尿激酶／尿激酶受体结构研究进展

尿激酶是纤溶酶原的主要激活物之一。近年来的研究工作发现,尿激酶及其受体-尿激酶受体-在其他多种生理和病理过程中也发挥了重要作用,包括了创伤愈合、组织再生、细胞迁移、特别是癌症转移和血管生成等多种生理和病理过程。除了其配体尿激酶外,尿激酶受体还能结合其他多种蛋白质,包括了玻璃体结合蛋白、LDL受体蛋白,及多种整合素等蛋白质,这些蛋白质-蛋白质相互作用是尿激酶-尿激酶受体系统生物作用的结构基础,是目前的一个重要研究方向。结合作者的工作描述了该体系的结构研究现状。     

蛋白质多肽激素生物发光配基-受体结合测定新方法

蛋白质多肽激素是一大类内源信号分子,通过激活靶细胞膜上特定受体发挥重要调控功能。配基-受体结合测定是研究蛋白质多肽激素与受体相互作用的重要实验方法,但传统方法要使用放射性同位素(如碘-125),限制了该方法的广泛使用。我们在近期工作中利用超灵敏的Nano Luc荧光素酶建立了"生物发光配基-受体结合测定新方法"用于研究蛋白质多肽激素与受体的相互作用。该方法具有灵敏度高、重复性好、安全无害、操作简便等的优点,有望广泛用于蛋白质多肽激素与受体相互作用研究。     

NMDA受体信号复合体中蛋白质的相互作用

谷氨酸能兴奋性突触的突触后密集区(postsynaptic density,PSD)包含多种受体蛋白、骨架蛋白和信号蛋白,它们通过分子中特定的结构域相互识别并动态地结合,形成多个信号复合体,参与突触后受体功能的调节及其下游特异性信号转导通路的激活。其中,NMDA受体信号复合体中蛋白质-蛋白质的相互作用及其调控机制的阐明,对于深入了解神经发育、突触可塑性、兴奋性毒性等生理病理的分子机制有重要意义。     

糖-蛋白质之间CH-π作用研究进展

糖-蛋白质相互作用是多种生命活动的核心,其本质是协同作用的多重非共价键弱相互作用.其中,糖CH基团与蛋白质中芳环基团之间发生的CH-π作用在糖-蛋白质识别与结合中扮演了重要的角色.随着现代测试分析技术的进步,人们对CH-π作用的起源、结构特点及其能量贡献等方面的认识和理解均得到了飞速的发展.因此,进一步从仿生学角度探索CH-π作用在药物设计与研发、智能材料和智能器件、组织工程材料等方面的应用是一系列新兴研究方向,并将促进糖和蛋白质相互作用研究的发展.在本文中,首先对糖-蛋白质之间CH-π作用的各种特点做了系统性的梳理,然后从抑制淀粉样蛋白聚集、水相糖受体设计以及驱动材料宏观性质变化三个方面,讨论了现阶段人们对CH-π作用的宏观效应及潜在应用的探索,最后对研究方向做了展望.     

丁氏双鳍电鳐电器官乙酰胆碱受体膜微囊的分离

本文报告了从丁氏双鳍电鳐电器官中分离纯化膜结合烟碱样乙酰胆碱受体的简便方法。比活性达1750nmolα-毒素结合点/克蛋白质,无乙酰胆碱酯酶活性,可避免它的干扰。电镜检查发现受体的膜结合物成微囊状,直径约0.1—0.3μα-毒素结合试验及聚丙烯酰胺凝胺电泳结果证明具有烟碱样胆碱能受体性质,适于受体功能和性质的研究。     

泛素信号途径、自噬受体与细胞选择性自噬

蛋白质泛素化是真核生物细胞内蛋白质合成后最重要和最普遍的修饰方式之一。发生在蛋白质底物上的泛素化,由于其泛素化方式及形成泛素链的连接形式的多样性,又统称为泛素信号途径。研究表明,泛素信号途径对蛋白质的调节作用分为降解相关和非相关的两种。细胞内蛋白质的降解主要通过泛素-蛋白酶体或溶酶体-自噬途径来完成。一般认为,通过泛素-蛋白酶体降解的蛋白质具有很强的选择性,而通过溶酶体-自噬途径降解的蛋白质一般选择性较差。然而,近年来,细胞自噬受体如p62等的发现则表明细胞自噬同样具有很强的选择性,这一类由细胞自噬受体介导的细胞自噬被称为细胞选择性自噬(Selective autophagy)。蛋白质泛素化及降解调控几乎所有类型的细胞活动;与之对应的是,蛋白质泛素化及降解异常与包括肿瘤在内的多种人类疾病的发生发展密切相关。本文综述了泛素信号途径调控蛋白质通过蛋白酶体或自噬途径降解的基本过程和部分最新进展,并结合本实验室的研究成果介绍泛素化修饰细胞自噬受体调控细胞选择性自噬的新机制。     

人降钙素受体胞外域的复性及新的体外活性测定方法

人降钙素受体胞外域是降钙素受体的药物靶点区域.本研究截取降钙素受体的N端胞外域22~140氨基酸残基区域,依据大肠杆菌偏爱密码子优化并人工合成基因,克隆至pET22b(+)载体,构建的表达质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达.表达产物经复性、纯化后进行受体-配体结合实验.结果表明,目的蛋白质绝大部分以包涵体形式存在.本研究探索出了一套高效的复性方法,经SDS-PAGE鉴定,纯化蛋白质为单一条带,质谱测定蛋白质分子量与理论分子量一致.复性后的蛋白质采用新的体外活性测定方法证实,有较强的结合鲑鱼降钙素(salmon calcitonin,sCT)的能力.这为其进一步的结构与功能研究奠定了基础.     

蛋白质-蛋白质分子对接方法研究进展

蛋白质分子间相互作用与识别是21世纪生命科学研究的前沿和热点.分子对接方法是研究这一课题有效的计算机模拟手段.通常,蛋白质-蛋白质分子对接包括四个阶段:搜索受体与配体分子间的结合模式,过滤对接结构以排除不合理的结合模式,优化结构,用精细的打分函数评价、排序对接模式并挑选近天然构象.结合国内外研究蛋白质-蛋白质分子对接方法进展和本研究小组的工作,对以上四个环节做了详细的综述.另外,还分析了目前存在的主要问题,并提出对未来工作的展望.     

云南生态条件下基因枪法转溶菌酶基因水稻潜在变异性

在云南2种生态条件下,对基因枪法获得的转溶菌酶基因水稻高代品系D2-1-2和受体品种中花9号的农艺性状、稻米蛋白质含量、氨基酸含量和11种矿质元素进行了对照分析。结果表明转基因品系和受体对照在生育期农艺性状上无明显的差异,但转基因水稻结实率和株高明显低于受体品种;转基因水稻糙米蛋白质含量、氨基酸含量以及9种矿质元素含量都有所增加,其中钙、铁和锌等元素增加幅度较大。认为基因枪法转基因植物可能会产生一些潜在的遗传变异,因此,建议应对转基因植物进行多年多点的环境风险评价。     

不同年龄红细胞(人)的增溶胰岛素受体和胰岛素结合以及依赖于胰岛素的磷酸化反应

1.我们研究了人的不同年龄红细胞的胰岛素受体从膜上增溶后和胰岛素相结合的特征。结果表明,随着红细胞年龄的增加,增溶胰岛素受体和胰岛素的最大结合能力下降;ED_(50)降低,同时受体结合位点数减少。青年红细胞的增溶胰岛素受体数比去年的高一倍,但其亲和性不论在结合平衡状态或动力学状态都基本一致。 2.利用γ-~(32)P-ATP的~(32)P参入量研究了胰岛素对不同年龄红细胞增溶蛋白质及外源蛋白质的磷酸化的影响。在胰岛素存在时,磷酸化分别增加2.3—2.9倍,及3.4—4.4倍。胰岛素刺激青年红细胞的增溶蛋白质的磷酸化的敏感性为老年的2.4倍。 3.研究结果表明,单个人的血样可用来研究胰岛素受体的结合及激酶的性质。