非复制性重组金丝雀痘病毒活载体疫苗人体初免试验取得良好效果

自从表达狂犬病毒糖蛋白的非复制性金丝雀痘病毒和复制性痘苗病毒重组活载体疫苗接种哺乳动物(小鼠、狗或猫)取得同等水平免疫保护效力的试验结果去年公诸于世后,相继又有报道研制成功表达麻疹病毒糖蛋白和日本脑炎、黄热、登革等病毒的包膜、膜和非结构蛋白的非复制性重组金丝雀痘病毒活载体疫苗,并在动物实验中取得类似免疫保护效果。尽管有关机制目前尚不清楚,但与传统观点——病毒抗     

抑制麻疹病毒体外复制的效应性小干扰RNA的鉴定

为了鉴定抑制麻疹病毒体外复制的靶向Rab9GTPase基因效应性小干扰RNA（siRNA）,根据。iRNA设计原则和Rab9GTPase基因的mRNA序列,设计并化学合成8对靶向Rab9GTPase基因的siRNAs和1对阴性对照siRNA,经脂质体法转染Vero—E6细胞株,转染10h后感染麻疹病毒Edmonston株。通过逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测转染后细胞内Rab9GTPasemRNA水平;通过标准蚀斑试验检测麻疹病毒滴度。同对照组相比,8对靶向Rab9GTPase基因siRNAs中的2对（Rab9-4和Rab9—7）,以时间和剂量依赖性的方式显著地抑制细胞内Rab9GTPasemRNA表达和麻疹病毒的复制（抑制率高达90％以上）,其他的siRNAs对细胞内Rab9GTPasemRNA表达和麻疹病毒的复制的抑制性效应则低于50％。结果表明,Rab9-4和Rab9—7是体外抑制麻疹病毒复制的最有效的siRNAs,这些siRNAs靶序列能被用来深入研究RNA干扰治疗麻疹病毒感染的可能性。     

双链RNA病毒的复制机制

本文对双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）病毒复制机制的研究进展进行了综述。根据ｄｓＲＮＡ病毒复制周期,分以下几方面对其复制的有关分子进行分析：转录、转录本释放和“满头”复制模型、（＋）ＲＮＡ转译、病毒包装、（－）ＲＮＡ合成等。此外,还简要分析了宿主基因及其产物在病毒复制中的作用。     

miR-223促进小鼠胚胎成纤维细胞复制性衰老

微小RNA（MicroRNAs（或miRNAs）是作为强大的基因表达调控子,广泛参与多种生命过程,在细胞衰老进程中的作用也日益受到关注。miR-223是一个典型的抑癌基因,可显著抑制细胞增殖能力。此外,miR-223与阿尔茨海默症、心血管疾病以及类风湿性关节炎等衰老相关疾病的发生发展密切相关。尽管如此,miR-223在细胞衰老进程中的作用及其分子机制尚未见报道。本研究通过连续传代建立了小鼠胚胎成纤维细胞（MEF细胞）的复制性衰老模型,并利用荧光定量qRT-PCR检测发现,miR-223在衰老MEF细胞中的表达水平显著上调。随后,通过转染miR-223模拟物Agomir-223在MEF细胞中过表达miR-223,结果显示过表达miR-223可显著促进MEF细胞的衰老表型并抑制其增殖能力,而抑制miR-223的表达可延缓MEF细胞的复制性衰老进程。进一步利用生物信息学方法预测获得多个miR-223的候选衰老相关靶基因,包括Rasa1、Ddit4和Smad1等。然而双萤光素酶报告系统结果显示,miR-223并不显著影响其萤光强度,表明它们很可能并不是miR-223的下游靶基因。综上所述,miR-223可显著促进MEF细胞复制性衰老,然而其调节细胞衰老进程的分子机制依然有待深入研究。     

原核生物DNA的程序性复制

原核生物ＤＮＡ的程序性复制薛建华明镇寰（杭州大学生命科学学院,杭州３１００１２）关键词聚合酶Ⅲ全酶复制叉程序性ＤＮＡ的复制是一个复杂的过程,需要各种蛋白质、酶之间及蛋白质与ＤＮＡ之间的相互作用,才能顺利完成。原核生物（如Ｅ．ｃｏｌｉ）是以ＤＮＡ聚合酶...     

非复制型痘苗病毒的生物学性状研究进展

痘病毒被广泛用于针对多种感染性疾病和癌症的疫苗研究,而非复制型痘苗病毒的发展又进一步提高了其安全性。来源于中国天花疫苗株的复制缺陷型痘苗病毒天坛株(NTV)正是一株非复制型痘苗病毒。为了促进未来NTV作为疫苗候选株在临床中的应用,我们对NTV与另外2株非复制型痘苗病毒,即改良痘苗病毒安卡拉株(MVA)和NYVAC的生物学性状做简要综述,主要讨论了它们的基因组结构、体外生长特性、病毒复制和形态发生、组织中的病毒分布和病毒-宿主细胞间的相互作用。     

利用高度减毒的水疱性口炎病毒疫苗平台控制乙肝病毒复制

<正>治疗性疫苗可能是治疗慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染的治疗方案的重要组成部分。作者先前证明,表达HBV中部表面糖蛋白(HBV Middle Surface Glycoprotein,MHBs)的重组野生型水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)在HBV复制小鼠模型中诱导功能性免疫应答。然而,VSV具有一些不良的致病特性,在人类中使用此平台需要进一步的病毒减毒。因此,作者     

人类腺病毒载体疫苗及其免疫研究进展与展望

复制性和非复制性重组人类腺病毒（Ａｄ）活载体口服疫苗的开发使用是十多年来疫苗研究领域的一项重大突破。目前国际上倾向于以Ａｄ为表达载体发展多价重组口服活疫苗,尤其在艾滋病、乙型肝炎、狂犬病、单纯疮疹病毒疫苗研制上成效显著,共表达ＨＢｃＡｇ／ＨＢｅＡｇ和ＨＢｓＡｇ或共表达ＨＩＶ-１ｒｅｖ和ｇａｇ多肽的重组Ａｄ７活载体疫苗在实验动物免疫上取得良好效果,共表达狂犬病毒糖蛋白、核蛋白及微小磷蛋白的重组Ａｄ活载体口服疫苗应及时研制,安全有效的重组Ａｄ载体疫苗乃至全价、多型、多联疫苗必将大量推出并成功地得到临床应用。非复制性重组Ａｄ活载体在疫苗制备及某因防治上具有很大的潜在应用价值,应当深入研究。     

载体疫苗,反义治疗及抗病育种的研究进展

载体疫苗、反义治疗及抗病育种的研究进展张德礼（北京军区后勤部军马防治检验所,１０００７１）近年来,国内外在利用载体技术制各重组疫８、利用反义技术治疗疾病以及通过转基因技术进行抗病育种方面的研究取得了重大进展。一、病毒载体疫苗载体疫苗是以病毒或细菌作载...     

IL—5在非复制重组痘苗病毒中的表达及其对重组病毒免疫效效果的影响

利用非复制痘苗病毒表达载体pNEOCKβ751IL5和重组病毒RVJ123,通过两步重组构建了能同时表达IL－5和乙型肝炎病毒HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ123△11β75IL5。Southern-blot证实,痘苗病毒C－K片段间基因缺失的同时伴有IL－5基因的插入,鼻腔吸入分别免疫Balb/c小鼠和新西兰白兔。ELISPOT实验证实,免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgA抗分分泌细胞（ASC）数比对照组（RVJ123△11β75）增加约2倍,而同时小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgG抗体分泌细胞（ASC）数与对照组无差别。可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其它分泌液样品中检测到抗乙型肝炎病毒HBsAg的特异性的IgA,IgG抗体,与对照组相比,IgA抗体阳性转率及抗体滴度提高,而IgG则无差异。本实验说明：IL－5可在体内选择性地增强机体的粘膜IgA反应。提示非复制载体疫苗中,表达的该细胞因子有效的增强疫苗的的粘膜免疫反应,为粘膜疫苗的发展策略提供了新的途径。     

真核细胞染色体DNA复制起始及复制叉稳定性维持的机制

在真核生物中,DNA复制在染色体上特定的多位点起始．当细胞处在晚M及G1期,多个复制起始蛋白依次结合到DNA复制源,组装形成复制前复合体．pre．RC在Gl-S的转折期得到激活,随后,多个直接参与DNA复制又形成的蛋白结合到DNA复制源,启动DNA的复制,形成两个双向的DNA复制又．在染色体上,移动的DNA复制又经常会碰到复制障碍（二级DNA结构、一些蛋白的结合位点、损伤的碱基等）而暂停下来,此时,需要细胞周期检验点的调控来稳定复制叉,否则,会导致复制又垮塌及基因组不稳定．本文就真核细胞染色体DNA复制起始的机制,以及复制又稳定性的维持机制进行简要综述．     

新型的基于基因组复制缺陷性仙台病毒载体的免疫原性疫苗平台的评价

<正>作者开发了一种以副黏病毒基因组复制缺陷性仙台病毒为基础的新型疫苗平台。这种仙台病毒载体可以表达插入到基因组的异源性基因。为了在体内验证这种新型方案,作者构建了针对呼吸道合胞病毒(RSV)和人乳头瘤病毒3型(PIV3)的联合疫苗候选物。本项研究比较了2种不同的展示异源性抗原的方法 :(i)RSV融合蛋白F,在转录单位中以分泌性蛋白形式被编码,在感染细胞中表达后可作     

HPV16型E7复制型DNA疫苗诱发的抗肿瘤免疫反应

为了研制有效的疫苗 ,用于HPV16型重度感染和与其感染相关的宫颈癌晚期病人手术后的免疫治疗 ,用复制型DAN疫苗载体 pSCA1,在其CMVIE启动子之下插入修饰的HPV16型E7基因mE7- 3( 2 4G、2 6G、6 7R) ,构建成 pSCA1mE7- 3复制型DNA疫苗。以重组质粒免疫C5 7BL/ 6小鼠 ,检测诱发的特异性CTL活性 ;将免疫后的小鼠用TC - 1肿瘤细胞攻击 ,观察免疫保护效果。实验结果显示 :pSCA1mE7- 3复制型DNA疫苗能诱导小鼠产生针对TC - 1肿瘤细胞的特异性CTL反应 ;复制型DNA疫苗免疫后的小鼠能耐受 1× 10 4 TC - 1细胞的攻击 ,成瘤时间推迟 ,并且成瘤率明显下降 ,部分小鼠得到保护能免受肿瘤攻击。因此pSCA1mE7- 3复制型DNA疫苗可作为HPV16相关肿瘤的癌前病变及中晚期病人术后免疫治疗的候选疫苗。     

大熊猫染色体腹复制带研究

以培养的大熊猫外周血淋巴细胞为实验材料,在细胞培养终止前４ｈ加入ＢｒｄＵ（终浓度为１０μｇ／ｍｌ培养基）,对复制的染色体ＤＮＡ进行ＢｒｄＵ标记。掺入ＢｒｄＵ的染以体吖啶橙（０．０５％）处理、紫外光照射、Ｇｉｅｍｓａ染色后,可在染色体上获得清晰的复制带纹。根据众多分裂相所显示的不同复制带型,可初步确定大熊猫每一染色体独特的晚复制带纹。在雌性个体的两个Ｘ染色体中,一条Ｘ染色体复制明显落后于另一Ｘ染色体     

大熊猫染色体晚复制带研究

以培养的大熊猫外周血淋巴细胞为实验材料,在细胞培养终止前４ｈ加入ＢｒｄＵ（终浓度为１０μｇ／ｍｌ培养基）,对复制的染色体ＤＮＡ进行ＢｒｄＵ标记。掺入ＢｒｄＵ的染色体经吖啶橙（０．０５％）处理、紫外光照射、Ｇｉｅｍｓａ染色后,可在染色体上获得清晰的复制带纹。根据众多分裂相所显示的不同复制带型,可初步确定大熊猫每一染色体独特的晚复制带纹。在雌性个体的两个Ｘ染色体中,一条Ｘ染色体复制明显落后于另一Ｘ染色体,尤其在迟复制Ｘ染色体长臂近着丝粒区显现出较宽的晚复制带纹。     

可复制性单纯疱疹病毒在抗肿瘤方面的应用

单纯疱疹病毒是肿瘤生物治疗中常用的病毒载体之一,可复制性单纯疱疹病毒以其溶瘤效率高、特异性好、可行性强成为近年来研究的热点。其中对溶瘤性单纯疱疹病毒突变株G207的研究开展得早,其溶瘤效果、靶向性及安全性都得到了确认,这也带动了可复制性单疱病毒应用的发展,目前已研究出多种溶瘤单纯疱疹病毒突变株。本文就近几年可复制性单纯疱疹病毒在抗肿瘤方面的研究现状加以综述,以探讨其临床治疗肿瘤的潜在价值及可行性。     

RNA病毒的复制途径

ＲＮＡ病毒的复制途径聂剑初（北京师范大学生物学系１００８７５）ＤＮＡ病毒在其基因组复制和表达过程中利用许多的宿主蛋白质。ＲＮＡ病毒的复制则面临一个特殊的问题,即未受侵染的宿主细胞没有按照ＲＮＡ模板的指令合成ＲＮＡ的酶。因此,ＲＮＡ病毒必须含有合成这类...     

有丝分裂期DNA合成（MiDAS）及其介导的端粒复制

DNA复制压力（replication stress，RS）是一个广泛定义DNA复制障碍的术语，通常是指那些能够扰乱复制进程，造成复制叉减慢或停滞的情况。复制压力的过度累积是肿瘤发生和基因组不稳定的主要驱动因素。细胞染色体在复制过程中会不断地遭受来自外源性或内源性复制压力，而端粒及常见脆性位点（common fragile sites，CFSs）是一类对复制压力高度敏感的区域，在复制压力较高的情况下，这些区域往往难以被完全复制。近年的研究发现，有丝分裂期DNA合成（mitotic DNA repair synthesis，MiDAS）区别于S期的复制，可以帮助难以复制的区域在进入有丝分裂期后仍然能够保证复制的进行，因此，MiDAS也被称为“复制的挽救机制”。由于端粒的维持依赖于端粒酶活性及端粒替代性延长机制（alternative lengthening of telomeres，ALT），而具有更多端粒脆性的ALT细胞中端粒-MiDAS表现出高度的活性，因此本文就MiDAS的发生机制及在不同端粒维持机制下难以复制的端粒如何应对复制压力在有丝分裂期完成DNA的合成进行综述。     

《DNA复制：调节机制》

《ＤＮＡ复制：调节机制》《ＤＮＡ复制：调节机制》（ＤＮＡｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ：ｔｈｅｒｅｓｕｌａｔｏｒｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ）由Ｐ．Ｈｕｇｈｅｓ等人编著,１９９２年斯普林格出版社出版,４２２页。该书有下列章节：１．细胞ＤＮＡ复制。ＤＮＡ复制的细胞周...     

miRNA-132增强人类免疫缺陷病毒1型复制

小分子RNA（miRNA）在CD4＋T细胞活化期间上调可能有助于人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）在静息期扰动后复制效率的提高。该研究发现,miRNA-132（miR-132）在CD4＋T细胞活化后高度上调,且能增强病毒在JurkatCD4＋T细胞系中的复制。