培养基成分对南方红豆杉细胞生长的影响

紫杉醇是 70年代发现的一种非常有发展前途的抗癌新药。通过红豆杉细胞培养技术获得紫杉醇是一条很有工业化生产前景 ,可大量提供紫杉醇的途径。本文采用二相培养技术 ,初步探讨了不同的基本培养基、不同浓度蔗糖 ,以及氨基酸对细胞生长的影响。实验材料为本室继代培养的南方红豆杉 (Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓｖａｒ ｍａｉｒｅｉ)Ｚ3细胞株。获得如下结果 :1 Ｂ5、ＳＨ、ＴＡ[张宗勤等 西北植物学报 ,1998,18(4 ) :488～ 492 ]、ＭＳ 4种培养基中 ,Ｂ5的盐类组合 (大量元素、微量元素、维生素 )对细胞的生长最为有利。在 40ｄ生长期…     

促进紫杉醇合成真菌诱导物制备方法的选择及组分的分离

红豆杉细胞培养被认为是一种解决紫杉醇药源短缺的潜在有效方法之一[1] ,但普遍存在着红豆杉属植物离体细胞的紫杉醇产量比较低的问题。诱导子是一种可引起植物细胞过敏反应的特定生化信号 ,能快速、高度专一地诱导植物特定基因的表达 ,因此 ,利用诱导子刺激以提高红豆杉细胞中紫杉醇产量是目前国内外研究热点 [2 4 ]。但这些研究主要集中有效诱导子的筛选 ,而关于诱导子的制备方法对诱导紫杉醇生物合成的活性研究则甚少。为了提高诱导子的诱导活性 ,笔者以从中国红豆杉树皮中筛选出证明有效诱导紫杉醇的真菌 F5为菌种 [2 ] ,研究不同制备…     

白豆杉细胞培养

紫杉醇是从短叶红豆杉〔Ｔａｘｕｓｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ(Ｃｈｅｎｇ)Ｃｈｅｎｇ〕树皮中分离出来的二萜类生物碱[1],现已成为知名抗癌药物。紫杉醇主要来源于红豆杉属植物。白豆杉〔Ｐｓｅｕｄｏｔａｘｕｓｃｈｉｅｎｉｉ(Ｃｈｅｎｇ)Ｃｈｅｎｇ〕属红豆杉科白豆杉属,为...     

组织培养和HPLC法研究红豆杉生物合成紫杉醇的组织化学定位

为了探索用组织培养法和高效液相色谱(HPLC)法研究红豆杉植物生物合成紫杉醇的组织化学定位,对南方红豆杉[Taxuschinensis(Pilger)Rehd.var.mairei(LemeeetL啨vl.)ChengetL.K.Fu]和曼地亚红豆杉(Taxusmediacv.Hicksii)各种组织进行了愈伤组织诱导培养,用HPLC法(检测条件:色谱柱为DiamonsilTMC18,5μm,4.60×250mm柱,检测波长为227nm,流动相为甲醇∶水∶乙腈=1∶2∶2,流速为1.2mlmin,柱温为35℃,灵敏度为0.16AuFs,进样量10μL)对组织培养物中紫杉醇含量进行检测,结果显示:红豆杉幼茎、幼茎皮、茎形成层、幼叶和顶端分生组织的组织培养物中紫杉醇含多以由分生组织细胞诱导培养所形成的愈伤组织为高。南方红豆杉以幼茎皮和茎形成层愈伤组织培养物中为高,分别为0.0409%(干重)和0.0407%(干重),曼地亚红豆杉则以茎形成层和顶端分生组织的愈伤组织培养物中为高,分别为0.025%(干重)和0.016%(干重),均是它们天然材料中含量的2.3～8倍。     

墨西哥红豆杉愈伤组织的诱导和器官发生

1　植物名称　墨西哥红豆杉 (Ｔａｘｕｓｇｌｏ ｂｏｓａ)。2　材料类别　墨西哥州Ｐａｃｈｕｃａ县Ｈｉｄａｌｇｏ山森林中自然生长的墨西哥红豆杉成年树当年生成熟枝 ( 9月份取样 )。3　培养条件　愈伤组织诱导培养基是ＳＨ ,Ｂ5 和ＮＮ6 9基本培养基添加ＮＡＡ 2 .0ｍｇ·Ｌ     

改进的HPLC法测定红豆杉植物和细胞培养物中紫杉醇的含量

紫杉醇 (Ｔａｘｏｌ)是一种新型的抗癌药物。由于紫杉醇在红豆杉属 (ＴａｘｕｓＬ .)植物中的含量很低 ,而且运用植物细胞培养技术生产紫杉醇仍处实验阶段 ,因此 ,对于紫杉醇含量甚微的样品 ,寻找一种精确、灵敏、快速的检测方法就显得尤为重要。本实验采用改进的ＨＰＬＣ法对南方红豆杉〔Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓｖａｒ.ｍａｉｒｅｉ (Ｌｅｍｅ啨ｅｔＬ啨ｖｌ.)ＣｈｅｎｇｅｔＬ .Ｋ .Ｆｕ〕枝和叶 ,以及中国红豆杉〔Ｔａｘｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ (Ｐｉｌｇｅｒ)Ｒｅｈｄ .〕细胞培养物中的紫杉醇含量进行了测定。1　实验方法1 1　实…     

植物生长调节剂对南方红豆杉愈伤组织培养和紫杉醇合成的影响

通过不同种类和水平植物生长调节剂对南方红豆杉(Taxus chinensisvar.mairei)愈伤组织诱导、生长和紫杉醇合成能力影响的研究发现:诱导培养初期,以无植物生长调节剂的MS为基本培养基,在附加不同植物生长调节剂组合作用下愈伤组织产生的时间和生长、在相同植物生长调节剂组合作用下不同外植体愈伤组织的产生时间和生长均表现出较显著差异,2,4-D/NAA高于0.4时,不利于南方红豆杉愈伤组织的诱导。转换到附加不同植物生长调节剂组合的B5培养基上后,随培养继代次数的增加,生长差异逐渐缩小,直至不显著,表明参考不同文献报道最优配方所设计的各植物生长调节剂组合对南方红豆杉愈伤组织的生长均较适宜,有利南方红豆杉愈伤组织生长的植物生长调节剂优化组合没有唯一性。但不同调节剂组合作用下的同源愈伤组织中、相同调节剂作用下不同源愈伤组织中紫杉醇含量均存在着极显著差异,适当水平(2 mg/L)的2,4-D单用,或与适当水平的KT、6-BA、KT GA配合使用,对南方红豆杉愈伤组织紫杉醇的合成较有利,NAA则不太有利,幼茎和叶愈伤组织产紫杉醇的水平较其它愈伤组织为高。     

中国红豆杉细胞紫杉醇合成期与非紫杉醇合成期基因表达差异初步分析

紫杉醇 (Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ,商品名为Ｔａｘｏｌ)是存在于红豆杉属(Ｔａｘｕｓｓｐ .)植物中的一种四环二萜酰胺类化合物 ,因其具有广谱强效的抗癌活性和独特的抗癌机理而倍受人们关注。然而 ,紫杉醇天然资源十分有限 ,自 1992年美国食品与药物管理局 (ＦＤＡ)批准紫杉醇用于癌症的临床治疗以来 ,其供需矛盾日益尖锐[1 ] 。目前 ,普遍认为采用红豆杉细胞悬浮培养生产紫杉醇是解决其药源紧缺问题的最佳途径之一。迄今为止 ,在红豆杉细胞的代谢规律和培养方面均取得一定成果 ,但前景仍不容乐观 ,离工业化大规模生产还有相当大的距离 ,主要…     

云南红豆杉培养细胞系的建立

紫杉醇(Taxol)最初是从红豆杉属植物短叶红豆杉(Taxus brevifolia)树皮中分离出的一种二萜类化合物^[1]．对卵巢癌,转移性乳腺癌和恶性黑色寮瘤等患者疗效显著^[2],全世界红豆杉属植物有近11种,都含紫杉醇成分．但含量很低,加之现存数量很少,生长极为缓慢．造成了紫杉醇原料供应的危机^[3]。紫杉醇化学合成已经成功^[4-6],但繁杂的反应过程及前体化合物来源的限制使得它们无法实现商业化生产。最近从短叶红豆杉中分离出一种生产紫杉醇的内寄生真菌Tgromyer andreanae^[7]．由于紫杉醇含量仅为24～50ng/L．没有实用价值。植物细胞和组织培养可能是解决天然抗肿瘤药物长期供应的有效方法之一^[8]。自1991年Christen等人申请利用红豆杉细胞培养物生产紫杉醇专利以来^[9]．有关红豆杉细胞培养的研究已有不少报^[10-12]。但云南红豆杉(T.yunnanensis)仅见愈伤组织诱导的报道^[13]。本文报道云南红豆杉愈伤组织诱导和细胞培养的初步结果,并分析了细胞培养物中紫杉醇含量。     

影响南方红豆杉细胞生长及紫杉醇含量的因素

研究了影响南方红豆杉细胞生长及紫杉醇含量的稀土和氮源.结果表明 ,较低浓度(1×10-5 mol/L)的稀土元素对南方红豆杉细胞的生长及紫杉醇的合成有一定促进作用,较高浓度(1×10-4 mol/L)的稀土元素则起抑制作用.3种稀土中以使用10-5 mol/L的镱效果最好.当NH+4/NO-3质量浓度比例为2/25以及总氮源浓度为27 mmol/L时,细胞的生长率和紫杉醇的含量达到最大.     

溶氧水平对红豆杉细胞悬浮培养的影响研究

紫杉醇 (Ｔａｘｏｌ)是源自红豆杉提取物的一种高度衍生化的二萜类化合物 ,临床实验结果表明紫杉醇对于卵巢癌、乳腺癌、胃肠道癌等具有明显的抗肿瘤活性[1] ,因而受到世界各国的广泛关注 ,并已被美国食品与药品管理局 (ＦＤＡ)批准用于卵巢癌与乳腺癌的治疗[2 ] 。到目前为止紫杉醇仍然主要从树皮中提取 ,但由于红豆杉生长缓慢 ,天然资源非常有限 ,加快其替代来源的研究势在必行。利用植物细胞悬浮培养生产紫杉醇作为一种可行的选择 ,近年来取得了较大的进展[3 ,4 ] 。本文研究了摇瓶及 2 0 Ｌ反应器培养过程的溶氧水平对细胞生长及紫杉醇…     

自然光温下甘薯试管苗的脱毒与快繁

1　植物名称　甘薯 (Ｉｐｏｍｏｅａｂａｔａｔａｓ)品种 (系 )泉薯 6 4 7、97 1 1和 98 2 6。2　材料类别　 0 .2～ 0 .5ｍｍ茎尖分生组织和 3 2～ 3 5℃高温预培养的 2～ 5ｍｍ茎尖。3　培养条件　愈伤组织与芽的诱导培养基 :(1 )ＭＳ 6 ＢＡ 1 .0ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 )     

狭翅巢蕨的组织培养

1　植物名称　狭翅巢蕨 (Ｎｅｏｔｔｏｐｔｅｒｉｓａｎｔｒｏｐｈｙ ｏｉｄｅｓ)。2　材料类别　拳卷的幼叶。3　培养条件　以ＭＳ为基本培养基。诱导绿色小球 (ＧＧＢ)培养基 :(1 )ＭＳ 6 ＢＡ 0 .5～ 1 .0ｍｇ·Ｌ- 1(单位下同 ) ＮＡＡ 0 .2～ 1 .0 ;(2 ) 1 /2ＭＳ 6     

木立芦荟的组织培养及快速繁殖

1　植物名称　木立芦荟 (Ａｌｏｅａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓｖａｒ .ｎａｔａｌｅｎｓｉｓ)。2　材料类别　具芽点的茎段。3　培养条件　芽诱导培养基 :( 1 )ＭＳ 6 ＢＡ 2ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＮＡＡ 0 .2。不定芽增殖培养基 :( 2 )ＭＳ 6 ＢＡ 1 ＮＡＡ 0 .1 ;( 3)ＭＳ 6 ＢＡ 2 ＮＡＡ 0 .2 ;( 4 )ＭＳ 6 ＢＡ 3 ＮＡＡ 0 .2 ;( 5)ＭＳ 6 ＢＡ 5 ＮＡＡ 0 .1。生根培养基 :( 6)ＭＳ ＮＡＡ 0 .5;( 7) 1 /2ＭＳ ＮＡＡ 0 .5;( 8)ＭＳ。以上培养基均加 0 .7%琼脂、3%蔗糖 ,ｐＨ5.8。培养温度 2 2～2 7℃ ,光照 1 0～ 1 2…     

花叶连翘的组织培养和快速繁殖

1　植物名称　花叶连翘 (Ｆｏｒｓｙｔｈｉａｋｏｒｅａｎｎａ)。2　材料类别　腋芽、茎尖。3　培养条件　 (1 )诱导芽培养基 :1 3ＭＳ 6 ＢＡ 0 .2ｍｇ·Ｌ-1(单位下同 ) ＩＢＡ 0 .0 1 3 %蔗糖 ;(2 )增殖培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 0 .5～ 1 .0 ＩＢＡ 0 .1 3 %蔗糖 ;(3 )     

黄瓜子叶和下胚轴的离体培养

1　植物名称　黄瓜 (Ｃｕｃｕｍｉｓｓａｔｉｖｕｓ)品种“津绿 4号” ,由天津农业科学院黄瓜研究所育成。。2　材料类别　种子萌发的无菌苗子叶和下胚轴切段。3　培养条件　 (1 )种子萌发培养基 :1 /2ＭＳ0 ;(2 )诱导分化培养基 :ＭＳ 6 ＢＡ 1 0ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＩＡＡ 0 2～ 0 4;(3 )生根培养基 :ＭＳ ＩＡＡ 0 5。上述培养基内琼脂浓度均为 0 8% ,蔗糖为 3 % ,ｐＨ5 8～ 6 0。培养温度 (2 5± 2 )℃ ,光照时间 1 0ｈ·ｄ- 1 ,光照度 2 0 0 0ｌｘ。4　生长与分化情况4.1　无菌苗的培养　将黄瓜种子去壳后 ,以 75 %乙醇…     

台农16号菠萝新品种的快速繁殖

1　植物名称　菠萝 (Ａｎａｎａｓｃｏｍｏｓｕｓ)品种台农 1 6号。2　材料类别　腋芽、顶芽。3　培养条件　芽诱导培养基 :(1 )ＭＳ 6 ＢＡ 1 .0ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＮＡＡ 2 .0 2 ,4 Ｄ 0 .5 ;芽增殖培养基 :(2 )ＭＳ 6 ＢＡ 2 .0 ＮＡＡ 0 .2 ,(3 )ＭＳ 6 ＢＡ     

山葵未成熟胚离体培养和植株再生

1　植物名称　山葵 (Ｅｕｔｒｅｍａｗａｓａｂｉ)日本品种岛根 3号。2　材料类别　开花 2 0ｄ后的荚果中剥出的未成熟种子 (种皮 未成熟胚 )。3　培养条件　基本培养基为自行设计的“贵山”(代号ＧＳ)配方[1 ] 。 ( 1 )诱导愈伤组织培养基为 :ＧＳ 6 ＢＡ 0 .1ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) 2 ,4 Ｄ 1 ;( 2 )芽分化培养基为 :ＧＳ 6 ＢＡ 0 .5 ＺＴ 0 .5 ＩＢＡ0 .0 1 ;( 3)芽增殖培养基为 :ＧＳ 6 ＢＡ 0 .4;( 4 )生根培养基为 :ＧＳ ＩＢＡ 0 .1 ＮＡＡ 0 .1。以上培养基均含 3%蔗糖 [( 1 )含 2 % ]和 0 .6%琼脂粉 ,ｐＨ5 .8～ 5…     

南方红豆杉试管微芽诱导培养及其紫杉醇类化合物的积累

以南方红豆杉幼茎段和茎尖为外植体,以wPM为基本培养基,单一添加不同浓度的KT、TIBA、ZT和6-BA进行芽诱导培养。结果表明：各自添加0．4mg·L-1KT、3．0mg·-1TIBA、0．1mg·L-1 ZT和0．01mg·L-1 6-BA时的芽诱导率最高。培养50d的试管微芽中紫杉醇和10一去乙酰基巴卡亭III（10．DABIII）的积累量比天然南方红豆杉嫩枝高2倍以上,试管微芽中10一DABIII比紫杉醇高,且二者均随芽诱导率的增加而增加,当芽诱导率达最高时亦达到最高。TIBA所诱导芽短而粗壮。     

报春花的组织培养与快速繁殖

1　植物名称　报春花 (Ｐｒｉｍｕｌａｍａｌａｃｏｉｄｅｓ)。2　材料类别　叶片、叶柄。3　培养条件　以ＭＳ为基本培养基。诱导愈伤组织培养基 :( 1 )ＭＳ 6 ＢＡ 0 .5ｍｇ·Ｌ- 1 (单位下同 ) ＮＡＡ 1 ;( 2 )ＭＳ 6 ＢＡ 0 .1 ＮＡＡ 0 .5。诱导芽分化培养基 :( 3)ＭＳ 6 ＢＡ 3;( 4 )ＭＳ 6 ＢＡ2 ＮＡＡ 0 .2。生根培养基 :( 5 )ＭＳ ＩＢＡ 0 .3 ＮＡＡ 0 .2。以上培养基 ｐＨ均为 5 .8,琼脂浓度为0 .7% ,蔗糖浓度为 3% ,培养温度均为 2 3～ 2 5℃ ,光照度 1 5 0 0～ 2 0 0 0ｌｘ ,光照 1 2ｈ·ｄ- 1 。4　生长与分化情…