丙型肝炎病毒(HCV)在组织内的检测及其应用意义

概述了检测组织中ＨＣＶ核酸与蛋白的各种方法以及ＨＣＶ在肝脏定位分布的特点,并总结了检测组织中的ＨＣＶ在丙型肝炎病变、肝细胞肝癌、ＨＣＶ抗病毒治疗效果和ＨＣＶ致病机理等方面研究的应用。     

丙型肝炎病毒与自身免疫性肝炎

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）特异检测方法建立后发现自身免疫性肝炎（ＡＩＨ）抗－ＨＣＶ检出率高,有人提出ＨＣＶ感染有可能为ＡＩＨ的启动因素之一,尤为Ⅱ型ＡＩＨ。区别抗－ＨＣＶ阳性的肝炎为丙型肝炎还是ＡＩＨ十分重要,因两者的现行治疗措施完全不同。     

高复制型慢性乙型肝炎血清HBV复制指标与肝脏病变关系的探讨

本文报道５５例高复制型慢性乙型肝炎患者血清ＨＢＶ复制指标与肝脏病变的关系。５５例均为血清ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ及抗－ＨＢｃ阳性,部分病例血清ＨＢｃＡｇ、ＤＮＡＰ、ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性,均作肝穿活检,病理报告ＣＡＨ５例、ＣＬＨ９例、ＣＰＨ４１例,前二者组成Ａ组,代表病变活动组;ＣＰＨ称Ｂ组,代表病变稳定组。结果显示Ａ组各项肝脏病变在ＨＢＶ复制情况下检出率普遍高于Ｂ组;ＡＬＴ异常时肝脏各项病变检出率达８０％以上者Ａ组也多于Ｂ组,而且Ａ组出现４例碎片状坏死、Ｂ组则无,显示乙肝病毒复制程度与肝脏病变活动性、广泛程度、肝功能受损等情况密切相关,因而提示抗病毒治疗的必要性。     

原位杂交检测石蜡包埋组织中丙型肝炎病毒RNA

为了提高ＨＣＶＲＮＡ的原位杂交检出率,我们应用地高辛标记ＨＣＶ５＇非编码区ｃＤＮＡ作探针,采用原位分子杂交法对９６Ｎ肝硬变,１０２例肝细胞肝癌进行了ＨＣＶＲＮＡ检测,并结合不同年份标本中ＨＣＶＲＮＡ的检出率,探讨ＨＣＶＲＮＡ在肝脏的分布及其丢失问题．结果显示ＨＣＶＲＮＡ定位于肝细胞和肝癌细胞胞浆内,肝脏其它细胞未见明确阳性杂交信号。ＨＣＶＲＮＡ杂交阳性细胞呈灶状和弥漫分布,正常对照、替代、空白对照为阴性,在不同年份肝硬变及肝细胞肝癌中两两比较表明新近包埋蜡块组织较陈旧蜡块组织ＨＣＶ　ＲＮＡ检出率明显高。本文结果证实ＨＣＶＲＮＡ存在于肝细胞和癌细胞的胞浆内,未见肝内其它细胞阳性,还发现ＨＣＶＲＮＡ在肝硬变、肝细胞癌中的检出率随保存时间的延长,其阳性检出率明显降低,表明ＨＣＶＲＮＡ在蜡块中存在明显的降解,应尽可能选用近期标本、为临床分析ＨＣＶ感染,ＨＣＶ与肝硬变、肝细胞肝癌的关系提供更客观的数据。     

丙型肝炎病毒Core与NS3基因的不同融合方式及其表达

丙型肝炎病毒(简称ＨＣＶ)是危害人类健康的传染性疾病,预防该病的传播主要借助于ＨＣＶ血清学诊断来筛选献血员和检测临床标本。从国内外已分离到的ＨＣＶ株得知,ＨＣＶ核心蛋白(Ｃｏｒｅ)和非结构蛋白ＮＳ3含有较强的优势抗原表位,其相应的抗体出现早,阳性率高,已成为目前第二、第三代ＨＣＶ免疫诊断试剂的重要成份[1,2]。通常Ｃｏｒｅ蛋白和ＮＳ3蛋白分别用基因工程方法表达,然后作为固定化抗原,检测人体内ＨＣＶ的抗体。我们对Ｃｏｒｅ和ＮＳ3的两种不同组合方式及其表达的研究,对于发展新的ＨＣＶ诊断试剂很有帮助,现将结果报道如下。1…     

丙肝病毒IgM抗体检测方法的初步研究

选择东燃公司的重组结构区和非结构区抗原建立的抗ＨＣＶ－ＩｇＭ检测方法,简便、快速、特异性强、重复性好、敏感性高。只在丙肝病人组检出而健康献血员均为阴性,与抗ＨＡＶ、ＨＢＶ的ＩｇＭ抗体无交叉反应,且排除了ＲＦ干扰和ＩｇＧ占位引起的假阳性和假阴性,适用于抗ＨＣＶ－ＩｇＭ的临床检测。对２４例丙肝病人的抗ＨＣＶ－ＩｇＭ检测结果显示,急性丙肝病人血清抗ＨＣＶ－ＩｇＭ检出率较高（７５％,６／８）,且随ＡＬＴ正常而消失或滴度下降。慢性病人抗ＨＣＶ－ＩｇＭ检出率为５６．３％（９／１６）,其中７例ＩｇＭ持续阳性者为慢性活动性丙肝,说明慢性病人抗ＨＣＶ－ＩｇＭ与疾病的活动性密切相关。结果提示抗ＨＣＶ－ＩｇＭ的检测在急性肝炎的诊断及慢性丙肝的预后和转归上具有临床意义。     

逆转录-聚合酶链反应技术诊断丙型肝炎病毒感染

本文采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ-ＰＣＲ）技术对２１２例住院及门诊病人其中肝病患者９８例（慢性肝炎４３例、肝炎后肝硬化４７例、原发性肝细胞癌８例）进行ＨＣＶ－ＲＮＡ检测。结果９８例慢性肝病患者血清中ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ阳性２７例（２７．６％）,１１４例非肝病患者血清中ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ阳性９例（７．９％）,两组间差异非常显著（Ｐ（０．０１）,各种肝病患者的ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ阳性率均高于非肝病组。６８例患者同时进行了ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ检测和抗－ＨＣＶ检测,２５例抗－ＨＣＶ阳性的患者中ＨＣＶ－ＲＮＡ-ＰＣＲ,２１例阳性（８４％）,４３例抗－ＨＣＶ阴性的患者中ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ,９例阳性（２０．１％）、有输血及血制品史者４８例,其中ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ阳性１６例（３３．３％）,１６４倒无输血史者中ＨＣＶ-ＲＮＡ-ＰＣＲ阳性２０例（１２．２％）,两组间差异非常显著（Ｐ（０．０１）。结果表明：１．ＨＣＶ感染与慢性肝病有密切联系,说明ＨＣＶ感染是慢性肝炎、肝硬化、肝癌的致病因素;２．ＨＣＶ-ＰＣＲ法具有特异性好、灵敏度高、简便快速等特点,弥补了抗－ＨＣＶ检测的不足之处,是目前确定ＨＣＶ感染的主要手段;３．ＨＣＶ感染与输血关系密切,因此对献血员进行常规ＨＣＶ检测对预防由输血所致ＨＣＶ感染有着极其重要的临床意义。     

草鱼出血病病毒人工感染稀有Ju鲫出血病鱼主要器官组织的超薄…

用电子显微镜观察了稀有Ｊｕ鲫出血病鱼的病理切片及对照鱼的超薄切片。在对照鱼的鳃、肠道、肾脏、肌肉和肝脏中没有见到任何病毒颗粒。在病鱼鳃血管内皮细胞质中观察到聚集的直径７０ｎｍ左右的ＧＣＨＶ颗粒,说明鳃是ＧＣＨＶ侵袭的主要器官之一,并讨论了鳃对ＧＣＨＶ敏感在ＧＣＨＶ传播的意义。还在病鱼肠道,肾脏中观察到成片的病毒颗粒,它们也是ＧＣＨＶ侵袭的主要组织。在病鱼脾脏在电子密度低在细胞质中观察到散在的病毒可     

慢性高山病低氧通气反应降低与肺功能缺损

对１４例慢性高山病（ＣＭＳ）患者的低氧肺泡通气不足的发病机理和肺功能作了研究。与对照组比较,ＣＭＳ组的ＰＥＴＣＯ２高,ＶＴ低,低氧通气反应（ＨＶＲ）Ａ值低;吸入高浓度Ｏ２后,ＣＭＳ已降低的ＨＶＲ。ＣＭＳ的ＦＥＶ１／ＶＣ比值降低并加重动脉低氧血症。结果表明：周围性ＨＶＲ降低和中枢性低氧通气抑制是引起高原低氧肺泡通气不足的因素。而肺泡通气不足与阻塞性肺疾病是导致ＣＭＳ发生的主要原因。     

丙型肝炎的免疫应答及其疫苗研究

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是引起输血后肝炎和非甲非乙型肝炎的主要病原,它在世界范围内广泛流行,是慢性肝炎、肝硬化和肝癌的主要诱因。预防ＨＣＶ感染的关键是研制出有广泛反应性的疫苗,这就必须以ＨＣＶ在宿主体内引起的保护性免疫反应研究为基础。本文就近来对ＨＣＶ感染宿主后能否引起保护性免疫的实验证据及其对ＨＣＶ疫苗研究的意义等方面进行综述。     

疟疾患者丙型肝炎病毒感染原因的血清学研究

本文报道了９７例疟疾患者丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的原因。发现疟疾患者抗－ＨＣＶ阳性率为７１．１３％,其中有单采血浆还输血细胞（下称单采浆）献血史者为８９．７１％,有受血史者为６４．２９％,既无单采浆史又无受血史者无一例抗－ＨＣＶ阳性。有单采浆史的疟疾患者与同村非疟疾的单采浆献血者相比,抗－ＨＣＶ阳性率无显著不同,且二者均显著高于同村既无单采浆史又无受血史的非疟疾人群。在无单采浆史和受血史人群中,疟疾病例和非病例抗－ＨＣＶ阳性率很低。说明有单采浆史的疟疾病例ＨＣＶ感染与单采浆有关,有受血史的疟疾病例ＨＣＶ感染与受血有关。对当地单采浆血站进行调查,发现在采血、分离血浆和血细胞还输过程中存在血液交叉污染,这是导致有单采浆史的疟疾病例ＨＣＶ感染的主要原因。     

丙肝病毒RNA磁分离PCR检测

丙肝病毒ＲＮＡ磁分离ＰＣＲ检测陈明哲,陈禹保（中国科学院北京科海医疗生物工程公司．１０００８０）丙肝病毒（ＨＣＶ）是输血后引起非甲非乙肝炎的主要病因。目前尽管已有ＨＣＶ病体检测试剂盒,但尚无ＨＣＶ抗原检测试剂盒。抗ＨＣＶ抗体的检测不能确诊ＩＩＣＶ的真...     

丙型肝炎病毒基因组的翻译及其产物的加工

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是一种单正链ＲＮＡ病毒,其５’非编码区（５’ＮＣＲ）是决定病毒蛋白表达的关键区。基因突变与报道基因表达技术研究表明５’ＮＣＲ有一内部核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）。类似于微小ＲＮＡ病毒属。ＨＣＶＲＮＡ翻译成为一条多蛋白分子,对蛋白酶的裂解加工后形成１０余种结构和非结构蛋白。研究ＨＣＶＲＮＡ的翻译及产物加工,对ＨＣＶ及其抗原表达载体有重要意义。     

丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶的研究进展

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）非结构３区（ＮＳ３）编码的丝氨酸蛋白酶是ＨＣＶ复制过程中的重要蛋白酶,负责对ＮＳ３、ＮＳ４及ＮＳ５进行加工。ＮＳ４ａ是ＨＣＶ丝氨酸蛋白酶作用的辅因子,并具有多种活性。ＨＣＶ丝氨酸蛋白酶有相对特异的底物,其活性不能被一般的丝氨酸蛋白抑制剂所抑制。丝氨酸蛋白酶是ＨＣＶ药物设计的靶目标之一。对其结构与功能的研究有着重要意义。     

人原发性肝内胆管细胞癌中HCV RNA及其NS3区抗原的分布及意义

应用原位分子杂交及免疫组分方法,使用地高辛标记ＨＣＶ５’非编码区探针及抗ＨＣＶ ＮＳ３区Ｃ３３ｃ单克隆抗体,对３５例人原发性肝内胆管细胞癌（ＰＩＣ）和癌旁肝组织的ＨＣＶ ＲＮＡ及其ＮＳ３抗原进行检测结果发现ＨＣＶ ＲＮＡ在ＰＩＣ中的阳性率为８３％,ＨＣＶ ＲＮＡ定位于癌细胞浆中,个别病例并在淋巴细胞、肝窦内皮细胞和枯否氏细胞中发现阳性信号。ＨＣＶ ＮＳ３区Ｃ３３ｃ抗原在ＰＩＣ的阳性率为８９％,阳性     

丙型肝炎病毒感染与体液免疫反应

本文简单介绍了丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染后,病毒结构和非结构蛋白所引进的体液免疫反应及其与疾病的关系。     

HCVRNA反转录PCR技术的建立及对血液样品的检测

实验建立了ＨＣＶ　ＲＮＡ的反转录和套式ＰＣＲ技术,扩增出２３２ｂｐ的核酸片段,经酶切电泳图谱和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定,来自ＨＣＶ基因５,端非编码区。实验从抗ＨＣＶ阳性的１８例血浆样品和１９例血清样品中分别检出７例和１３例ＨＣＶＲＮＡ阳性。     

丙型肝炎病毒PNA打点杂交检测方法同RT—PCR方法的比较

采用ＨＣＶ基因组结构区Ｃ区ｃＤＮＡ探针和非结构区ＮＳ３－４区ｃＤＮＡ探针,建立了用打点杂交检测血清中ＨＣＶ ＲＮＡ的方法,同采用ＨＣＶ基因组５＇端非编码区的一对寡核苷酸引物通过逆转录－聚合酶链式反应检测血清中ＨＣＶ ＲＮＡ折方法相比较,发现两种方法都能快速早期和特异的检出血清中ＨＣＶ ＲＮＡ,但ＲＴ－ＰＣＲ法敏感性优于ＲＮＡ打点杂交法。对于无血清学指标的慢性ＮＡＮＢ肝炎病人的诊断,可采用这两种方法     

HCVE2／NS1相对保守区多肽体外诱导慢丙肝患者PBMC增殖反应的研究

为了解ＨＣＶ感染后细胞免疫在其中的作用,对３１例慢丙肝及２０例正常献血员以ＭＴＴ法检测外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）对ＨＣＶＥ２／ＮＳ１相对保守区多肽抗原及Ｃ２２、ＮＳ５的增殖反应。结果表明与正常人相比,慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ对ＨＣＶＣ２２、Ｅ２／ＮＳ１抗原有明显的增殖反应（Ｐ＜００５）,而对ＮＳ５无明显增殖,其中以Ｃ２２抗原性最强。作者认为慢性丙型肝炎患者存在针对与ＨＣＶ相关抗原的细胞免疫,这种细胞免疫不能消除ＨＣＶ感染,而且与疾病的状态无关。     

丙型肝炎病毒RNA打点杂交检测方法同RT－PCR方法的比较

采用ＨＣＶ基因组结构区Ｃ区ｃＤＮＡ探针和非结构区ＮＳ３－４区ｃＤＮＡ探针,建立了用打点杂交（ｄｏｔｂｌｏｔｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的方法,同采用ＨＣＶ基因组５’端非编码区的一对寡核苷酸引物通过逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测血清中ＨＣＶＲＮＡ的方法相比较,发现两种方法都能快速早期和特异地检出血清中ＨＣＶＲＮＡ,但ＲＴ－ＰＣＲ法敏感性优于ＲＮＡ打点杂交法。对于无血清学指标的慢性ＮＡＮＢ肝炎病人的诊断,可采用这两种方法。这两种方法的敏感性在很大程度上依赖于引物和探针的敏感性,以及ＲＮＡ提取方法。ＲＴ－ＰＣＲ法适用于诊断病毒血症和复制,打点杂交法适用于研究ＨＣＶＲＮＡ量的变化,对治疗的评价,以及为实验筛选较高滴度的ＨＣＶＲＮＡ阳性样本。