健康长寿老人肠道双歧杆菌鉴定

为研制食品双歧杆菌制剂,从健康长寿老人肠道正常菌群分离并鉴定具有较高生物活性及保健作用的双歧杆菌菌株。对３０份未明菌株标本,进行了分离,纯化,鉴定,经生物学特性,生化试验,同时做代谢产物分析,各菌均产生乙酸和乳酸为主。还做了ＤＮＡ（Ｇ＋Ｃｍｏｌ％）含量测定,测定值在５６～６３范围。而确定３株为婴儿双歧、５株为青春双歧,共选出８株双歧杆菌,为选育优良的双歧杆菌菌株提供了依据。     

水貂粪便中双歧杆菌的分离与鉴定

目的运用TPY培养基,从健康水貂的粪便中分离培养、筛选出2个肠道菌株。方法细菌培养、菌落形态观察、染色镜检、分离纯化、生化试验和药敏试验。结果分离培养出的2株菌株为双歧杆菌,其中1株为长双歧杆菌,另1株为青春双歧杆菌;双歧杆菌对氯霉素极其敏感,对阿米卡星耐药。结论本实验为毛皮特种经济动物微生态制剂的研究工作奠定了基础。     

猪源双歧杆菌的分离与鉴定

运用双歧杆菌选择性培养基,从１～４周龄乳猪的粪便中共分离纯化到５２个菌株。通过染色镜检、生化反应、代谢产物分析、抗生素敏感性试验研究表明这些菌株均与双歧杆菌属特征相符。根据糖发酵试验初步鉴定结果,其中４５个菌株为小猪双歧杆菌,５株为猪双歧杆菌,２株为嗜热双歧杆菌。部分菌株的急性毒性试验表明受试菌株对小白鼠无任何毒性副反应。     

人源双歧杆菌的分离纯化及鉴定

利用改良的乳酸细菌（MRS）培养基从健康人群的粪便中进行双歧杆菌的分离筛选。结果表明：在添加有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷（X-Gal）的MRS培养基上双歧杆菌的菌落呈典型的乳白色并带有蓝色,其他菌株的菌落呈白色或深蓝色。实验共分离出10株疑似菌株,经生理生化试验和Biolog自动微生物分析系统鉴定,结果发现其中4株为双歧杆菌,这4株菌中有3株为两歧双歧杆菌,1株为长双歧杆菌。和传统MBS培养基相比较,改良MRS培养基能显著提高筛选效率。     

双歧杆菌质粒的检测及其对抗生素敏感性

本文应用ＬｅＢＬａｎｃ法提取６种２０株双歧杆菌菌株的质粒,发现共有４个种的６株菌株存在着１～３个质粒,多数质粒的分子量小于６．０ｋｂ。存在质粒的双歧杆菌包括分离自人的短双歧杆菌、青春双歧杆菌、两歧双岐杆菌和婴儿双歧杆菌。用固体培养基滤纸片抑菌圈法测定双歧杆菌对１５种常用抗生素的敏感性,结果表明,测试的２０株双歧杆菌菌株对所检测的１５种抗生素的敏感性无规律可循,而且质粒消除实验表明质粒的存在与所检测的抗生素抗性无相关性。     

双歧杆菌属特异性定量引物的设计及验证

【目的】旨在设计一对双歧杆菌属特异性引物以检测不同样品中低丰度双歧杆菌的含量。【方法】在NCBI中下载57株双歧杆菌全基因组序列,以其共有单拷贝核心基因为目的片段设计双歧杆菌属特异性引物;并对引物进行PCR初筛和特异性复筛;之后借助ddPCR(Droplet Digital PCR,微滴式数字PCR)依次对筛选出的引物进行特异性、灵敏度和实用性验证。【结果】引物Bif-D-9特异性最好,可扩增出4株双歧杆菌而不能扩增20株非双歧杆菌中的任何一株菌;同时通过ddPCR仪定量稀释后的DNA,其扩增结果呈线性下降趋势,证明其灵敏度较好;另外,Bif-D-9结合ddPCR定量出婴儿粪便中双歧杆菌的拷贝数为71 copies/μL,母亲粪便中双歧杆菌的拷贝数为2.7 copies/μL,证明了该方法的实用性。【结论】引物Bif-D-9具有双歧杆菌属特异性,且灵敏度较高、实用性较好,适用于复杂样品中双歧杆菌属定量。     

双歧杆菌降胆固醇的作用机制

双歧杆菌是现在食品药品市场被广泛应用的一种菌株,它生理功能的优势及对人体的益处被人们认可。尤其是其在脂类代谢中的降胆固醇功能在各种研究中均得以证实。本研究就双歧杆菌的降胆固醇机制及具有此功能的双歧杆菌产品等方面进行论述,为今后对双歧杆菌的研究提供参考及思路。     

婴幼儿粪便中双歧杆菌的分离及其菌株特性研究

为筛选具有潜在益生功能的双歧杆菌,本研究采用改良MRS培养基,从婴幼儿粪便中分离到5株菌株:AR499,AR667,AR668,AR669和AR610。通过16S r DNA测序分别鉴定为两歧双歧杆菌,短双歧杆菌,动物双歧杆菌,长双歧杆菌和假小链双歧杆菌。对其耐酸耐胆盐能力和黏附性能进行测试,结果表明,菌株AR499耐酸性较好,菌株AR610有较强的耐胆盐能力,菌株AR499的自动聚集能力和细胞表面疏水性都较高。实验表明,菌株AR499可作为一株耐受性和黏附性能较好的益生菌进一步深入研究,以期应用于优良双歧杆菌产品的开发。     

一株双歧杆菌质粒聚合酶基因的PCR扩增和鉴定

目的PCR扩增人双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因。方法用改良型MRS双歧杆菌选择培养基,从人新鲜粪便分离长双歧杆菌,PCR扩增长双歧杆菌质粒聚合酶(Bifidobacterium plasmid polymerase,BPP)基因,对BPP基因检测阳性的PCR产物通过序列分析,进行鉴定。结果人长双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因PCR扩增后,经1.0%琼脂糖凝胶电泳,测得BPP基因的相对分子质量约为1.9 kb。通过BLAST序列比对分析与GenBank中相应基因同源性为96%。结论成功克隆了1株双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因,为构建与双歧杆菌宿主质粒相适应的载体奠定了基础。     

由蛋白质介导的双歧杆菌对体外培养肠上皮细胞的粘附

本文对双歧杆菌和体外肠上皮细胞系Ｌｏｖｏ细胞间的粘附进行了研究。结果表明,双歧杆菌能特异性地粘附于肠上皮细胞周围,并且具有浓度和时间效应;各株双歧杆菌的粘附力存在着差异,新分离株高于标准株,胰蛋白酶处理耗尽培养液上清可完全抑制其粘附;高温也能降低粘附力;而白蛋白对粘附无影响。提示,双歧杆菌粘附素可能是一种不耐热的蛋白质,主要存在于耗尽培养液上清中