miR-196a-5p对3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响效应

目的:探究miR-196a-5p对小鼠前体脂肪细胞增殖、分化的影响及其潜在的分子机制。方法:(1)构建小鼠肥胖模型,RT-PCR检测脂肪组织中miR-196a-5p表达量;(2)鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,RT-PCR检测分化过程中miR-196a-5p的表达变化;(3)合成miR-196a-5p mimics和inhibitors转染3T3-L1细胞,以CCK8、EdU试剂盒检测miR-196a-5p对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响作用;(4)运用油红O染色、甘油三酯测定评估miR-196a-5p对3T3-L1细胞分化的影响;(5) RT-PCR检测miR-196a-5p对前脂肪细胞增殖、分化相关基因的影响;(6)结合前人文献,运用生物信息软件、萤光素酶报告系统对miR-196a-5p调控脂肪细胞分化的靶基因进行筛选和验证。结果:(1) miR-196a-5p在肥胖小鼠脂肪组织中高表达,在3T3-L1前脂肪细胞分化过程中先升高后下降;(2)与阴性对照组相比,mimics转染抑制了3T3-L1细胞增殖,inhibitors转染促进了3T3-L1细胞增殖;(3)与阴性对照组相比,mimics组积累了大量油红着色的脂滴,甘油三酯含量增多,而inhibitors组的脂滴少而小,甘油三酯含量相对降低;(4)与阴性对照组相比,mimics转染抑制了增殖标志基因Cyclin D1、Cyclin E、CDK2和CDK4表达,促进了分化标志基因PPARγ、C/EBPα、LPL、aP2等的表达,inhibitors转染则表现出与mimics转染相反的作用;(5) miR-196a-5p可显著抑制野生型MAP4K3和MAPK1 3'UTR萤光素酶活性,而突变绑定位点可废除该抑制效应。结论:miR-196a-5p不仅可抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,还可促进其诱导分化、沉积脂滴;miR-196a-5p可能通过靶向调节MAP4K3和MAPK1来介导3T3-L1前脂肪细胞分化。     

miR-30a-3p靶向ANXA1调控EB病毒阳性皮肌炎患者炎症反应的实验研究

皮肌炎(Dermatomyositis,DM)是一种主要影响皮肤和肌肉的自身免疫性疾病,EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染可能在皮肌炎的发生扮演着重要的角色。为了探讨miR-30a-3p通过靶向膜联蛋白A1(Annexin A1,ANXA1)调控EBV阳性皮肌炎患者炎症反应的机制,本研究通过qRT-PCR检测外周血样本和外周血单核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中miR-30a-3p和ANXA1 mRNA的表达;通过ELISA分析外周血样本和PBMCs中相关炎症因子(IL-1β、IL-17、TNF-α)的表达;通过生物信息学软件预测miR-30a-3p的靶基因并通过双荧光素酶报告实验确定二者之间的结合作用。结果显示:与对照组相比,在皮肌炎患者外周血样本中miR-30a-3p、IL-1β、IL-17、TNF-α表达显著上调(P0.05);与对照组相比,EBV组中miR-30a-3p、IL-1β、IL-17、TNF-α表达显著上调(P0.05);与对照组相比,miRNA mimics组中miR-30a-3p、IL-1β、IL-17、TNF-α表达显著上调(P0.05);生物信息学分析显示ANXA1是miR-30a-3p的靶标,与对照组相比,miRNA mimics组miR-30a-3p可以与ANXA1 3'UTR区域结合并特异性抑制ANXA1的表达;与oe-NC+miRNA mimics组相比,在oe-ANXA1+miRNA mimics组中ANXA1的表达是可以挽救miR-30a-3p所抑制的ANXA1表达,进而抑制PBMCs中相关炎症因子的表达。从而得出结论:miR-30a-3p通过靶向抑制ANXA1表达,进而促进PBMCs中相关炎症因子的表达以及皮肌炎炎症反应的发生。     

LncRNA MEG3通过抑制Wnt/β-catenin信号通路对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA)人母系表达基因(Maternally expressed gene 3,MEG3)对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法:选取我院住院的OA患者和半月板损伤患者各40例,采用RT-PCR检测两组患者软骨组织和细胞中MEG3的表达。在OA软骨细胞中,转染si RNA-MEG3(si-MEG3)或过表达MEG3的慢病毒载体(LV-MEG3),采用CCK8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况,RT-PCR和western blot检测PCNA、Dvl2、GSK-3β、cyclinD1和β-catenin m RNA和蛋白表达。结果:OA患者膝关节软骨组织中MEG3的表达水平明显低于半月板损伤患者软骨组织(P0.05),同时OA软骨细胞中MEG3的表达水平明显低于正常软骨细胞(P0.05)。OA软骨细胞转染siMEG3后,细胞增殖能力和PCNA表达明显下降(P均0.05),G0/G1期细胞比例明显升高(P0.05),S期细胞比例明显下降(P0.05),细胞凋亡率明显增加(P均0.05)。低表达MEG3能够显著降低Dvl2、GSK-3β、cyclinD1和β-catenin m RNA和蛋白表达水平(P均0.05),增加GSK-3βm RNA和蛋白表达水平(P均0.05)。在OA软骨细胞转染LV-MEG3后,细胞增殖能力和PCNA表达明显升高(P均0.05),G0/G1期细胞比例明显下降(P0.05),S期细胞比例明显增加(P0.05),细胞凋亡率明显减少(P均0.05)。高表达MEG3能够显著增加OA软骨细胞中Dvl2、GSK-3β、cyclinD1和β-catenin m RNA和蛋白表达水平(P均0.05),降低GSK-3βm RNA和蛋白表达(P均0.05)。同时,采用XAV939阻滞Wnt/β-catenin信号通路能够显著逆转过表达MEG3对OA软骨细胞增殖和凋亡的影响。结论:MEG3在OA患者和软骨细胞中均显著低表达,并能够通过阻滞Wnt/β-catenin信号通路激活影响OA软骨细胞增殖和凋亡。MEG3可能成为OA治疗的重要靶分子。     

长非编码RNA ILF3-AS1通过调控miR-130a-3p/PTEN轴抑制宫颈癌细胞的增殖

ILF3反义RNA 1（ILF3 antisense RNA 1,ILF3-AS1）是一条定位于染色体19p13.2的lncRNA,它是白介素增强子结合因子3 (interleukin enhancer binding factor 3,ILF3)的反义RNA。ILF3-AS1在多种肿瘤发生发展中发挥关键作用,但其在宫颈癌中的作用尚无研究探讨。本文利用TCGA及GTEx数据库进行生物信息学分析提示,ILF3-AS1在宫颈癌组织中低表达（P<0.001）并与良好预后相关（P=0.045）。qRT-PCR结果显示,ILF3-AS1在宫颈癌组织及SiHa、HeLa、CaSki宫颈癌细胞系中表达较对照组均呈下降趋势。过表达ILF3-AS1可明显抑制宫颈癌细胞增殖活力及促进宫颈癌细胞凋亡。Star Base v3.0数据库分析提示,ILF3-AS1可靶向吸附miR-130a-3p;而miR-130a-3p可靶向结合PTEN。qRT-PCR检测显示,miR-130a-3p在宫颈癌中的表达量明显高于正常宫颈组织（P<0.01）。荧光素酶报告基因结果显示,ILF3-AS1可以与miR-130a-3p 特异性结合（P<0.01）。HeLa细胞过表达ILF3-AS1后,miR-130a-3p表达量明显下调（P<0.01）;在过表达ILF3-AS1细胞中,同时转染miR-130a-3p mimics,能部分逆转LF3-AS1对于细胞增殖的抑制作用（P<0.001）。HeLa细胞在过表达ILF3-AS1后,磷酸酶及张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN) mRNA（P<0.001）及蛋白质（P<0.001）表达量显著升高;当同时转染miR-130a-3p mimics,PTEN的 mRNA（P<0.001)及蛋白质（P<0.001）的表达升高被明显抑制。综上,ILF3-AS1可以作为miR-130a-3p的吸附海绵靶向调控PTEN表达,从而抑制宫颈癌细胞的增殖。     

miR-27a-3p通过靶向Sema7A调控病毒性心肌炎心肌细胞损伤的机制研究

目的探讨微小RNA-27a-3p(miR-27a-3p)过表达对病毒性心肌炎(VMC)细胞损伤的影响及其可能的作用机制。方法原代培养大鼠心肌细胞,柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞建立VMC模型(CVB3组)。正常心肌细胞作为对照组,分别将miR-NC、miR-27a-3p mimics、si-NC,si-Sema7A分别转染至CVB3感染的心肌细胞,记为CVB3+miR-NC组、CVB3+miR-27a-3p组、CVB3+si-NC组、CVB3+si-Sema7A组。分别将miR-27a-3p mimics与pcDNA,miR-27a-3p mimics与pcDNA-Sema7A共转染至CVB3感染的心肌细胞,记为CVB3+miR-27a-3p+pcDNA组、CVB3+miR-27a-3p+pcDNA-Sema7A组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与Western blot法分别检测细胞中miR-27a-3p、信号蛋白7A(Sema7A)的表达水平;流式细胞术检测miR-27a-3p过表达或干扰Sema7A表达后心肌细胞的凋亡率;酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)的含量;双荧光素酶报告基因验证miR-27a-3p与Sema7A的靶向关系;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达。两组间比较采用独立样本t检验。结果与对照组比较,CVB3组miR-27a-3p的表达水平(1.01±0.09比0.42±0.04)降低,Sema7A的mRNA和蛋白表达水平(1.02±0.09比2.15±0.21、0.43±0.04比0.94±0.09)升高,TNF-α、IL-1水平[(403.56±38.16)pg/mL比(1156.48±63.59)pg/mL>(29.45±3.54)pg/mL比(136.57±12.47)pg/mL]升高,细胞凋亡率[(5.36±0.54)%比(24.58±2.14)%]升高,Bax、cleaved caspase-3的表达水平升高,Bcl-2的表达水平降低(P均<0.05);与CVB3+miR-NC组比较,CVB3+miR-27a-3p组TNF-α,IL-1水平[(1187.69±71.42)pg/mL比(516.28±48.31)pg/mL、(147.25±14.05)pg/mL比(43.68±5.02)pg/mL]和细胞凋亡率[(26.38±2.55)%比(10.24±1.15)%]降低,Bax、cleaved caspase-3表达水平降低,Bcl-2表达水平升高(P均<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-27a-3p可靶向调控Sema7A的表达;Sema7A过表达可逆转miR-27a-3p过表达对CVB3诱导的VMC细胞损伤的作用。结论miR-27a-3p过表达可降低VMC细胞中炎症因子的表达及抑制细胞凋亡从而减轻心肌损伤,其作用机制可能与靶向调控Sema7A的表达有关。     

MiR-186-5p对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响研究 *

目的 探究miR-186-5p对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖,分化的影响及其潜在的分子机制.方法: qRT-PCR检测miR-186-5p在不同周龄小鼠白色脂肪组织及3T3-L1前脂肪细胞增殖分化过程中的表达变化;通过脂质体将miR-186-5p mimics,inhibitors转染入增殖液或分化液培养的3T3-L1细胞后,利用CCK-8,EdU和qRT-PCR检测3T3-L1前脂肪细胞增殖变化,油红O染色观察其脂滴形态;通过生物信息软件TargetScan和双荧光报告系统分别对miR-186-5p靶基因进行预测和确认.结果: (1)miR-186-5p在1~6周龄小鼠的白色脂肪组织及3T3-L1前脂肪细胞自然分化过程中表达量均逐渐上调.(2)与阴性对照相比,mimics或inhibitors转染分别显著地促进或抑制了miR-186-5p的表达.(3)过表达miR-186-5p后,3T3-L1前脂肪细胞的增殖速率减慢,脂滴增大增多;而抑制miR-186-5p后,3T3-L1前脂肪细胞增殖速率增快,脂滴数量减少,且粒径变小.其中过表达miR-186-5p显著地降低了野生型Wnt5a和Mapk1 3'-UTR活性,而突变相应的绑定位点可解除该抑制作用.结论: miR-186-5p可抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖,且通过直接靶向Wnt5a和Mapk1以促进其分化为成熟脂肪细胞.     

构建ECE1 3''UTR荧光素酶报告基因载体验证其与miR-199a-5p靶向关系

目的:通过构建双荧光素酶报告基因重组质粒验证miRNA-199a-5p(miR-199a-5p)与ECE1基因的靶向调控关系。方法:通过microRNA靶基因预测软件Targetscan获取miR-199a-5p与ECE1基因3'UTR潜在的互补结合位点,PCR技术扩增ECE1基因3'端非翻译区,将此序列与miR-199a-5p mimics或空质粒(NC)共转染到pmirGLO-ECE1-野生型(WT)的293细胞里;将此序列突变序列与miR-199a-5p mimics或NC共转染到pmirGLO-ECE1-突变型(MUT)的293细胞里,共四组,检测四组细胞中荧光素酶活性。结果:成功构建双荧光素酶报告基因重组质粒pmirGLO-ECE1-WT和pmirGLO-ECE1-MUT。与野生型NC(4.30±0.53)组及突变型miR-199a-5p mimics组(4.465±0.3968)比较,野生型miR-199a-5p mimics组(1.686±0.4098)荧光素酶活性明显降低,P0.05,有显著差异;突变型miR-199a-5p mimics组(4.465±0.3968)与突变型miR-199a-5p NC(4.18±0.498)组及野生型NC(4.30±0.53)组两两比较,P0.05,无明显差异。结论:miR-199a-5p与野生型ECE1存在结合位点,miR-199a-5p对野生型ECE1重组质粒荧光活性有明显的抑制作用,证实miR-199a-5p能够靶向调控ECE1基因。     

circPPP1R12A激活p53信号通路调控骨关节炎中软骨细胞增殖和凋亡

摘要 目的：探讨circPPP1R12A（circ_0000423）调控p53信号通路对骨关节炎（osteoarthritis,OA）中软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法：采用qRT-PCR检测circPPP1R12A在OA软骨细胞中的表达水平。在OA软骨细胞中分别转染oe-circPPP1R12A和sh-circPPP1R12A后,采用CCK-8检测细胞增殖情况;免疫荧光检测Ki-67阳性细胞表达率;流式细胞术检测细胞凋亡情况;qRT-PCR检测Ki-67和p53表达水平;Western Blot检测Cleaved-caspase3、P53、BCL-2和BAX的表达水平。结果：OA软骨细胞中circPPP1R12A的表达水平明显高于正常软骨细胞。过表达circPPP1R12A能够抑制OA软骨细胞增殖和促进细胞凋亡,通过上调p53表达激活p53信号通路,低表达circPPP1R12A能够促进OA软骨细胞增殖和抑制细胞凋亡,通过下调p53表达阻滞p53信号通路。在OA软骨细胞中同时低表达circPPP1R12A和过表达p53能够反转单独低表达circPPP1R12A对OA软骨细胞增殖和凋亡的影响。结论：circPPP1R12A在OA软骨细胞中明显高表达,circPPP1R12A能够通过激活p53信号通路抑制骨OA软骨细胞增殖和促进软骨细胞凋亡。circPPP1R12A可能成为OA治疗的干预靶点。     

miR-34a-5p靶向GMFB抑制细胞增殖对先天性巨结肠的治疗意义

目的探讨miR-34a-5p通过靶基因GMFB调控神经嵴细胞的增殖。 方法通过荧光定量PCR检测miR-34a-5p在先天性巨结肠症（HSCR）和正常结肠组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a-5p的靶基因,SH-SY5Y细胞转染miR-34a-5p mimics及对照miR-NC,并转染GMFB表达载体,通过CCK8检测miR-34a-5p和GMFB对神经嵴细胞增殖的影响,并通过Western Blot检测miR-34a-5p对GMFB蛋白表达的影响。采用t检验和单因素方差分析。 结果荧光定量PCR结果显示,HSCR结肠组中miR-34a-5p的相对表达量为0.43±0.10,低于正常结肠组1.15±0.18,差异具有统计学意义（t = 3.50,P < 0.01）。CCK8结果显示,miR-34a-5p mimics组细胞在培养24?h和48?h后细胞A450值分别为0.53±0.03和0.87±0.04,低于miR-NC对照组0.87±0.03,1.42±0.04。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-34a-5p mimics与GMFB 3'UTR WT载体共转染组荧光强度为0.44±0.03,低于对照miR-NC与WT载体共转染组1.02±0.06。CCK8结果所示,miR-34a-5p mimics+GMFB组细胞培养24?h和48?h后,A450值分别为0.99±0.02和1.50±0.03,高于miR-34a-5p mimics组0.53±0.03, 0.87±0.04,差异具有统计学意义（t?=?7.07,P < 0.01;t?=?9.14,P < 0.01）。Western Blot检测结果显示,miR-34a-5p mimics组细胞的GMFB蛋白表达量为0.25±0.01,低于miR-NC对照组0.90±0.03,差异具有统计学意义（t?=?35.60,P < 0.01）,miR-34a-5p mimics+GMFB组细胞GMFB蛋白表达量为1.03±0.03,高于miR-34a-5p mimics组0.25±0.01,差异具有统计学意义（t?=?42.74,P < 0.01）。 结论miR-34a-5p能够通过抑制靶基因GMFB的表达,抑制神经嵴细胞SH-SY5Y的增殖。     

miR-382-5p通过靶基因PTEN阻滞NB4细胞分化

该文主要研究在急性早幼粒细胞白血病NB4细胞中, miR-382-5p通过调控靶基因PTEN(phosphatase and tensin homologue)抑制了全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)诱导的急性早幼粒细胞分化。我们运用ATRA(1μmol/L)诱导细胞分化; Western blot检测PTEN及髓系分化标志物CD11b的蛋白质水平;实时荧光定量PCR检测miR-382-5p的表达水平;过表达PTEN的慢病毒载体分别感染NB4细胞和HL-60、THP-1细胞;脂质体转染miR-382-5p的模拟剂(mimics)和特异性抑制剂(inhibitors)NB4细胞。结果显示, PTEN促进ATRA诱导的NB4细胞分化,而在HL-60和THP-1细胞中并无明显促分化效应。NB4细胞中,脂质体转染miR-382-5p mimics在mRNA和蛋白水平均抑制了PTEN的表达,并且抑制了ATRA诱导的分化;转染miR-382-5p inhibitors则恢复了PTEN表达,同时促进了ATRA诱导的急性早幼粒细胞NB4细胞的分化。该文结果提示, miR-382-5p靶向抑制了PTEN的表达从而抑制ATRA诱导的NB4细胞分化。     

过表达微小RNA-130a-3P对LPS诱导心肌细胞损伤的干预作用及其机制*

目的: 探讨miRNA-130a-3p对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞自噬与凋亡的影响及分子机制。方法: H9C2心肌细胞随机分为5组,即正常对照组,LPS模型组,miRNA阴性对照组(miRNA-negative control组),miRNA-130a-3p mimics组(过表达miRNA-130a-3p),miRNA-130a-3p mimics+LY294002组(过表达miRNA-130a-3p + PI3K抑制)。LPS模型组即终浓度为10 μg/ml的LPS诱导24 h,miRNA阴性对照组与miRNA-130a-3p mimics组是利用lipo3000将阴性对照miRNA及miRNA-130a-3p mimics转染至H9C2细胞,培养24 h后,再将LPS加入培养基中培养24 h。miRNA-130a-3p mimics + LY294002组是利用lipo3000将miRNA-130a-3p mimics转染至H9C2细胞,同时在培养基中加入10 μmol/L(终浓度)的LY294002,培养24 h后,再将浓度为10 μg/ml的LPS加入培养基中培养24 h。所有实验均重复5次以上。利用RT-qPCR检测细胞中miRNA-130a-3p mRNA的表达水平,利用CCK-8实验检测细胞活性,利用ELISA实验检测细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β (IL-1β)的含量,利用比色法检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量;利用Western blot检测细胞中p-PI3K蛋白,p-AKT蛋白,Bax蛋白,Bcl-2蛋白,cleaved-caspase-3蛋白,LC3蛋白,p62蛋白的表达水平。结果: 结果显示,与正常组相比较,LPS模型细胞中miRNA-130a-3p mRNA水平,p-PI3K蛋白与p-AKT蛋白的水平显著低于正常对照组(P<0.01);与LPS组相比较,miRNA-130a-3p mimics组细胞中p-PI3K,p-AKT蛋白的表达显著升高(P<0.01,P<0.05);与正常对照组相比较,LPS组细胞活性显著降低,细胞培养液中TNF-α,IL-6,IL-1β及 LDH的含量显著升高(P<0.01), SOD的含量显著降低(P<0.01),细胞中Bax蛋白,cleaved caspase-3蛋白,p62蛋白的表达显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白的表达和LC3II/I的比率显著降低(P<0.01);与LPS组相比较,miRNA-130a-3p mimics可提高细胞活性,降低细胞培养液中TNF-α,IL-6,IL-1β及LDH的含量(P<0.01,P<0.05),提高SOD的含量(P<0.05),降低细胞中Bax蛋白,cleaved caspase-3蛋白,p62蛋白的表达(P<0.01),促进Bcl-2蛋白的表达(P<0.01),提高LC3II/I的比率(P<0.05);与miRNA-130a-3p mimics组相比较,miRNA-130a-3p mimics+LY294002组,可部分逆转miRNA-130a-3p mimics对细胞的作用。结论: 过表达miRNA-130a-3p可部分通过激活PI3K/AKT信号通路促进细胞的自噬与抑制细胞凋亡,减轻LPS诱导的心肌细胞损伤。     

环状RNA circMRPS35通过miR-130a-3p/ZNRF3轴调节胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

摘要 目的：探讨环状RNA MRPS35（circMRPS35）对胃癌（GC）细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的调控机制。方法：体外培养人GC细胞系（HGC-27、MGC-803、MKN45和AGS）和正常胃上皮GES-1细胞,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测circMRPS35、miR-130a-3p和锌环指蛋白3（ZNRF3）mRNA表达。另取MGC-803细胞,分为对照组、pc-NC组、pc-circMRPS35组、pc-circMRPS35+miR-NC组、pc-circMRPS35+miR-130a-3p组,采用Lipofectamine 3000进行质粒转染。RT-qPCR检测circMRPS35、miR-130a-3p和ZNRF3 mRNA表达,Western blot检测ZNRF3蛋白表达,CCK-8法、流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,划痕实验和Transwell小室实验检测细胞迁移与侵袭能力,裸鼠移植瘤实验探究circMRPS35对GC细胞体内生长的影响。双荧光素酶报告基因检测miR-130a-3p与circMRPS35或ZNRF3的靶标关系。结果：GC细胞系中circMRPS35和ZNRF3 mRNA呈低表达,miR-130a-3p呈高表达（均P＜0.05）。过表达circMRPS35可降低miR-130a-3p,上调ZNRF3 mRNA和蛋白水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡（均P＜0.05）;circMRPS35过表达对GC细胞恶性行为和裸鼠移植瘤生长的抑制作用可被miR-130a-3p mimic逆转（P＜0.05）。双荧光素酶实验结果显示,过表达miR-130a-3p可降低circMRPS35-WT和ZNRF3-WT的荧光素酶活性（P＜0.05）。结论：circMRPS35可能通过miR-130a-3p/ZNRF3轴抑制GC细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。     

Immunosuppressive Activity of the 3a-1 Fraction of Papain

The maximal nonlethal dose of the 3a-1 fraction of papain, determined by use of 9-week-old white albino rabbits, was 10 mg per injection, administered intravenously. The immunosuppressive activity of the 3a-1 fraction of papain was studied by its inhibition of sheep red blood cell hemolysin, bacterial agglutinin, and horse serum precipitin. Immune suppression was observed when papain injections preceded antigen injections by 12 to 18 hr. The enzyme preparation was analyzed by use of cellulose acetate and starch-gel electrophoresis and by the micro-Kjeldahl method. Starch-gel electrophoresis of serum samples revealed qualitative alterations in the alpha(-1) region 7 hr after papain administration. Changes were also observed in the urinary aminopolysaccharide content.     

miR-411a-3p抑制羊驼黑色素细胞黑色素的生成

microRNA-411a-3p（miR-411a-3p）在不同毛色羊驼皮肤中差异表达,提示其可能在毛色形成中起调控作用。为证明miR-411a-3p在羊驼皮毛黑色素形成中的作用,本研究通过生物信息学预测及靶基因搜索,发现胰岛素样生长因子1受体（IGF1R）是miR-411a-3p的靶基因,继而构建了含Igf1r mRNA 3′-UTR的荧光素酶报告基因载体。报告基因转染结合报告酶活性测定证明,Igf1r是miR-411a-3p的靶基因。原位杂交显示,miR-411a-3p主要在羊驼黑色素细胞胞质中表达,提示其可能在黑色素细胞中具有重要作用。qRT-PCR揭示,棕色和黑色羊驼皮肤中miR-411a-3p表达量明显低于白色羊驼。qRT-PCR联合蛋白质印迹分析显示,在羊驼黑色素细胞过表达miR-411a-3p,伴随Igf1r下调,小眼畸形相关转录因子（Mitf）依赖的毛色基因酪氨酸酶（Tyr）、酪氨酸酶相关蛋白-2（Tyrp2）及黑色素表达水平明显下调。上述结果提示,miR-411a-3p可通过靶向抑制Igf1r负调控羊驼黑色素黑色素合成。该结果将加深我们对羊驼毛色形成机制的认识。     

MicroRNA-19a-3p promotes rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes via targeting SOCS3

Rheumatoid arthritis (RA) is a common chronic autoimmune disease and effective treatment for RA is still lacking. In this study, the regulatory role of miR-19a-3p in RA was investigated. Quantitative polymerase chain reaction analysis of human blood samples showed that the level of miR-19a-3p was significantly lower in the RA patients compared with that in healthy patients (P < 0.05). In RA fibroblast-like synoviocytes (RAFLS), miR-19a-3p and suppressor of cytokine signaling 3 (SOCS3) were also downregulated and upregulated, respectively, compared with those of normal FLS. Transfection of miR-19a-3p mimic in RAFLS inhibited cell proliferation and promoted cell apoptosis. TargetScan identified SOCS3 as a target of miR-19a-3p, which was confirmed by dual-luciferase assay. Western blot indicated that SOCS3 protein level was significantly decreased after miR-19a-3p overexpression. Moreover, SOCS3 silencing through siRNA transfection also enhanced cell proliferation, meanwhile inhibiting RAFLS apoptosis. In addition, SOCS3 overexpression abrogated the effects of miR-19a-3p overexpression on cell proliferation and apoptosis, corroborating that SOCS3 acts as a downstream effector in the miR-19a-3p-mediated function of RAFLS. These findings suggest that miR-19a-3p plays an important role in RA, and the miR-19a-3p/SOCS3 axis may become a potential therapeutic target for RA.