EGCG对猪前体脂肪细胞增殖和分化的作用

表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate,EGCG）是绿茶提取物EGCG的生物活性成分,为了探讨其对猪前体脂肪细胞增殖和分化的影响,以不同浓度EGCG处理猪前体脂肪细胞,MTT法测定EGCG对猪前体脂肪细胞生长的影响;油红O染色检测猪前体脂肪细胞的形态学变化;油红O染色提取法定量分析脂肪细胞充脂量的变化;半定量RT-PCR检测分化转录因子过氧化物酶体增生物激活受体佗（PPARγ2）和CCAAT／增强子结合蛋白α（C／EBPα）mRNA表达水平变化。结果显示：EGCG随着浓度的递增显著抑制猪前体脂肪细胞的增殖（P〈0．01）;低浓度的EGCG（5μmol／L）不影响脂肪细胞分化,而高浓度EGCG（200μmol／L）显著抑制猪前体脂肪细胞分化,同时下调PPARγ2和C／EBPαmRNA表达,本研究结果表明EGCG可抑制猪前体脂肪细胞的增殖和分化。     

二十二碳六烯酸对大鼠脂肪细胞增殖分化的影响

体外培养大鼠脂肪细胞,分别以0 μmol/L（对照组）、40 μmol/L（低剂量组）和160 μmol/L（高剂量组）的二十二碳六烯酸（DHA）处理细胞。采用台盼蓝排斥试验和MTT比色法检测细胞活性及增殖状况;油红O染色化学比色法定量分析细胞内脂肪生成及细胞分化程度;逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR) 分析过氧化物酶增殖物激活受体γ2（PPARγ2）mRNA表达情况,探讨DHA对前体脂肪细胞增殖分化的影响及其可能机制。结果显示,各组细胞活力及MTT测得的光密度值(OD值)均低于对照组,160μmol/L组在60～72h作用显著（P<0.05）;脂肪细胞经DHA处理后, 160μmol/L组细胞油红O染色的OD值及PPARγ2 mRNA表达量均显著下降(P<0.01)。以上结果说明,DHA对脂肪细胞增殖分化均有一定抑制作用,高剂量DHA（160μmol/L）可显著减少细胞内脂肪的合成、抑制脂肪细胞分化,PPARγ2 mRNA表达量的下降可能是DHA抑制细胞分化的部分原因。     

视黄酸X受体α促进猪前体脂肪细胞分化

采用细胞转染、油红O染色、油红O染色提取法、GPDH活性测定、semi-qRT-PCR等方法研究了视黄酸X受体α (retinoic acid X receptor α, RXRα)在猪原代前体脂肪细胞分化中的作用及其机理.结果表明,转染pRXRα-EGFP促进了猪前体脂肪细胞RXRα 的表达,脂肪细胞分化能力随之增强, 脂肪细胞GPDH活性、分化转录因子PPARγ和C/EBPαmRNA表达水平均显著升高(P<0.05). 结果提示,RXRα可能通过调控过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptor-γ, PPARγ)和CAAT/增强子结合蛋白家族（CCAAT/enhancer binding proteins, C/EBP）C/EBPα 基因表达变化促进猪前体脂肪细胞分化.     

维生素C通过调控脂肪形成相关基因的转录促进猪前体脂肪细胞的增殖与分化

探讨维生素C（Vit C）诱导猪前体脂肪细胞增殖分化最佳浓度及在分化过程中,5种脂肪形成相关基因peroxisome proliferator activated receptor gamma(PPARγ)和retinoid X receptor alpha(RXRα),脂肪细胞分化标志基因lipoprotein lipase (LPL),生脂基因phosphoenolpyruvate carboxykinase(PEPCK)、stearoyl CoA desaturase(SCD) mRNA表达时序性的变化. 以3　d龄猪前体脂肪细胞为实验对象,用Vit C诱导猪前体脂肪细胞增殖分化,分别在增殖分化第2、4、6和8 d收获细胞,利用MTT测定其增殖程度;油红O染色提取法检测其脂肪含量;采用SQ RT PCR法检测脂肪生成相关基因PPARγ、RXRα、LPL、PEPCK和SCD mRNA表达的变化. 结果显示,PPARγ mRNA在诱导分化第2 d时有低水平表达,在诱导分化过程中表达量逐步升高,在终末分化阶段仍保持高水平表达;RXRα mRNA在诱导分化第2和4 d表达量很低,诱导分化第6 d时表达增加.在诱导分化第8 d,RXRα mRNA表达与第6 d相比差异不显著,直至终末分化. 脂肪细胞分化标志基因LPL在第2 d开始表达,第4和6 d逐步升高,在终末分化阶段仍保持高水平的表达;生脂基因PEPCK和SCD mRNA在第2和4 d开始表达,第6和8 d仍保持高水平的表达. 研究结果表明,100 μmol/L的Vit C促进猪前体脂肪细胞增殖能力最强;250 μmol/L Vit C能显著促进猪前体脂肪细胞分化. 其作用机制可能是通过对转录因子PPARγ和RXRα及标志基因LPL mRNA时序性表达的调控来进行的,促进生脂基因的表达,从而诱导脂肪细胞的分化.     

烟酰胺在原代培养的猪前体脂肪细胞增殖分化中的作用

为研究烟酰胺(Nicotinamide,NAM)在原代培养的猪前体脂肪细胞增殖分化中的作用,探讨其作用的分子机制,用不同浓度(0-500μmol/L)的NAM处理猪前体脂肪细胞。MTT和油红O染色及提取法检测结果表明:在不同的作用时间内,与对照组相比,100-500μmol/L的NAM均可以促进猪前体脂肪细胞的增殖分化,随着NAM浓度的增加,其对前体脂肪细胞增殖分化的促进作用逐渐上升,当浓度为300μmol/L时达到高峰,即300μmol/L NAM的促进效果最为显著(P<0.05);随后,400和500μmol/L NAM的促进作用逐渐减弱。RT-PCR法分析结果表明,Sirt1 mRNA表达显著下降(P<0.05),而其靶基因FoxO1和脂肪细胞分化标志基因PPARγ2、C/EBPα mRNA表达量明显升高(P<0.01),aP2和LPL表达也显著增加(P<0.05)。表明NAM是Sirt1的一个有效抑制剂,它可能通过抑制Sirt1的表达来促进猪前体脂肪细胞增殖和分化。     

白藜芦醇对猪原代前体脂肪细胞的增殖与分化及Sirt1基因转录表达时序的影响

分别以0μmol/L(对照组)、10μmol/L(低剂量组),20μmol/L(中等剂量组),50μmol/L,100μmol/L(高剂量组)的白藜芦醇(Resveratrol,RES)处理体外培养1~3日龄健康仔猪前体脂肪细胞,采用MTT比色法检测细胞活性及增殖状况;油红O染色化学比色法定量分析细胞内脂肪生成及细胞分化程度;RT-PCR法分析Sirt1(sirtuin1)mRNA表达情况,探讨Sirt1对猪前体脂肪细胞增殖分化的影响及其分子机制。结果表明,脂肪细胞经RES处理后,各组MTT和油红O染色测得的光密度值(OD值)均低于对照组,50μmol/L,100μmol/L组在96~120h作用极显著(P<0.01),与中低剂量组差异显著(P<0.05);以20μmol/L,100μmol/LRES处理细胞后,Sirt1mRNA表达量随细胞分化的进行而逐渐升高,100μmol/L组均显著高于对照组和20μmol/L组(P<0.05)。RES对猪前体脂肪细胞增殖分化均有一定抑制作用,高剂量RES(50μmol/L和100μmol/L)可显著减少细胞内脂肪的合成、抑制脂肪细胞增殖与分化,Sirt1mRNA表达量显著升高可能是RES抑制细胞分化的重要原因之一。     

9-顺式维甲酸在原代培养猪前体脂肪细胞分化中的调控作用

采用RT-PCR、油红O染色法、油红O染色提取法和分光光度计法,探讨不同浓度9-顺式维甲酸(9-cisRA)(0-10$mol/L)对体外原代培养猪前体脂肪细胞分化的影响及其可能机制。结果表明,9-cisRA在脂肪细胞分化中因浓度不同而发挥不同作用。低浓度9-cisRA(0-10nmol/L)促进前体脂肪细胞分化,并上调RXRα、PPARγmRNA表达,增加前体脂肪细胞分化标志酶3-磷酸甘油脱氢酶(glyc-erol-3-phosphate dehydrogenase,GPDH)的活性;高浓度9-cisRA(100nmol/L-10$mol/L)则抑制前体脂肪细胞分化,并下调RXRα、PPARγmRNA表达,减少GPDH的活性。结果提示9-cisRA在猪前体脂肪细胞分化中,可能通过调控RXRα和PPARγ基因表达变化来发挥其促进或抑制作用。     

BAMBI通过促进ERK1/2磷酸化抑制猪前体脂肪细胞分化

为了研究BAMBI在猪前体脂肪细胞分化过程中的作用,构建了BAMBI慢病毒干扰载体,包装并感染猪前体脂肪细胞,采用油红O染色、油红O提取比色法检测猪前体脂肪细胞分化情况,采用Real-time qPCR、Western blotting检测成脂标志基因mRNA以及蛋白水平表达的变化情况。结果表明,BAMBI慢病毒干扰载体感染前体脂肪细胞后显著降低了BAMBI的表达,shRNA2干扰效率最高,达到了60%以上,干扰BAMBI后能增加猪脂肪细胞的脂质积累,增加了成脂标志基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)和脂肪酸结合蛋白2(Adipocyte protein 2,ap2)的表达。此外,干扰BAMBI后ERK1/2的磷酸化水平减少了。这些结果表明,BAMBI可能通过促进ERK1/2的磷酸化抑制脂肪细胞分化。     

白藜芦醇对猪原代前体脂肪细胞的增殖与分化及Sirtl基因转录表达时序的影响

分别以0μmol/L (对照组)、10μmol/L (低剂量组),20μmol/ L (中等剂量组),50μmol/L, 100μmol/ L (高剂量组)的白藜芦醇（Resveratrol,RES）处理体外培养1～3日龄健康仔猪前体脂肪细胞,采用MTT比色法检测细胞活性及增殖状况;油红O染色化学比色法定量分析细胞内脂肪生成及细胞分化程度;RT-PCR法分析Sirt1 (sirtuin1) mRNA 表达情况,探讨Sirt1对猪前体脂肪细胞增殖分化的影响及其分子机制。结果表明,脂肪细胞经RES处理后,各组MTT和油红O染色测得的光密度值(OD值)均低于对照组, 50μmol/L, 100μmol/L组在96～120h作用极显著(P<0.01),与中低剂量组差异显著(P<0.05);以20μmol/L,100μmol/L RES处理细胞后,Sirt1 mRNA表达量随细胞分化的进行而逐渐升高,100μmol/L组均显著高于对照组和20μmol/L组(P<0.05)。RES对猪前体脂肪细胞增殖分化均有一定抑制作用,高剂量RES (50μmol/L和 100μmol/L)可显著减少细胞内脂肪的合成、抑制脂肪细胞增殖与分化, Sirt1 mRNA表达量显著升高可能是RES抑制细胞分化的重要原因之一。     

共轭亚油酸对前脂肪细胞增殖分化的影响

培养前脂肪细胞3T3-L1,MTT法检测CLA对3T3-L1增殖的影响;以油红O染色检测3T3-L1分化过程胞内脂肪的堆积;同时采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测CLA对过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)mRNA表达的影响.结果显示: t10,c12-CLA以及CLA混合物对前脂肪细胞3T3-L1增殖均有显著的抑制作用(P<0.05).油红染色比色结果表明,t10,c12-CLA具有显著的抑制脂肪分化作用(P<0.05).RT-PCR结果显示,在前脂肪细胞3T3-L1分化过程中,经100 μmol/L t10,c12-CLA和50 μmol/L t10,c12-CLA处理后PPARγ2 mRNA表达量分别为对照组的52.1%,83.0%.     

Modulation of Sirt1 by resveratrol and nicotinamide alters proliferation and differentiation of pig preadipocytes

Sirt1, a NAD⁺-dependent histone deacetylase, may regulate senescence, metabolism, and apoptosis. In this study, primary pig preadipocytes were cultured in DMEM/F12 medium containing 10% fetal bovine serum (FBS) with or without reagents affecting Sirt1 activity. The adipocyte differentiation process was visualized by light microscopy after Oil red O staining. Proliferation and differentiation of preadipocytes was measured using methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide (MTT) and Oil red O extraction. Expression of Sirt1, FoxO1, and adipocyte specific genes was detected with semi-quantitive RT-PCR. The results showed that Sirt1 mRNA was widely expressed in various pig tissues from different developmental stages. Sirt1 mRNA was expressed throughout the entire differentiation process of pig preadipocytes. Resveratrol significantly increased Sirt1 mRNA expression, but decreased the expression of FoxO1 and adipocyte marker gene PPARγ2. Resveratrol significantly inhibited pig preadipocyte proliferation and differentiation. Nicotinamide decreased the expression of Sirt1 mRNA, but increased the expression of FoxO1 and adipocyte specific genes. Nicotinamide greatly stimulated the proliferation and differentiation of pig preadipocytes. In conclusion, these results indicate that Sirt1 may modulate the proliferation and differentiation of pig preadipocytes. Sirt1 may down-regulate pig preadipocytes proliferation and differentiation through repression of adipocyte genes or FoxO1.     

黄芩素对3T3-L1小鼠前脂肪细胞分化及对脂肪酸合成酶活性的影响

目的 研究黄芩素对3T3-L1小鼠前脂肪细胞分化及对脂肪酸合成酶活性的影响。方法 油红O染色法测定细胞分化速度;分光光度法测定脂肪酸合成酶活性。结果 黄芩素对3T3-L1小鼠前脂肪细胞向脂肪细胞分化以及对脂肪酸合成酶活性有抑制作用。结论 黄芩素通过阻断脂肪合成而抑制小鼠前脂肪细胞分化;黄芩素具有开发成减肥药物的潜力。     

花生四烯酸对大鼠前体脂肪细胞生长与分化的影响(英文)

以大鼠前体脂肪细胞原代单层培养为模型,用不同浓度花生四烯酸(AA)处理细胞.通过台盼蓝排斥试验及噻唑蓝比色法(MTT)反映各组细胞增殖状况;Hoechst33342荧光染色观察AA处理后细胞核形态变化;油红O染色提取法分析细胞分化程度;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)分析环氧合酶2(COX2)mRNA表达情况,探讨外源性AA对大鼠前体脂肪细胞生长分化的影响及其可能机制.120μmolLAA处理前体脂肪细胞24～72h,细胞活力明显高于对照组;160μmolLAA作用48h时,前体脂肪细胞表现出明显的凋亡现象;脂肪细胞经40～80μmolLAA作用72h时,细胞油红O染色的吸光度值显著减少;40μmolLAA在作用的24h时,可显著上调COX2mRNA的表达量.说明外源性AA以时间性和剂量依赖性调节前体脂肪细胞的生长与分化,40～80μmolLAA在不显著增加脂肪数目的同时,可抑制前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞转化、减少脂肪生成量,对控制动物体脂的形成有一定参考价值,COX2mRNA表达量的上升可能是AA抑制前体脂肪细胞分化的内在机制.     

过表达RBP4抑制体外培养的猪前体脂肪细胞分化

为研究视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)对猪前体脂肪细胞分化的影响,实验构建了RBP4重组腺病毒表达载体,包装并感染猪前体细胞,采用油红O染色和Real-time PCR等方法,检测了过表达RBP4对成脂分化的作用. 研究结果显示,重组腺病毒RBP4载体构建成功,转染猪前体脂肪细胞后,使RBP4的mRNA水平和蛋白水平分别增加了约400倍和20倍. 过表达RBP4能减少脂肪细胞的脂质积累,降低成脂关键基因过氧化物酶体增生物激活受体γ (peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARγ)和脂肪酸结合蛋白2 (adipocyte protein 2, aP2)的表达. 结果表明,RBP4对猪前体脂肪细胞分化有抑制作用,为进一步研究RBP4对猪前体脂肪细胞分化的作用机制奠定基础.     

不同冷冻保护剂对猪前体脂肪细胞冷冻后细胞活力的影响(简报)

与实验动物鼠相比,猪的生物学特性与人更为接近[1],肥胖程度更高,因而猪前体脂肪细胞更适合用来研究肥胖及其相关疾病,但猪原代前体脂肪细胞生长周期较长,且在常规培养条件下同一批次的细胞很难长期保存,而猪作为实验动物的价格又相对昂贵,如果采取适当的方法将猪前体脂肪细胞在超低温条件下保存,使其生命活动固定在某一阶段而不衰老死亡[2],既可节省实验经费,又能保证研究的可靠性与连续性。因而建立一种较为理想的猪前体脂肪细胞冻存方法具有重要的实际意义。目前,国内外尚未见到冷冻保存猪前体脂肪细胞的报道。本实验以猪前体脂肪细胞为…