinacia oleracea L.)叶绿体中提取的ＰＳⅠ颗粒中加入不同浓度的组氨酸,利用光谱和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ技术研究了强光（２３００μmol.m^-2.s^-1）处理过程中外加组氨酸对色素和多肽光破坏进程的影响,强光处理可以使ＰＳⅠ颗粒的光吸收减小,在照光３０min后外加组氨酸有效地抑制了光吸收减小的趋势。外加组氨酸在照光约１０min后对ＰＳⅠ颗粒ＣＤ信号的下降也起到了明显的抑制作用。外加组氨酸对ＰＳⅠ颗粒中色素保护作用的这种延迟现象表明,在强光照初期和后期ＰＳⅠ颗粒光抑制的机理可能不同。外加组氨酸还可以有效地抑制光照过程中ＰＳⅠ颗粒７７Ｋ荧光产量的下降,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果表明,外加组氨酸在光照过程中不但对ＰＳⅠ颗粒的反应中心蛋白可以起到保护作用,对其他多肽组分同样有显的保护作用。     

羟胺和肼对烟草光合放氧影响的差异

羟胺对Ｓ状态系统的还原作用比肼强,它可将水裂解的Ｓ状态系统从Ｓ０还原到Ｓ－２,肼只能将Ｓ０还原到Ｓ－１。肼对光合水裂解的抑制作用较羟胺强。在高浓度下（１０００μｍｏｌ／Ｌ）它可完全抑制光合水裂解,使烟草叶绿体产生强烈的氧吸收。羟胺可使暗适应叶绿体的Ｓ状态系统的Ｓｉ（ｉ＝１～４）分布趋向稳态。高浓度羟胺（１０００μｍｏｌ／Ｌ）仍不能完全抑制氧释放,并且对叶绿体氧吸收的诱导作用也很小。     

风干叶片及其叶绿体的光合活性

以荧光诱导动力学、低温荧光发射光谱及希尔反应活性测定为手段,研究了小麦、大豆等高等植物风干叶片（相对含水量（１．５±０．２）％）及其叶绿体的光合活性。暗中风干并保存的叶片照光时仍能进行电荷分离、ＱＡ还原及至少包含ＱＡ－→ＱＢ在内的次级电子传递,其复水后的叶绿体具有光推动的光系统Ｉ电子传递活性（ＤＣＩＰＨ２→ＭＶ）和包含光解水放氧能力在内的光系统ＩＩ电子传递活性（Ｈ２Ｏ→ＤＭＢＱ）,但没有全光合链（Ｈ２Ｏ→ＭＶ）的电子传递活性。光系统ＩＩ核心天线的７７Ｋ荧光峰位（６８６ｎｍ和６９４ｎｍ）不受脱水的影响,而光系统Ｉ外周天线ＬＨＣＩ的７７Ｋ荧光峰位对脱水十分敏感,叶片风干过程中从７３９ｎｍ移到７２６ｎｍ。这些结果表明,光合作用器中越靠近反应中心核心的组分的组织结构越紧密有序,其结构和功能越少受快速水胁迫的影响;在整个光合电子链中,受快速水胁迫影响最大的部位在两个光系统之间,这个部位的电子传递被风干处理不可逆地阻断。     

羟胺和肼对烟草光合放氧影响的差异

羟胺对Ｓ状态系统的还原作用比强，它可将水裂解的Ｓ状态系统从Ｓ０还原到Ｓ－２，肼只能将Ｓ０还原到Ｓ－１。肼对光合水裂解的抑制作用较羟胺强，在高浓度下（１０００μｍｏｌ／Ｌ）它可完全抑制光合水裂解，使烟草叶绿体产生强烈的氧吸收，羟胺可使暗适应叶绿体的Ｓ状态系统的Ｓｉ（ｉ＝１～４）分布趋向稳态，高浓度羟胺（１０００μｍｏｌ／Ｌ）仍不能完全抑制氧释放，并且对叶绿体氧吸收的诱导作用也很小。     

海生植物叶绿体膜中阳离子诱导激发能分配变化的静电控制与非静电控制的研究

用Ｃａ２＋和胰酶处理大叶藻（Ｚｏｓｔｅｒａｍａｒｉｎａ）和刺松藻（Ｃｏｄｉｕｍｆｒａｇｉｌｅ）叶绿体膜,研究了它们的类囊体膜多肽组分与Ｍｇ２＋诱导Ｃｈｌａ荧光和膜表面电荷变化之间的相互关系。观察到：（１）在大叶藻的叶绿体膜中,Ｍｇ２＋诱导ＰＳ－Ⅱ荧光强度的增高与其诱导类囊体膜表面电荷密度的降低密切相关;但这种相关性的效应不存在于刺松藻的叶绿体膜中。（２）用Ｃａ２＋处理这两种叶绿体膜分别除去其类囊体膜表面的３２－３４ＫＤ和３０－３１ＫＤ多肽,对上述Ｍｇ２＋诱导的现象无明显的影响。（３）用胰酶进一步消化这些Ｃａ２＋处理过的叶绿体膜分别除去其类囊体膜表面的２６ＫＤ和２３－２４ＫＤ多肽,那么在大叶藻的叶绿体膜中,Ｍｇ２＋诱导荧光和类囊体膜表面电荷变化的相关性效应则全部消失;但在刺松藻的叶绿体膜中,Ｍｇ２＋诱导荧光增高的效应完全消失,而Ｍｇ２＋诱导膜表面电荷变化的性质则保持不变。这些实验结果不仅证明,类囊体膜表面的２６ＫＤ和２３－２４ＫＤ多肽分别为大叶藻和刺松藻叶绿体膜中阳离子诱导激发能在ＰＳ－Ⅱ和ＰＳ－Ⅰ之间分配变化的特异性作用部位;而且说明阳离子调节激发能在这两个光系统之间分配的机理,在这两种海生植物的叶绿体膜中     

叶片阶段性白化小麦的叶绿体激发能分配和荧光动力学特征

叶片阶段性白化小麦是一种非常特殊的色素突变体。本文对其白色、白绿相嵌及转绿叶片的叶绿体光化活性分别进行了测定。试验表明：（１）白化和白绿相嵌叶片的叶绿体色素合成处于停滞阶段,转绿叶片则处于色素迅速合成阶段;（２）白化、白绿相嵌和转绿叶片叶绿体的激发能传递呈递增趋势;（３）三者对绿体的ＰＳⅡ活性和原初光能转化效率也呈递增趋势;（４）白化叶片叶绿体缺乏ＰＳⅠ和ＰＳⅡ外周天线色素蛋白,白绿相嵌和转绿叶片的类囊体膜多肽组分与正常叶片相近似。     

蚕豆叶绿体atpE基因的克隆,测序和表达

蚕豆叶绿体的ａｔｐＥ和ａｔｐＢ基因在叶绿体ＤＮＡ ＫｐｎＩ酶切的第九条（约４．０ｋｂ）片段上,此片段被克隆到载体ｐＵＣ１８中,构成重组质粒ｐＵＫ１。用玉米叶绿体ａｔｐＥ基因作探针对ｐＵＫ１的ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＩ等的酶切产物进行杂交,确定了蚕豆叶绿体的ａｔｐＥ在ＣｌａＩ酶切的约０．９ｋｂ的片段上。根据ｐＢｕｌｅｓｃｒｉｐｔ ＫＳ（＋）ＤＮＡ多聚接头Ｆ引物和Ｒ引物测序,得到ε亚基基因的完整核苷酸序列。     

重组FAS分子的表达、纯化及抗体制备

用ＰＣＲ法扩增出编码人ＦＡＳ分子胞外区的ｃＤＮＡ片段,直接克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,经ＤＮＡ序列测定后,再插入到谷胱甘肽转硫酶（ＧＳＴ）融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－ＫＧ的ＥｃｏＲⅠ和ＳａｌⅠ位点之间,构成重组质粒ｐＫＧ－ｈＦＡＳ,将此质粒导入大肠杆菌,经ＩＰＴＧ诱导后获得ＧＳＴ－ｈＦＡＳ重组融合蛋白的表达,用谷胱甘肽偶联的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ经亲合层析获得纯化的ＧＳＴ－ｈＦＡＳ蛋白,经凝血酶酶切和二次亲合层析去除ＧＳＴ部分,得到纯化的ＦＡＳ蛋白．用纯化的ＦＡＳ抗原免疫家兔制备了抗ＦＡＳ抗体,经检测发现抗ＦＡＳ抗体能诱导Ｕ９３７细胞发生细胞凋亡