SCP诱导人肝癌细胞凋亡与bcl-2基因表达的关系

目的探讨鲨鱼软骨制剂(SCP)诱导人肝癌细胞系(SMMC7721)凋亡的作用机制.方法以不同浓度SCP加入体外培养的SMMC7721细胞中,用MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst33342/PI荧光染色,荧光显微镜分析凋亡细胞百分率;流式细胞术进行细胞凋亡定量;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带;免疫细胞化学染色法检测Bcl-2蛋白的表达.结果 SCP明显抑制SMMC7721细胞生长,IC50值为1.25mg/ml;荧光显微镜下可见50%以上细胞为凋亡细胞的形态学改变;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带(DNA ladder);免疫细胞化学检测显示SCP诱导人肝癌细胞凋亡过程中Bcl-2表达明显降低.结论 SCP诱导SMMC7721细胞凋亡,可能与下调Bcl-2表达有关.     

斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721及其裸鼠皮下移植瘤的影响

【目的】探讨斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721及其裸鼠皮下移植瘤的影响。【方法】1、采用磺酰罗丹明染色法(SRB法)检测不同浓度斑蝥素酸镁在体外对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用;2、流式细胞术检测斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721细胞周期和细胞凋亡的影响;3、Hoechst33342染色观察斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721细胞形态的影响;4、透射电镜观察斑蝥素酸镁作用后人肝癌细胞SMMC-7721超微结构的变化;5、建立人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下移植瘤模型,实验组每只裸鼠瘤周注射斑蝥素酸镁6.26×10?5 mmol,对照组给予相同容积的无菌生理盐水瘤周注射,计算抑瘤率;6、原位末端标记染色(TUNEL)法检测人肝癌裸鼠皮下移植瘤组织细胞凋亡情况。【结果】1、斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721有比较明显的抑制作用,抑制率随药物浓度的增加而升高,呈剂量效应关系,其半数抑制浓度(IC50)为1.79?mol/L;2、流式细胞检测结果显示:人肝癌细胞SMMC-7721在斑蝥素酸镁的作用下,G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增加,细胞出现G2/M期阻滞;细胞凋亡率随斑蝥素酸镁浓度加大而逐渐增加;3、Hoechst33342染色镜下显示:斑蝥素酸镁作用后人肝癌细胞SMMC-7721出现凋亡细胞形态特征;4、透射电镜观察:斑蝥素酸镁作用后人肝癌细胞SMMC-7721出现细胞核异形、染色质聚集成团、边集,见凋亡小体;5、斑蝥素酸镁组肿瘤体积、重量显著小于生理盐水组(P﹤0.05),抑瘤率为49%;6、TUNEL法提示斑蝥素酸镁组移植瘤组织细胞凋亡率显著高于生理盐水组(χ2=92.609,P﹦0.000)。【结论】斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721在体内外均有抑制增殖作用,并可以诱导肿瘤细胞凋亡,其凋亡的发生与细胞分裂期阻滞有关。     

板栗总苞总黄酮对三种不同肿瘤细胞的抑制作用

探讨板栗总苞总黄酮对MG-63、MCF-7、SMMC-7721三种不同肿瘤细胞的抑制作用。分别培养人骨肉瘤MG-63细胞、人乳腺癌MCF-7细胞、人肝癌SMMC-7721细胞,加入不同浓度板栗总苞总黄酮,并分别设置不含药物的对照组。采用倒置相差显微镜观察细胞形态,CCK-8法测定药物对细胞增殖的影响,荧光显微镜观察细胞凋亡状态,RT-PCR检测Bcl-2、Caspase-3、P21 mRNA表达。结果提示,三种肿瘤细胞在药物作用后,增殖均受明显抑制,并呈现凋亡形态改变;其24 h后半数抑制浓度(IC50)分别305.58、739.22、4499.44μg/m L,48 h的IC50分别为:147.18、254.42、488.40μg/m L;荧光显微镜观察染色后细胞呈现不同程度的凋亡,并以晚期凋亡为主;RT-PCR结果提示各细胞实验组Caspase-3和P21 mRNA表达明显上调、Bcl-2表达明显下调。上述改变中,MG-63细胞改变最明显,其次为MCF-7细胞,改变最弱的为SMMC-7721。板栗总苞总黄酮能明显抑制MG-63、MCF-7、SMMC-7721细胞增殖并诱导其凋亡,其药效作用为MG-63MCF-7SMMC-7721。     

罗仙子提取物对肝癌的体内外抑制作用研究

本文观察中药罗仙子提取物在离体细胞水平以及整体动物模型中对肝癌的治疗作用。在罗仙子提取物干预人肝癌SMMC-7721细胞24 h后,采用MTT法检测细胞活率;采用光学显微镜、荧光显微镜、透射电镜观察细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率;以Heps肝癌小鼠模型观察罗仙子提取物体内对肿瘤生长的抑制作用。研究发现不同浓度罗仙子提取物可抑制SMMC-7721细胞增殖同时诱导典型的细胞凋亡形态学变化,与对照组相比细胞凋亡率显著升高,且具有浓度依赖性;不同浓度罗仙子提取物可显著抑制Heps肝癌小鼠体内肿瘤生长。实验证明罗仙子提取物可显著抑制Heps肝癌小鼠体内肿瘤生长,该作用可能与罗仙子提取物抑制肝癌细胞增殖、诱导细胞凋亡有关。     

合成芪类化合物抑制肿瘤细胞增殖并诱导Bel-7402细胞凋亡

芪类化合物在癌的起始、促进和发展阶段均有化学抗癌活性,对其化学结构进行改造并进行作用机制研究,提高其抗肿瘤活性,有可能发现新的抗肿瘤药物.在合成23种芪类化合物的基础上,以MTT法测定其对9种肿瘤细胞系的抑制作用,发现多种化合物对SMMC-7721、BGC-823、HepG2、Bel-7402、MCF-7、SGC-7901细胞系具有较明显的抑制活性.以细胞周期分析、Hoechst 33258荧光染色及线粒体膜电位变化进行检测,发现经抑制作用较强的化合物HCQ-10处理后的 Bel-7402细胞发生G₂/M期阻滞,并继发细胞凋亡.实验结果说明,合成芪类化合物对SMMC-7721、BGC-823、HepG2、Bel-7402、MCF-7、SGC-7901细胞具有较为明显的增殖抑制作用,其抑制Bel 7402细胞增殖的作用机制为阻滞细胞于G₂/M期并诱导细胞继发凋亡.     

壳寡糖对肝癌细胞SMMC-7721中Bcl-2和Caspase-3表达的影响

目的检测壳寡糖对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制效果及对凋亡调控蛋白Bcl-2和Caspase-3的影响。方法采用噻唑蓝（MTT）法检测不同浓度壳寡糖对肝癌细胞SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,并利用荧光Hoechst33258染色法检测细胞凋亡状况。最后通过免疫细胞化学方法研究壳寡糖对肝癌细胞SMMC-7721中Bcl-2和Caspase-3表达的影响。结果壳寡糖能够抑制SMMC-7721细胞增殖,并且促进SMMC-7721细胞的凋亡,并且壳寡糖能够上调促凋亡蛋白Caspase-3的表达和降低抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论壳寡糖对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖有抑制作用,此作用可能是通过促进Caspase-3的表达和抑制Bcl-2的表达来实现的。     

羊栖菜多糖诱导HL-60细胞凋亡的研究

用MTT法观察羊栖莱多糖(SFPS)在体外抗人白血病HL-60细胞增殖作用;扫描电镜、透射电镜、DNA电泳和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡。结果表明SFPS对HL-60细胞具有显著生长抑制作用,并呈量效和时效关系,药物作用24,36,48,72h的IC50分别为390,362,402,421mg／L;药物浓度为300mg／L和500mg／L作用HL-60细胞后,琼脂糖凝胶电泳显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带,细胞微绒毛减少、染色质固缩、边集,凋亡小体形成;DNA直方图出现亚G1峰。在一定浓度范围内,SFPS诱导细胞凋亡的作用呈现浓度和时间依赖性,同时G2／M期细胞比例增多。因此,SFPS抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡和G2／M期细胞阻滞有关。     

EPA诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及端粒酶活性调控机制研究

目的:探究二十碳五烯酸(Eicosa Pentaenoic Acid.EPA)对SMMC-7721人肝癌细胞的凋亡、端粒逆转录酶h TERT的调控作用及端粒酶表达活性的影响。方法:体外培养SMMC-7721人肝癌细胞,用不同浓度的EPA(0μM、25μM、50μM、100μM、200μM)作用于SMMC-7721肝癌细胞(24 h、48 h、72 h)后,显微镜下观察其形态学变化;应用MTT法检测SMMC-7721肝癌细胞细胞增殖变化情况;Western-blot法检测h TERT、Bax、Bcl-2蛋白表达水平变化;Real Time-PCR检测h TERTm RNA的表达变化;ELISA法检测SMMC-7721肝癌细胞端粒酶活性的表达水平。结果:EPA可诱导肝癌细胞SMMC-7721发生细胞凋亡,具有明显的时间计量依赖关系。在此过程中Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白表达上调,同时端粒酶逆转录酶h TERT蛋白及其m RNA的表达水平和端粒酶活性均明显降低。结论:抑制端粒酶逆转录酶基因(h TERTm RNA)表达而抑制端粒酶的活性、诱导癌细胞凋亡,可能是EPA的抗癌作用机制之一。     

苦参碱对肝癌细胞增殖凋亡及stat3、stat5基因的影响

观察苦参碱对SMMC-7721细胞增殖、凋亡及stat3s、tat5基因的影响。用MTT法检测不同浓度苦参碱对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,双荧光染色观察细胞凋亡率,RT-PCR半定量检测stat3s、tat5基因的表达。结果发现苦参碱有抑制细胞增殖促进凋亡的作用,并呈时间剂量依赖性;不同浓度苦参碱作用于SMMC-7721细胞后stat3s、tat5的mRNA水平明显下调(P<0.01),其中高浓度苦参碱的作用更强。苦参碱能显著抑制SMMC-7721细胞增殖、促进其凋亡,其机制可能与下调stat3s、tat5的基因表达有关。     

甘草乙醇浸提液诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

探讨甘草乙醇浸提液对肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响。经MTT法测定表明甘草乙醇浸提液对肝癌细胞SMMC-7721的半数致死浓度（IC50）为1．246mg／mL,细胞生长抑制率与甘草乙醇浸提液浓度呈正相关。作用后的癌细胞在Hoechst33342荧光染料作用下呈现草蓝色荧光,在形态上具有明显的细胞凋亡现象。提取其DNA进行琼脂糖凝胶电泳,出现明显的梯状条带。因此,甘草乙醇浸提液对肝癌细胞具有显著的抗增殖作用,它能够诱导肝癌细胞的凋亡。