EGFP基因在粉纹夜蛾细胞中的高效表达

绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）基因是从一种水母体内分离的新型报告基因（ｒｅｐｏｒｔｇｅｎｅ）（Ｃｈａｌｆｉｅ等,１９９４）,其编码的、由２３８个氨基酸组成的ＧＦＰ是一种对光稳定的可溶性蛋白,在长波紫外光或蓝光激发下就能发出绿色荧光,而不需添加任何酶或底物,因而检测十分方便快速,无背景干扰。同时ＧＦＰ也是目前唯一能在异源细胞内表达后自发产生荧光的蛋白质。ＥＧＦＰ基因是由野生型ＧＦＰ基因经人工改造后更适合于在真核细胞中表达的突变体,基因编码区长７１７ｂｐ,编码…     

绿色荧光蛋白基因研究进展

绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）基因是目前唯一在细胞内稳定表达,不需要任何反应底物及其它辅助因子,无种属,组织和位置特异性,其产物ＧＦＰ对细胞无毒性,且检测简单,结果真实可靠的新型报告基因,其特有的生物化学性质使其在细胞生物学和分子生物学领域有着广泛的应用前景。     

绿荧光蛋白及其在转基因动物研究中的应用

绿荧光蛋白（ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）是源于水母（Ｊｅｌｙｆｉｓｈ）、海笔（ＳｅａＰｅｎ,ＳｅａＰａｎｓｙ）等海洋无脊椎动物的一种蛋白质,这种蛋白质在体外经适当波长的光激发便可发出绿光,所发出的绿光用普通荧光显微镜或荧光激活细胞分拣器（ＦＡＣＳ）均可检测到。ＧＦＰ作为动、植物以及微生物基因工程研究上的一种选择标记具有检测灵敏度高,操作简便,对机体毒副作用小且不需要添加任何底物或辅助因子等优点,更重要的是检测ＧＦＰ无损于细胞或胚胎的完整性及活力。本文概括介绍ＧＦＰ的生化、发光光谱及遗传学特征及其在转基因动物研究上的应用。     

GFP及其在植物学研究中的应用

绿色荧光蛋白 (ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ ,ＧＦＰ)是来源于多管水母属 (Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉａ)体内的一种天然发光蛋白 ,在植物体内不需任何底物和外源辅助因子的参与就能显现 ,本文就ＧＦＰ的基因在植物基因工程和分子生物学研究中的应用作一概述。1 .ＧＦＰ及其特性ＧＦＰ由ｇｆｐ基因编码 ,具有 2 38个氨基酸残基的多肽单体 ,分子量约为 2 7ｋＤ。ＧＦＰ有两个吸收峰 ,最大吸收峰在 395ｎｍ处 ,在475ｎｍ处还有一个吸收峰 ,前者由紫外光激发 ,后者由蓝光激发。发射光谱也具有两个峰值 ,一个为 5 0 9…     

绿色荧光蛋白的发光机制

从多管水母（Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉａ）中分离纯化的绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）是由２３８个氨基酸残基组成的单链多肽,分子量约２７ｋＤ,１９９２年其ｃＤＮＡ被克隆［１］。１９９４年重组野生型ＧＦＰ（ＷｔＧＦＰ）在异源细胞中表达［２］。野生型ＧＦＰ被紫外光和蓝光激发后能发出绿色荧光,最大荧光吸收／激发峰在３９５ｎｍ,在４７５ｎｍ有一个肩峰,荧光发射峰为５０８ｎｍ。ＧＦＰ的结构和光致荧光非常稳定,而且因ＧＦＰ生色团的形成是自催化的,检测ＧＦＰ的光致荧光不需要外加底物和辅因子,便于活体观察［２］。如今…     

绿色荧光蛋白的特性及其在信号转导中的应用

细胞和分子生物学的最终目标是 ,明确细胞内的各种事件是如何发生的 ,明了细胞内复杂的动态变化的生化机制。绿色荧光蛋白 (ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ ,ＧＦＰ)自从克隆、表达之后 ,以其良好的物理特性及荧光特性而成为良好的报告基因和荧光标记分子 ,并在探索生命现象过程中得到了非常广泛的应用。ＧＦＰ作为报告基因 ,可用在活细胞中直接观察蛋白质向细胞器 ,如细胞核、内质网中运动 ;作为荧光标记分子 ,ＧＦＰ既具有敏感的标记检测率 ,又没有放射性的危害 ;最近又发现ＧＦＰ是一个良好的细胞间信号传递的动态标记…     

绿色荧光蛋白及其在植物研究中的应用

绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）是海洋生物水母（Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉａ）体内的一种发光蛋白,分子量２７ｋＤ,由２３８个氨基酸组成。该蛋白６５～６７位ＳｅｒＴｙｒＧｌｙ三种氨基酸环化加氧形成特殊的生色团结构。野生型ＧＦＰ发光较弱,而且ｇｆｐｃＤＮＡ含有隐蔽型剪切位点,而加工改造的ＧＦＰ在植物中能够正常表达并且加强了荧光信号。ＧＦＰ作为新的报告基因和遗传标记被广泛应用于植物研究之中。     

胰岛素样生长因子结构蛋白功能及其调节机制

胰岛素样生长因子结合蛋白 (ＩＧＦＢＰ)是ＩＧＦ家族的重要成员 ,ＩＧＦ及其生物活性的调节与ＩＧＦＢＰ密切相关。ＩＧＦＢＰ还具有独立于ＩＧＦ的生物活性 ,并拥有自己的调节机制。1 .ＩＧＦＢＰ简介目前 ,已确定了 6种与ＩＧＦ有高亲和力的ＩＧＦＢＰ(ＩＧＦＢＰ1～ 6 ) ,另有 4种与ＩＧＦ有较低亲和力的ＩＧＦＢＰ(ＩＧＦＢＰ相关肽 )也有报道[1] 。ＩＧＦＢＰ1～ 6有 35%的氨基酸序列同源 ,它们都有相同的Ｎ端和Ｃ端模式 ,只是中间区不同。其中 ,前 5种与ＩＧＦ Ｉ的结合优先于与ＩＧＦ ＩＩ的结合 ,而ＩＧＦＢＰ 6与ＩＧＦ ＩＩ的亲…     

用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统高效表达绿色荧光蛋白标记的HBVe抗原

通过基因工程操作,使乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）基因与绿色荧光蛋白基因（ＧＦＰ）融合,用新型Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ杆状病毒表达系统在昆虫细胞中高效表达了ＨＢｅＡｇ－ＧＦＰ双功能融合蛋白。经ＥＬＩＳＡ法和荧光显微镜观察证实,表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有ＨＢＶ的ｅ抗原活性,为免疫诊断新方法的建立进行了有益的探索     

用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统高效表达绿色荧光蛋白标记的HBVe抗原

通过基因工程操作,使乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）基因与绿色荧光蛋白基因（ＧＦＰ）融合,用新型Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ杆状病毒表达系统在昆虫细胞中高效表达了ＨＢｅＡｇ－ＧＦＰ双功能融合蛋白。经ＥＬＩＳＡ法和荧光显微镜观察证实,表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有ＨＢＶ的ｅ抗原活性,为免疫诊断新方法的建立进行了有益的探索。