鞘氨醇激酶-磷酸鞘氨醇轴在血管生成相关性疾病中的作用

血管生成是指在原有血管的基础上形成新血管的过程。病理性血管生成是癌症、心血管类疾病和视网膜病变等一系列疾病的标志。1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)是一种信号脂质,由鞘氨醇激酶（sphingosine kinases,SPHK）合成,通过5种G蛋白偶联受体(sphingosine-1-phosphate receptors,S1PR1-5)发挥其不同的生物学和病理生理作用,并通过激活受体启动各种信号级联反应,影响细胞命运、血管张力、内皮功能和完整性以及淋巴细胞的运输等。其产生和信号的失衡与内皮功能障碍和异常血管生成等病理过程密切相关。越来越多的证据表明, SPHK-S1P轴在血管生成中发挥重要作用,尤其在癌症的发生发展与肿瘤微环境、动脉粥样硬化、心肌梗死等心血管类疾病,以及糖尿病和视网膜病变中具有重要意义。研究其相关作用与功能,可为治疗血管生成相关疾病提供新见解和药物治疗靶点。本文就SPHK-S1P轴通过SPHK以及S1PR1-5影响内皮细胞和平滑肌增殖、内皮细胞迁移以及由内皮细胞、周细胞和平滑肌细胞等形成管腔的分子机制进行阐述,同时进一步阐述SPHK-S1P轴如何通过鞘氨醇激酶以及S1PR1-5影响肿瘤、心血管类疾病、糖尿病以及视网膜病变中血管生成,旨在通过理解SPHK-S1P轴在血管生成中的分子机制为相关疾病提供新的治疗思路。     

1-磷酸鞘氨醇受体

1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)对动脉粥样硬化等心血管疾病的发生发展具有重要作用。最近研究发现S1P在不同细胞发挥的生物学效应由其受体(sphingosine-1-phosphate receptor,S1PR)介导,以S1PR及其信号机制为基础的研究及治疗策略成为新的研究热点。本文主要综述S1PR的功能、信号通路及对心血管疾病的影响,为心血管疾病的预防和诊疗提供新的靶点。     

芬戈莫德通过鞘氨醇-1-磷酸信号通路抑制肝癌细胞迁移的实验研究

目的 探讨鞘氨醇-1-磷酸(SIP)信号通路及其抑制剂芬戈莫德(FTY720)在体外实验中对不同侵袭潜能人肝细胞癌(HCC)细胞迁移能力的作用。方法通过Real-time PCR和免疫印迹的方法比较低侵袭潜能HCC细胞MHCC-97L和高侵袭潜能HCC细胞MHCC-97H中S1P信号通路关键分子及下游促迁移信号通路的表达与活性水平。使用外源性S1P刺激MHCC-97L细胞,并使用siRNA干扰MHCC-97H细胞中S1P受体1(S1PR1)的表达,通过划痕愈合实验和Transwell实验检测HCC细胞迁移能力的变化。最后使用FTY720处理MHCC-97H细胞,观察S1P及其下游信号通路表达及活性的变化,并研究FTY720对MHCC-97H细胞迁移能力的影响。两组间数据比较采用t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析。结果高侵袭潜能MHCC-97H细胞中,S1PR1、鞘氨醇激酶1(SphK1)及鞘氨醇激酶2(SphK2)的相对表达量分别为5.94±0.78、1.64±0.30及1.48±0.28,高于低侵袭潜能MHCC-97L细胞的1.00±0.06、1.00±0.06及1.00±0.09,差异具有统计学意义(t=10.96,3.575,2.841;P均0.05)。MHCC-97H细胞中S1PR1、SphK1及SphK2的蛋白表达水平及活性以及S1PR1下游与细胞迁移能力密切相关的Src、粘着斑激酶(FAK)和Janus激酶2(JAK2)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)信号通路活性明显高于MHCC-97L细胞。外源性S1P可促进MHCC-97L细胞的划痕愈合能力。MHCC-97L的Transwell细胞迁移实验显示:S1P刺激组迁移过膜细胞数为(178.33±10.01)个/视野,显著多于空白对照组的(88.00±8.54)个/视野,差异具有统计学意义(F=116.60,P0.01)。相反的,使用siRNA干扰MHCC-97H细胞中S1PR1表达后,细胞的划痕愈合能力受到明显抑制,Transwell实验显示:阴性对照组迁移过膜细胞数为(209.33±4.51)个/视野,而S1PR1特异性siRNA转染组迁移过膜细胞数为(98.67±9.02)个/视野,显著少于阴性对照组,差异具有统计学意义(t=19.01,P0.01)。FTY720作为S1P通路抑制剂,同样抑制了MHCC-97H细胞的划痕愈合能力,Transwell实验同样显示:FTY720处理组迁移过膜细胞数为(58.67±6.03)个/视野,显著少于对照组的(203.33±10.41)个/视野,差异具有统计学意义(t=20.833,P0.01)。FTY720的作用机制可能在于通过下调SphK1和S1PR1,抑制下游促迁移信号通路的活性,并进一步抑制HCC细胞的迁移。结论 S1P信号通路参与了HCC细胞的迁移,而FTY720作为一种具有抗HCC活性的免疫抑制剂,可能通过下调S1P及其下游信号转导,抑制HCC细胞的迁移能力。     

鞘氨醇-1-磷酸对人脐带间充质干细胞增殖及表面标记物表达的影响

鞘氨醇－1－磷酸（sphingosine－1 phosphate, S1P）是一种脂质信号分子,与细胞增殖、凋亡和迁移等有密切关系．本研究发现,S1P促进人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC－MSCs)增殖,但目前关于其作用信号通路及S1P对hUC－MSCs表面标记表达的影响尚不十分清楚．Real－time PCR检测hUC－MSCs中S1P受体mRNA表达情况,发现在hUC－MSCs中优势表达S1PR1 3,而S1PR4、S1PR5的表达很少．MTT法检测S1PR1/3拮抗剂VPC23019、S1PR2拮抗剂JTE013、S1PR3拮抗剂CAY10444、Gi蛋白抑制剂PTX和ERK抑制剂PD98059对S1P诱导hUC－MSCs增殖的影响．结果显示,VPC23019完全抑制S1P诱导的hUC MSCs增殖,JTE013对此没有明显影响,CAY10444部分抑制S1P诱导的hUC MSCs增殖,PTX、PD98059完全抑制S1P诱导hUC－MSCs增殖．进一步用Western印迹检测ERK1/2磷酸化水平揭示,S1P通过促进ERK1/2磷酸化进而促进hUC MSCs增殖．流式细胞术检测发现,S1P对hUC MSCs表面标记物(CD45、CD34、CD90、CD29、CD105、CD44、CD73、CD71)表达没有明显影响．本研究证明,S1P通过S1PR1/3、Gi偶联蛋白及ERK1/2信号通路促进hUC MSCs增殖,而对hUC MSCs表面标记物表达无明显影响．     

S1PR1在心血管系统中的作用及研究进展

1-磷酸鞘氨醇受体1(sphingosine 1-phosphate receptor 1,S1PR1)是5个S1P受体之一,最早发现于内皮细胞分化和新生血管形成过程中。S1PR1广泛表达于内皮细胞、免疫细胞、淋巴细胞、巨噬细胞及肌肉等多种组织细胞。随着研究的不断深入,已经证实S1PR1参与多种机体病理生理过程,可阻止细胞凋亡,促进细胞生长和繁殖,能调节机体免疫和炎症反应并应用于临床。在心血管系统中,S1PR1在血管新生、淋巴细胞运输、心脏的生长发育以及维持血管的正常通透性等方面具有重要作用。本文将着重就S1PR1在心血管系统中作用及其机制的研究进展作一介绍。     

脂质活性信号分子鞘氨醇-1-磷酸及其生物学特性

鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)是目前颇受关注的脂质信号分子.体内S1P主要由红细胞内鞘氨醇激酶催化鞘氨醇合成,后经由ATP结合盒式转运子释放入血浆.血浆S1P超过半数存在于高密度脂蛋白和血清白蛋白上.S1P可通过直接胞内作用和激活其特异性G蛋白偶联受体产生多种重要生物学效应.S1P1-5型受体在体内各类型组织和细胞表达水平不同,参与包括细胞增殖、存活、迁移等多种生物学过程.     

鞘氨醇1- 磷酸受体4 研究进展

鞘氨醇1-磷酸(Sphingosine-1-phosphate,S1P)是一种具有生物学活性的溶血磷脂信号分子,在体内通过G蛋白偶联受体(G protein coupled receptor,GPCR)家族鞘氨醇1-磷酸受体(S1P receptors)的5个亚型(S1P1-5)介导多种生物学功能。S1P4也称内皮分化基因受体6(Endothelial differentiation gene receptor 6,Edg-6),主要在淋巴组织和造血组织中表达。近年的研究发现,免疫细胞的迁移分化、骨骼肌前体细胞的迁移、乳腺癌细胞的增殖、TGFβ1介导的抑制骨骼肌细胞凋亡均与S1P4相关。本文将综述近几年来关于S1P介导S1P4的生理病理应答及相关的信号转导机制。     

植物体内的鞘氨醇-1-磷酸(S1P)

鞘氨醇-1-磷酸（S1P）在植物体内也可作为一种信号分子参与ABA介导的保卫细胞信号转导过程,这一途径和异三聚体G蛋白相耦联。文章对此问题的研究进展作了介绍。     

鞘氨醇-1-磷酸与免疫细胞的调节

鞘氨醇-1-磷酸（sphingosine-1 phosphate,S1P）是来源于鞘脂代谢途径的多效性信号分子,其代谢受到多种因素调控。S1P由细胞内的鞘氨醇激酶（sphingosine kinases,SphKs）催化鞘氨醇的磷酸化而合成,可通过转运蛋白释放至细胞外。S1P可通过在胞外结合其特异性G蛋白偶联受体及胞内作用而调节多种重要生物学效应。作为细胞外介质和细胞内信使,S1P在免疫系统中也发挥重要的调节作用。S1P参与免疫细胞的迁移、增殖、分化及死亡细胞清除等过程。本文对S1P的代谢以及其对于免疫细胞的调节作用进行综述。     

磷酸鞘胺醇对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的调控及机制研究

采用Western blot、免疫荧光和PCR检测小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7中S1P受体1-3(S1PR1-3)的表达,然后应用吞噬实验和免疫荧光的方法检测磷酸鞘胺醇(sphingosine 1-phosphate,S1P)对其吞噬功能的调节。分别应用药理学工具和小干扰RNA的方法研究S1P调节其吞噬活性的作用机制。结果显示,小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7表达S1PR1-3;S1P剂量依赖地增强小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的吞噬功能,应用S1PR2或S1PR3的拮抗剂和si RNAs可抑制S1P增强的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的吞噬活性;而应用S1PR1的拮抗剂和si S1PR1并不影响S1P增强的RAW264.7的吞噬作用;且S1P可以显著上调RAW264.7中S1PR2和S1PR3的表达,但是不改变S1PR1的表达,提示S1P通过正反馈机制增强其介导的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的吞噬功能。结果表明,S1P/S1PR2/3信号通路增强小鼠单核巨噬细胞吞噬活性,为单核巨噬细胞吞噬作用的分子机制调控研究提供了新线索。     

1- 磷酸鞘氨醇受体调节剂的研发现状

1- 磷酸鞘氨醇（S1P）具有多种生物学功能,S1P 受体（S1PR）调节剂可以用于治疗多种免疫性疾病。芬戈莫德是首个上市的 S1PR 调节剂,用于治疗多发性硬化症（MS）,2015 年销售额达到27 亿美元。药渡网数据显示：目前全球有14 个S1PR 调节剂进入临床, 适应证包括MS、银屑病、类风湿性关节炎和炎症性肠病等。国内目前针对S1PR 靶点的药物有1 个新药奥芬米洛已获批临床,另1 个 新药CBP-307 处于临床在审评阶段。简介S1PR 的生物学功能和S1PR 调节剂在国内外的开发情况,为靶向S1PR 的药物开发提供参考。     

S1P通过S1PR-3/PI3K促进少突胶质前体细胞增殖机制的研究

探讨鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)对少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的影响及其作用机制。使用P3SD乳鼠构建OPCs原代培养体系,运用倒置相差显微镜、CCK-8、流式细胞术(FCM)、Ed U及Western blotting检测细胞增殖情况和蛋白表达量。结果证实S1P能促进OPCs增殖,并且随着S1P浓度升高呈上升趋势,在10滋mol/L时细胞增殖能力最佳;其增殖机制是通过与S1PR-3结合,激活PI3K/p-ERK信号通路,使S期细胞比例上调。OPCs可增殖、迁移和分化到损伤部位进行抗髓鞘修复,因此关于OPCs增殖的深入研究对于脱髓鞘疾病的临床治疗具有重大意义。     

Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞作用功能及相关分子机制的研究

目的:研究Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞功能作用及分子机制。方法:MTT检测Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞SGC-7901、AGS增殖的影响;流式细胞术检测Hsa-miR-411-3P对胃癌细胞SGC-7901、AGS周期和凋亡的影响; RNAhybrid2. 1. 2、Miranda3. 3a、TargetScan7. 0预测Hsa-miR-411-3P靶基因,与m RNA测序结果联合分析,取交集基因认为是比较可靠的靶基因,进行GO、KEGG分析; Real-time PCR检测Hsa-miR-411-3P靶基因VAV3、ROCK2、PLD1、PTCH1的表达。结果:过表达Hsa-miR-411-3P抑制SGC-7901、AGS细胞增殖,促进凋亡,使SGC-7901细胞周期阻滞在S期,AGS细胞周期阻滞在G1期;软件预测和测序结果联合分析获得235个交集靶基因; Hsami R-411-3P靶基因分子功能集中在酶结合、蛋白质结合、转移酶活性等;生物学过程集中在代谢过程、细胞组件组装、解剖结构发展、细胞成分生物发生等(P 0. 05); KEGG信号通路集中在胰岛素信号通路、cAMP信号通路、AMPK信号通路、FOXO信号通路等(P 0. 05); VAV3、ROCK2、PLD1、PTCH1共同参与cAMP信号通路;过表达Hsa-miR-411-3P的SGC-7901、AGS细胞中,VAV3、ROCK2 m RNA表达量均减少,PLD1 m RNA表达量在SGC-7901细胞中增加,在AGS细胞中减少;PTCH1 m RNA表达量在SGC-7901细胞中减少,在AGS细胞中增加。结论:过表达Hsa-miR-411-3P将下调靶基因VAV3、ROCK2的表达,从而影响cAMP信号通路,抑制SGC-7901、AGS细胞增殖,促进凋亡,使SGC-7901细胞周期阻滞在S期,AGS细胞周期阻滞在G1期。     

鞘氨醇激酶信号途径对骨重建的调节作用

鞘磷脂是哺乳动物细胞质膜的主要成分之一,在其代谢过程中,鞘氨醇激酶（sphingosine kinase, SPHK）是一个关键性的调节酶.鞘磷脂代谢产物鞘鞍醇经SPHK磷酸化作用产生的鞘氨醇-1-磷酸（S1P）是一种具有生物活性的脂类,参与调节骨骼、神经、免疫、血液系统等多种组织细胞的生物学过程.本文阐述了SPHK/S1P信号途径相关分子,并综述了SPHK/S1P通过调节骨组织细胞的形态结构、增殖、迁移、分化形成及凋亡等功能,进而调节骨重建平衡过程的生物学效应及其机制.     

P90核糖体S6蛋白激酶家族与人类疾病的关系

P90核糖体S6激酶(ribosomal S6 kinase,RSK)属于苏氨酸/丝氨酸激酶家族,是Raf-MEK-ERK级联信号通路下游重要的一级效应分子,通过磷酸化大量的细胞内蛋白来调节细胞分裂、存活和分化等,迄今已发现此家族有4个成员,在人体各种细胞及组织中的分布和作用不同,它们的异常表达可能会产生不同的病理改变.本文对RSKs与某些疾病发生发展的关系及可能的机制做简要综述.     

Dickkopf相关蛋白1抑制肺炎支原体P1-C诱导小鼠肺上皮细胞过度分泌MUC5AC

肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae)是儿童和成人最常见的呼吸道感染病原体。临床观察肺炎支原体感染会引起呼吸道黏液大量分泌,给患者呼吸造成困难,已有研究表明肺炎支原体感染会引起大量黏蛋白5AC (mucin 5AC,MUC5AC)的分泌。肺炎支原体P1黏附素通过介导病原体与宿主细胞的黏附在肺炎支原体感染的发病机制中发挥重要作用,其中P1的C-末端残基(P1-C)具有免疫原性。本研究探讨了Wnt(Wingless,Wnt)/β-catenin信号通路抑制因子Dickkopf-1(Dickkopf-1, DKK1)在肺炎支原体P1-C诱导的肺上皮细胞分泌黏蛋白MUC5AC的分子机制。利用扫描电镜(scanning electron microscope, SEM)、苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肺炎支原体P1-C对小鼠肺上皮细胞(mouse airway epithelial cells, MAECs)黏液分泌的影响;利用蛋白芯片技术检测肺炎支原体P1-C对小鼠气道上皮细胞炎症因子分泌及对相关信号通路的富集分析;采用糖原染色(perio...     

P15INK4B高表达对人黑色素瘤细胞G1/S进程的阻滞及与MAPK信号相关性之初探

利用TdR-N_2O同步法分别获得P15高表达的MLIK6和表达空载体的MLC2的M期细胞和G_1期细胞,~3H-TdR掺入结果显示,与对照组细胞MLC2相比,实验组细胞MLIK6从G_1期进入S期时间延长2h,并且掺入强度明显减弱,DNA合成被抑制。进一步观察了P15~(INK4B)对G_1/S相关调控蛋白的影响,在M期细胞释放8h(晚G_1期细胞)后,与对照组MLC2细胞相比,实验组MLIK6细胞中CyclinD1,CyclinE,Cdk4,C-Myc蛋白水平均降低。相反,P27~(KIP1)的表达却上升。同时探讨了MAPK信号在P15~(INK4B)阻抑A375细胞G_1/S转换中的作用与相关性,结果显示晚G_1期的MLIK6细胞中ERK1,ERK2水平变化不大,而具有活性的P-ERK1和P-ERK2均表现出下降。上述实验表明,P15~(INK4B)可能通过作用于G_1期相关的周期调节蛋白和抑制ERK1和ERK2活性,阻滞G_1/S转换与抑制DNA合成。     

MSC与S1P联用对急性损伤的肺内皮细胞中S1P代谢相关酶的表达调控

目的:探究间充质干细胞(MSC)与鞘氨醇-1-磷酸(S1P)联用对急性肺损伤发生过程中S1P代谢相关酶的表达调控作用。方法:构建脂多糖(LPS)刺激的急性损伤的肺内皮细胞模型,与MSC及S1P非接触共培养后,利用细胞实时无标记系统,考察MSC与S1P联用对损伤细胞微电子阻抗的增强保护作用,利用RT-PCR考察两者对损伤细胞中S1P代谢相关酶的表达调控作用。结果:MSC与S1P联用与单独使用时相比,作用靶点和效果有显著差别,MSC单独使用时仅下调鞘氨醇激酶1(Sph K1)、S1P裂解酶(S1PL)和鞘磷脂合成酶1(SMS1)的表达,但当将MSC和S1P联合使用时,其对S1PL的下调作用丧失,而鞘氨醇激酶2(Sph K2)和鞘磷脂合成酶2(SMS2)的表达明显下调。结论:MSC作为一种潜在的治疗手段,可以同时作用于多个S1P代谢相关基因,而且其与S1P的联用对相关基因的表达调控并不是简单的作用叠加,而是表现出更为显著的治疗结果。本研究为进一步探讨MSC与S1P联用,通过改善内皮屏障的生物学功能对急性肺损伤的治疗作用及可能的协同机理奠定了实验基础。     

P38 MAPK 信号传导通路与卵巢癌关系的研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated proteinkinases,MAPKs)级联反应是细胞内重要的信号传导系统之一,参与细胞生长、发育、分化和凋亡等一系列生理、病理过程.P38 MAPK信号传导通路是MAPK通路的分支之一,介导了应激、炎性细胞因子、细菌产物等多种刺激引起的细胞反应,对细胞周期调控具有重要作用.但对不同的卵巢癌细胞系,或者不同的刺激,P38通路的作用不完全相同,甚至可能相反,提示对P38通路的功能仍需进一步的研究,他可能是肿瘤治疗的新靶点.本文就P38 MAPK信号传导通路与卵巢癌关系作一综述。