真菌生物碱的研究I．产生生物碱的真菌的筛选

用生物碱沉淀试剂预试、薄层层析确试的生物碱筛选方法,对青藏高原土壤中分离的624株低等真菌的发酵液和真菌组织提取物中存在的生物碱进行了筛选研究。所得结果表明：有114株或18．3％的真菌显生物碱阳性反应。40株生物碱阳性反应较强的真菌包括有青霉。曲霉、镰刀菌、匍柄毒、腐质霉和毛毒属等。除圆弧青霉、顶青毒、淡紫青霉、焦曲霉、黑曲霉,黄曲霉、烟曲霉、构巢曲毒等已有报道外,点青霉、两形青霉、真青霉、荨麻青霉、黑青霉、燕麦镰刀菌、拟直孢镰刀菌、木贼镰刀菌、拟丝孢镰刀菌、弯角镰刀菌、匍柄霉及腐质霉等,均尚未见．有报道。     

川、黔、渝几所医院土生角蛋白降解真菌多样性分析

采用毛发钓饵技术,从几所医院采集的土样中分离获得角蛋白降解真菌774株。通过形态学特征、生物条码数据系统(Barcode of Life Data Systems)、UNITE数据库、CBS数据库和分子系统学分析的多途径方法,将这些菌株鉴定为31属58种。结合文献和ISHAM(International Society for Human and Animal Mycology)r DNA-ITS数据库的分析结果表明,链格孢属Alternaria、曲霉属Aspergillus、毛壳属Chaetomium、芽枝霉属Cladosporium、镰刀菌属Fusarium、地丝霉属Geomyces、地霉属Geotrichum、小孢属Microsporum、青霉属Penicillium、紫霉属Purpureocillium、篮状菌属Talaromyces、木霉属Trichoderma和毛癣菌属Trichophyton共13个属中的20种512株真菌对人类具有潜在感染风险。     

漳江口红树林沉积物真菌多样性分析及抗茶叶致病真菌生物活性筛选

以福建漳江口红树林国家级自然保护区红树林沉积物分离的真菌为对象,研究红树林沉积物真菌的多样性和筛选抗茶叶病原真菌活性的菌株。将分离纯化的135株真菌通过形态学和Ribosomal DNA-Internal Transcribed Spacer(rDNAITS)序列测定进行鉴定及多样性分析,归为40个种类型,分别属于17个属,其中青霉属(25%)为优势菌,木霉属(15%)、曲霉属(10%)和镰刀属(10%)次之,表明红树林沉积物真菌具有丰富的多样性;利用平板对峙法对真菌的发酵粗提物抗茶叶病原真菌生物活性研究,结果发现,共有17株(占42.5%)真菌具有抗茶叶病原真菌活性,其中15株能够抑制茶叶轮斑病(Pestalotiopsis theae)LH13,12株能够抑制茶叶炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)LH30,8株能够抑制茶叶溃疡病(Neofusicoccumsp.)LH107,有两株对这三种茶叶致病菌均有较强活性。这些活性菌株分布在6个属中,分别是青霉属(7株)、木霉属(3株)、镰孢属(2株)、枝孢属(2株)、白地霉属(2株)和球腔菌属(1株)。由此可见,红树林沉积物真菌抗菌活性菌株的种属分布具有多样性。     

海鞘真菌的形态鉴定及其代谢产物抗菌活性研究

为寻找产生新颖抗菌活性物质的海洋真菌,以海鞘为原料,采用平板涂布法分离出14株真菌,并对其进行形态学鉴定和抗菌活性的初筛。结果显示:从海鞘中共分离出14株真菌,根据形态观察初步鉴定其分属青霉属(Penicillium sp.)、曲霉属(Aspergillus sp.)、枝孢属(Cladosporium sp.)、麦轴梗霉属(Tritirachium sp.)等4个属。14株菌中有抗菌活性的共11株,优选出抗菌活性较强抗菌谱较广的4株菌分别是Asc-2-4(青霉属)、Asc-2-12(青霉属)、Asc-1-1(青霉属)和Asc-2-1(曲霉属)。青霉属菌株Asc-2-12的抑菌活性最明显,抑菌圈直径最大达到21.91 mm。海鞘共附生真菌是寻找抗菌物质的一个资源,其中的3株青霉属和1株曲霉属的抗菌活性有深入研究的价值。     

应用反向线点杂交技术鉴定临床常见曲霉属和毛霉目真菌

目的应用反向线点杂交技术(reverse line blot hybridization,RLB)快速鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌。方法收集我院真菌和真菌病研究中心保存的5种曲霉菌(烟曲霉、黄曲霉、黑曲霉、土曲霉、构巢曲霉)和7种毛霉目真菌(冻土毛霉菌、总状毛霉菌、卷枝毛霉菌、少根根霉、小孢根霉、微小根毛霉、伞状犁头霉),共计98株菌株。利用真菌通用引物ITS1和ITS4对菌株进行PCR扩增,用12个真菌种特异性探针与扩增后产物进行反向线点杂交。将RLB结果与真菌传统形态学鉴定结果、ITS区DNA测序结果进行比较。结果 RLB可以正确鉴定98株实验菌株,与形态学方法和ITS区测序方法鉴定结果100%一致,种特异性探针之间未见交叉杂交,显示出该方法的高度敏感性和特异性。8株阴性对照菌株(白念珠菌、茄病镰刀菌、尖端赛多孢、马尔尼菲青霉、疣状瓶霉、棒曲霉、日本曲霉以及雅致小克银汉霉),使用RLB方法无法鉴定。通过烟曲霉基因组DNA浓度10倍倍比稀释法验证RLB的敏感性为1.8×10-3 ng/μL。结论 RLB技术为实验室早期快速诊断、鉴定临床常见的曲霉属和毛霉目真菌提供参考。     

广东湛江湾优势真菌群落结构及其与理化因子的关系

通过对2010年1月9日采自广东湛江湾的海水样品中真菌的分离培养和鉴定,发现第一优势属为枝孢属,包括球枝孢、枝状枝孢、芋枝孢、极细枝孢、尖孢枝孢、收窄枝孢、夏生枝孢7个种;第二优势属为青霉属,包括疣孢青霉、灰黄青霉、菌核青霉、嗜松青霉、棘孢青霉、简青霉6个种;第三优势属为侧齿霉属,仅白色侧齿霉一个种;第四优势属为曲霉属,包括土曲霉、棘孢曲霉、黄曲霉、烟曲霉4个种。从真菌种类的优势度来看,球枝孢为该海域第一优势种(7.97%),白色侧齿霉为第二优势种(3.60%),枝状枝孢为第三优势种(3.29%),疣孢青霉为第四优势种(3.04%)。鉴定出的收窄枝孢为中国新记录种。通过对菌株数量与理化因子的相关性分析发现,在19个站位的表层真菌数量与无机磷和硅酸盐呈显著正相关(P0.05);表层侧齿霉属和曲霉属与总有机碳呈极显著正相关(P0.01),曲霉属与p H呈极显著负相关(P0.01),侧齿霉属与p H呈显著负相关(P0.05),曲霉属与盐度呈显著负相关(P0.05)。底层真菌数量与悬浮物呈极显著正相关(P0.01),与总有机碳呈显著正相关(P0.05),与p H呈显著负相关(P0.05);底层枝孢属与悬浮物呈极显著正相关(P0.01),侧齿霉属与溶解氧和总有机碳呈显著正相关(P0.05),曲霉属与总有机碳呈显著正相关(P0.05)。海水温度、油污和海水深度与真菌数量的相关性不明显。     

降解农药的微生物

按农药的品种综述了降解农药的微生物种类。降解农药的细菌主要有假单胞菌属、芽孢杆菌属、黄杆菌属、产碱菌属、节细菌属等 ;降解农药的真菌主要有曲霉属、青霉属、根霉属、木霉属、镰刀菌属等 ;降解农药的放线菌主要有诺卡氏菌属、链霉属等。     

国内多中心甲真菌病病原菌流行病学调查

目的了解国内甲真菌病病原菌的种类和构成情况,掌握流行病学资料。方法对真菌镜检阳性的1 428例甲真菌病患者进行真菌培养和临床分析。结果真菌培养阳性率为53.9%,分离出病原菌800株。其中皮肤癣菌占84.0%,以红色毛癣菌为主(80.9%),其次为指(趾)间毛癣菌和絮状表皮癣菌。酵母菌占11.4%,以念珠菌属为主(10.1%),尤以近平滑念珠菌为主,其次为白念珠菌和热带念珠菌。其他霉菌占4.6%,以枝顶孢霉为主(2.3%),其次曲霉属、青霉属、毛壳菌属、镰刀菌属和帚霉属等。结论本研究显示甲真菌病病原菌以皮肤癣菌为主,其次为酵母菌和霉菌。     

核辐射污染区真菌的分布及多样性研究

为揭示中国辐射污染区真菌多样性,了解辐射污染对辐射区土壤中真菌群落分布的影响。以中国辐射污染区某污染源为圆心,在其半径50 km范围内采集各类样品54份,依据其辐射剂量合并为高、中、低三组9份样品,采用不同处理方法及多种培养基对辐射区内真菌进行了分离筛选。共分离出真菌209株,通过形态学观察和鉴定,确定其分属于交链孢霉(Alternaria)、离蠕孢属(Bipolaris)、茎点霉属(Phoma)、Westerdykella、短梗霉属(Aureobasidium)、曲霉属(Aspergillus)、青霉属(Penicillium)、根霉属(Rhizopus)、Kernia、毛壳属(Chaetomium)、葡萄穗霉属(Stachybotrys)、座孢霉属(Myrothecium)、镰孢属(Fusarium)、小克银汉霉属(Cunninghamella)、红酵母属(Rhodotorula)、隐球酵母属(Cryptococcus),共计16个属,其中曲霉属、隐球酵母属、青霉属和镰孢霉属菌株为主要菌群,分别占分离株的22.5%、19.1%、17.2%和11.0%。同时发现,辐射污染区真菌的群落丰富度及多样性明显受辐射污染程度的影响,各类菌株的分布呈现一定的分布规律。本研究首次分析了中国辐射污染区真菌的分布和多样性,并收集了大量辐射污染区真菌资源,为进一步研究该区域真菌耐辐射特性及探讨真菌耐辐射机理提供参考。     

人工栽培蛹虫草的病原真菌

蛹虫草规模化栽培过程中,真菌病害普遍发生且危害严重。本研究对人工栽培蛹虫草中真菌病害进行调研,对病原真菌进行分离、纯化、鉴定及致病性检验,并分析病害发生的特点。结果发现引起蛹虫草病害的病原真菌主要有虫草生齿梗孢、产扁虫菌素单端孢、镰刀菌、裂褶菌、哈茨木霉、淡紫拟青霉、稻绿核菌、粉红枝穗霉、卵孢单端孢、扩展青霉、黄曲霉和黑曲霉。其中虫草生齿梗孢为引起蛹虫草侵染性病害的主要病原真菌。虫草生齿梗孢、产扁虫菌素单端孢、镰刀菌、裂褶菌和哈茨木霉主要为害蛹虫草子实体;淡紫拟青霉、稻绿核菌、粉红枝穗霉、卵孢单端孢、扩展青霉、黄曲霉和黑曲霉主要为害栽培料与蛹虫草菌丝体。镰刀菌、裂褶菌、哈茨木霉、淡紫拟青霉、稻绿核菌和粉红枝穗霉为引起蛹虫草病害的首次报道。本研究为蛹虫草病害防控奠定基础,以促进产业健康发展。     

黑胫病感染对烟草茎秆及根际土壤真菌群落结构的影响

烟草黑胫病是由寄生疫霉烟草变种引起的一种对烟草生产造成巨大经济损失的土传病害。本文以健康烟株与感染黑胫病烟株茎秆和根际土壤为研究对象,通过PCR技术扩增样本中真菌转录间隔区的ITS1区域,采用Illumina Miseq高通量测序技术对扩增片段进行测序,旨在了解黑胫病感染对于烟草茎秆和根际土壤真菌群落结构与多样性的影响。本研究20个测序样品,共获得755 599条高质量序列片段,最短序列为200bp,最长序列为356bp,平均序列长度248bp。结果表明,健康烟株和发病烟株根际土壤的优势真菌为子囊菌门Ascomycota、接合菌门Zygomycota和担子菌门Basidiomycota,所有茎秆样品的优势真菌为子囊菌门、担子菌门。健康烟株与感染黑胫病烟株根际土壤样品相对丰度大于1%的属有镰刀菌属Fusarium、被孢霉属Mortierella、隐球菌属Cryptococcus、链格孢属Alternaria和赤霉菌属Gibberella等,其中,健康烟株根际土壤优势属为镰刀菌属（39.35%）和被孢霉属（14.19%）,发病烟株根际土壤镰刀菌属和被孢霉属相对丰度分别为40.26%和20.77%;健康茎秆样品优势属为隐球菌属（31.12%）、链格孢属（18.28%）、镰刀菌属（15.67%）和红酵母属Rhodotorula（13.34%）;病健交界茎秆样品优势属为镰刀菌属（41.36%）、隐球菌属（28.15%）和链格孢属（22.32%）;发病茎秆优势属为隐球菌属（62.14%）和链格孢属（27.75%）。烟株感染黑胫病后,其根际土壤与茎秆样品真菌优势属种类与健康烟株无明显变化,但属水平的相对丰度变化显著。发病烟株茎秆与根际土壤样品真菌群落Sobs、Chao1、Shannon指数较健康烟株降低,Simpson指数上升,表明烟株发病后根际土壤真菌与茎秆内生真菌群落丰富度与多样性降低。该结果对于研究烟草黑胫病发生的微生态机制及其生物防治具有一定的理论指导意义。     

从麦草浆污泥中分离产木聚糖酶的木质纤维降解真菌

采用涂布平板法在马丁氏培养基平板上对麦草浆污泥作真菌分离研究,共分离纯化获得27株真菌,其中青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus)、麦轴梗霉属(Tritirachium)根霉属(Rhizopus)和毛霉属(Mucor)为其优势菌群;在麦芽提取物-OPP培养基平板上分离得到10株真菌,其中拟指突孢曲霉属(Emercellopsis)为其优势菌群。通过对麦草浆污泥连续富集培养得到真菌10株,经初步鉴定为曲霉属(Aspergillus)和青霉属(Penicillium)。对富集培养分离的菌种进行木聚糖酶产酶特性研究,结果表明:最优菌株为Aspergillussp.MC-JAⅡ,其木聚糖酶酶活性最高值达到2060 U/mL,发生在产酶培养的第84 h,相应纤维素酶活为99.5 U/mL。为国内首次报道麦草浆污泥中的降解木质纤维真菌的分离、鉴定和产酶研究。     

拜赖青霉活性产物的抗真菌作用研究

采用平板对峙实验和生长速率法,筛选和测定拜赖青霉ACCC 30440对尖孢镰刀菌与大丽轮枝菌的抑制活性。结果表明,ACCC 30440的PDB发酵液和乙酸乙酯提取物均能够抑制尖孢镰刀菌与大丽轮枝菌的生长,含10%发酵液的培养基对尖孢镰刀菌与大丽轮枝菌的抑制率均达40%以上,含20%发酵液则可完全抑制这两株病原真菌的生长;ACCC30440的乙酸乙酯提取物对尖孢镰刀菌与大丽轮枝菌的半抑制浓度分别为518.63μg/m L和443.42μg/m L。说明拜赖青霉ACCC 30440菌株能够产生抑制植物病原真菌生长的活性物质。     

杜比亚蟑螂共生真菌次生代谢产物及其生物活性

为探究杜比亚蟑螂体内共生真菌种类,测定共生真菌次生代谢产物的抑菌活性和抗氧化活性,筛选出具有抗菌和抗氧化活性的菌株,本研究采用组织块分离法分离杜比亚蟑螂体内的共生真菌,通过形态学和分子生物学相结合的方法对分离到的共生真菌进行鉴定;分别采用薄层层析-生物自显影法和DPPH法测定共生真菌次生代谢产物的抗细菌活性和抗氧化活性。结果表明,从杜比亚蟑螂体内共分离鉴定得到5种不同的共生真菌,主要分布于青霉属(1株)、曲霉属(3株)和聚孢霉属(1株)。活性测定的结果表明,菌株Bdf-2、Bdf-4和Bdf-5表现出较好的抗菌活性,且菌液提取物的抗菌活性要强于菌丝。Bdf-1,Bdf-2和Bdf-3菌液次生代谢产物表现出抗氧化活性,IC 50值分别为0.26 mg/mL、2.20 mg/mL和0.75 mg/mL。杜比亚蟑螂共生真菌以青霉属和曲霉属为主,且具有抗菌和抗氧化活性的次生代谢产物主要分布于菌液中。     

真菌利用异丁胺和NaNO2合成亚硝基哌啶

致癌物亚硝基哌啶(Nitrosopiperidine)可以在林县食物中几种常见的真菌(串珠镰刀菌、圆弧青霉、娄地青霉、白地霉、互隔交链孢霉和杂色曲霉)参加下,由异丁胺和NaNO2合成。以白地霉和娄地青霉的合成能力为最强,分别为每瓶48120ng和40754ng,是杂色曲霉合成量的十几倍。利用气相色谱(Gc)／热能分析器(TEA)分析和鉴定,井用薄层色谱(TLc)将其纯化,又用高分辨气相色谱(GC)／质谱(MS)予以证实。本实验首次证明真菌可以使一级胺环化,生成环状二级胺,这为真菌与亚硝胺生成关系提供了新的线索。     

广西柳树桑寄生内生真菌的分离鉴定与抗肿瘤活性菌株筛选

该研究从广西钦州市采集健康的柳树桑寄生的根、茎和叶中分离并纯化内生真菌,对真菌进行形态学鉴定,提取内生真菌的DNA,采用真菌ITS序列对内生真菌进行分子鉴定。利用A549和H460细胞作为抗肿瘤活性指示细胞,采用MTT法测定真菌乙酸乙酯提取物的抗肿瘤活性。经过初步分离分析,从柳树桑寄生中纯化出27株内生真菌,经鉴定它们分别属于7个目9个属15个种。拟盘多毛孢属和间座壳属为优势属,其中拟盘多毛孢属全部定植于寄生根;其次为新壳梭孢属、拟茎点霉属和球座菌属,各分离到3株;其他包括青霉属、镰刀菌属、炭疽菌属和派伦霉属,各分离到1株。抗肿瘤活性研究表明,有一株与Pestalotiopsis protearum的ITS序列相似性达100%的拟盘多毛孢属菌株Gen24表现有抑制肿瘤细胞A549和H460生长的特性,在真菌乙酸乙酯浸提物浓度为800μg·mL~(-1)时,对A549细胞的抑制率达到了56.92%,对H460细胞的抑制率达到了70.11%。该研究结果表明广西柳树桑寄生内生真菌较丰富,在寄主中的分布表现了一定的组织特异性,而且还存在一些具有抗肿瘤活性的菌株及其活性物质可供进一步深入研究。     

山西省不同地区柴胡根部可培养内生真菌的多样性分析

为研究柴胡（Bupleurum chinense DC.）根部可培养内生真菌的多样性，分析山西省不同地区柴胡根部可培养内生真菌多样性的差异性，建立柴胡根部内生真菌库。本文以山西省不同产地的柴胡根为材料，采用传统植物组织平板分离法对柴胡根部可培养内生真菌进行分离培养和分子鉴定。从25个不同产地的柴胡样品根部中共分离培养得到705株真菌，经分子生物学鉴定，其中695株真菌归属为4门14纲23目32科55属119种。晋南地区的优势菌属为镰刀菌属（Fusarium, 32.18%）、亚隔孢壳属（Didymella, 15.96%）、曲霉属（Aspergillus, 8.24%）、异茎点霉属（Paraphoma, 6.91%）、茎点球属（Phoma, 5.32%）、链格孢属（Alternaria, 5.05%），晋北地区的优势菌属为镰刀菌属（31.66%）、曲霉属（15.36%）、链格孢属（9.09%）、亚隔孢壳属（8.15%）、异茎点霉属（7.52%），亚隔孢壳属、曲霉属、链格孢属等优势属的相对丰度差异较大；晋南地区的优势物种为Didymella bellidis（11.44%）、三线镰刀菌（Fusarium tricinctum, 7.98%）、腐皮镰刀菌（Fusarium solani, 7.45%）、锐顶镰孢菌（Fusarium acuminatum, 5.85%）、烟曲霉（Aspergillus fumigatus, 5.85%），晋北地区的优势物种为锐顶镰孢菌（14.11%）、烟曲霉（11.91%）、三线镰刀菌（9.40%）、菊异茎点霉（Paraphoma chrysanthemicola, 5.64%）、D. bellidis（5.64%）、链格孢菌（Alternaria alternata, 5.64%），D. bellidis、锐顶镰孢菌、烟曲霉等优势种的相对丰度差异较大。差异性分析表明晋南地区的生物多样性显著高于晋北地区，D. bellidis、锐顶镰孢菌、烟曲霉等优势种的相对丰度差异较大，为进一步研究柴胡根内生真菌相对丰度差异较大的物种及其不同菌株对柴胡皂苷积累的影响提供参考。     

不同真菌纤维素酶一些生物化学性质的比较

比较了属于6个属,即青霉(Penicillium)、曲霉(Aspergillus)、木霉(Trichoderma)、漆斑菌(Myrothecium)、镰孢霉(Fusarium)和腐质霉(Humicola),总计9株真菌在麦麸液体培养基中所产纤维素酶的一些生物化学性质。此外,还比较了这9株真菌在麦麸固体培养基上所产纤维素酶的活力以及对脱脂棉、水曲柳木屑、水曲柳木粉、废报纸和玉米芯糠醛废渣的糖化能力。     

千层塔内生真菌的分离与鉴定

目的：为从千层塔中分离具有药用价值的内生真菌奠定基础。方法：新鲜千层塔茎段,经酒精和升汞消毒后,接种于PDA平板培养基上进行内生真菌的分离、纯化;根据菌落形态和孢子等形态特征,结合核糖体基因居间序列（ITS序列）进行菌株鉴定。结果：从千层塔的茎中分离出4株内生真菌。内生真菌I菌落形态和孢子特征与枝状枝孢霉属的特征相符合,ITS序列与GenBank中多条属于枝状枝孢霉的ITS序列相似,鉴定该菌株属于枝状枝孢霉;内生真菌II菌落形态和孢子特征与黄青霉的特征相符合,鉴定该菌株属于黄青霉;内生真菌III菌落形态和孢子特征与尖孢镰刀菌的特征相符合,ITS序列与GenBank中多条属于尖孢镰刀菌的ITS序列相似程度高,鉴定该菌株属于尖孢镰刀菌;内生真菌Ⅳ菌落形态与盾壳霉相似,ITS序列与GenBank中6条属于盾壳霉的ITS序列具有较高的相似性,鉴定该菌株属于盾壳霉。结论：从千层塔中分离和鉴定出4株内生真菌,分别属于枝状枝孢霉、黄青霉、尖孢镰刀茵和盾壳霉。     

龙血树真菌群及其对血褐形成的影响

从柬埔寨龙血树茎杆中分离到３０３株真菌,其中镰刀菌属菌株占总分离频率的５２％,其次是短梗霉和枝孢霉。通过活体接种对血竭产生的影响试验表明,对血竭形成起重要作用的真菌主要是禾谷镰刀菌龙血树变种等４株红色镰刀菌,可使血竭形成量提高６６％－１２０％。