名刊封面

《病毒学》2010.7 葡萄扇叶病毒 本期封面上我们看到的是一串鲜嫩欲滴的葡萄……也许不全是!在诱人的葡萄中间还夹杂着一个伪装得很好的坏家伙,它就是我们今天的主角——葡萄扇叶病毒。     

长臂光敏生物素标记葡萄扇叶病毒外壳蛋白基因cDNA探针的制备及其在检测上的应用

由葡萄扇叶病毒（Ｇｒａｐｅｖｉｎｅｆａｎｌｅａｆｖｉｒｕｓ,ＧＦＬＶ）导致的葡萄扇叶病在世界各地葡萄园内均有发生,是最为普遍和严重的病毒病害之一,感病葡萄可减产２０％～８０％。近年来,许多国家开展了葡萄脱毒苗木的培育和推广工作,同时进行了葡萄扇叶病毒...     

金黄色葡萄球菌协同凝集试验快速检测葡萄扇叶病毒

葡萄扇叶病毒(GFV)是葡萄病毒中广泛传布和危害最大的病毒之一。近年来盲目引种使葡萄园内GFV危害只增不减。利用茎尖组织培养或结合热处理是选育脱GFV葡萄组培苗的     

抗病毒转基因葡萄

抗病毒转基因葡萄被葡萄扇叶病毒（ＧｒａｐｅｖｉｎｅＦａｎｌｅａｆＶｉｒｕｓ）侵染的葡萄植株短矮、叶黄、枝条多节扭曲,造成葡萄减产。该病毒经过土壤中的线虫（Ｘｉｐｈｉｎｅｍａｉｎｄｅｘ或Ｘ．ｄｉｖｅｒｓｉｃａｕｄａｔｕｍ）媒体传播。它们啃咬葡萄树根获取...     

协同凝集试验快速诊断葡萄扇叶病毒

本文描述一个新的试验方法,即协同凝集试验,用于检测葡萄扇叶病毒(GFV).检出GFV的最低浓度为4ng／ml,其灵敏度与ELISA检测病毒水平相当,而且更简便、快速。     

2004年1～6月签发授权的美国农业生物技术专利项目

在全世界约235个国家或地区中,有180个国家或地区共同签订了“专利合作条约”(PCT)。美国是参与PCT的成员国之一。现将“美国专利和商标局”于2004年1～6月期间签发授权的农业生物技术专利项目,包括专利号和专利名称编译于下。认为虽然有关这些技术发明的专利属性偶亦存在争议,但一般而论,这些美国专利,应该是国际性的。6668201调节生料混合物按比例定量配合控制器的系统和方法6667428甘蓝(Brassicaoleracea)的高效植物转化6667427盘核菌(Sclerotinia)诱导的启动子及其利用6667426表达了葡萄扇叶病毒外壳蛋白的葡萄对葡萄扇叶病毒的抗性…     

生物素标记GFV—cDNA探针的制备及在检测葡萄扇叶病毒上的应用

以整合到质粒中的ＧＦＶ－ｃＤＮＡ为模板经ＰＣＲ合成了生物素标记的ＧＦＶ单、双链探针。用合成的探针对提纯的ＧＦＶ－ＲＮＡ２、感染ＧＦＶ的昆诺藜叶及１８株葡萄进行ＤＮＡ－ＲＮＡ杂交检测表明：检测提纯病毒ＲＮＡ２的灵敏度为１．５ｐｇ／斑点,感染ＣＦＶ的昆诺提取液最高稀释度可达４０９６０倍;１１株显示典型扇叶症状的样品均为阳性,且汁液稀４００～８００倍仍能测出,７株不显示典型扇叶症状的葡萄中３株受到ＧＦＶ     

葡萄卷叶病毒的纯化、血清学研究及其在脱毒组培苗检测中的应用

将具有典型葡萄卷叶病(Grapevine leafroll diseas,GLRD)症状的葡萄组织,经差速和硫酸铯—蔗糖密度梯度离心,提纯了GLRV,并制备了兔抗血清。电镜下可观察到长度从600～2000nm的线形病毒颗粒,其中以1400nm左右为主。免疫电镜结果表明线形病毒颗粒能被美国的NY-1分离株抗血清(Ⅲ型)所修饰。在间接ELISA中提纯制品与GLRV的Ⅲ、Ⅳ、Ⅱ型抗血清均能产生免疫反应。与Ⅲ型抗血清产生较强的免疫反应,Ⅳ型次之,Ⅱ型最弱。在SDS-免疫双扩散实验中病组织韧皮部粗提液与GLRV的Ⅲ,Ⅳ、Ⅱ型抗血清均产生免疫沉淀线。从而推测我国葡萄园内的葡萄卷叶病很可能由2种或3种卷叶病毒感染所致.采用A蛋白夹心酶联免疫吸附试验(PAS-ELISA)检测葡萄试管苗,Ⅲ型抗血清和自制抗血清的平行测试结果基本相符,共获得11个生食葡萄和10个山葡萄品种的脱葡萄卷叶病毒和扇叶病毒的组培苗,扩繁后田间试种表现出良好的农艺性状。     

葡萄试管苗热处理结合茎尖培养脱病毒效果的研究

对７个生食葡萄品种的试管苗热处理结合茎尖剥离培养脱除病毒的方法做了研究,结果表明,从热处理试管苗剥离的茎尖培养成活率为６１．２％,其中有１８．１％的成苗。各品种热处理试管苗剥离的茎尖分化再生能力不同：先形成愈伤组织的成苗率较低,而先分化芽的茎尖成苗率较高。这一方法对扇叶病毒和卷叶病毒的脱除率达９２％以上。     

葡萄卷叶病毒的纯化,血清学研究及其在脱毒组培苗检测中的应用

将具有典型葡萄卷叶病(Grapevine leafroll diseas,GLRD)症状的葡萄组织,经差速和硫酸铯—蔗糖密度梯度离心,提纯了GLRV,并制备了兔抗血清。电镜下可观察到长度从600～2000nm的线形病毒颗粒,其中以1400nm左右为主。免疫电镜结果表明线形病毒颗粒能被美国的NY-1分离株抗血清(Ⅲ型)所修饰。在间接ELISA中提纯制品与GLRV的Ⅲ、Ⅳ、Ⅱ型抗血清均能产生免疫反应。与Ⅲ型抗血清产生较强的免疫反应,Ⅳ型次之,Ⅱ型最弱。在SDS-免疫双扩散实验中病组织韧皮部粗提液与GLRV的Ⅲ,Ⅳ、Ⅱ型抗血清均产生免疫沉淀线。从而推测我国葡萄园内的葡萄卷叶病很可能由2种或3种卷叶病毒感染所致.采用A蛋白夹心酶联免疫吸附试验(PAS-ELISA)检测葡萄试管苗,Ⅲ型抗血清和自制抗血清的平行测试结果基本相符,共获得11个生食葡萄和10个山葡萄品种的脱葡萄卷叶病毒和扇叶病毒的组培苗,扩繁后田间试种表现出良好的农艺性状。     

葡萄扇叶病毒外壳蛋白基因的克隆,序列分析及其在大肠杆菌中的表达

通过RT-PCR方法把葡萄扇叶病毒(GFLV)外壳蛋白基因(CP gene)分成两部分扩增,扩增产物克隆入pGEM-5Zf(+)载体,并通过BglⅢ位点连接成一完整的外壳蛋白基因,通过序列分析测得全长外壳蛋白基因为1512bp,编码504个AA＇s,与国外株系GFLV-F13相比,核苷酸同源性为88.4％,氨基酸同源性为95.8％。并且这一外壳蛋白基因在大肠杆菌E.coli DH-5α中得到了表达。     

生物素标记GFV－cDNA探针的制备及在检测葡萄扇叶病毒上的应用

以整合到质粒中的ＧＦＶ－ｃＤＮＡ为模板经ＰＣＲ合成了生物素标记的ＧＦＶ单、双链探针。用合成的探针对提纯的ｃＦＶ－ＲＮＡ＿２、感染ＣＦＶ的昆诺藜叶及１８株而萄进行ＤＮＡ－ＲＮＡ杂交检测表明：检测提纯病毒ＲＮＡ＿２的灵敏度为１．５ｐｇ／斑点,感染ＧＦＶ的昆诺藜提取液最高稀释度可达４０９６０倍;１１株显示典型扇叶症状的样品杂交结果均为阳性,且汁液稀释４００～８００倍仍能测出,７株不显示典型扇叶症状的葡萄中３株受到ＧＦＶ的侵染。单、双链探针最适使用浓度分别为１／２００及１／１００。     

葡萄扇叶病毒移动蛋白在寄主体内的动态检测和免疫金标记

利用葡萄扇叶病毒法国分离物F13(Grapenive fanleaf virus, GFLVF13)移动蛋白抗体对杭州分离物(GFLVH)移动蛋白进行Western blot,分析表明移动蛋白在接种GFLVH 3d后的苋色藜(Chenopodium amaranticolor)系统叶中就可检测到,随着时间推移,其积累量逐渐升高,接种16d后达到最高值。接种32d后的病叶已经枯黄,但移动蛋白积累量并没有减少。超薄切片电镜观察发现,在感染GFLVH的昆诺藜(C.quinoa)和苋色藜的叶肉组织薄壁细胞中,病毒粒子呈纵列整齐地排列在小管状结构中,在胞间连丝中也发现有管状结构。免疫金标记显示胶体金能定位在细胞质、细胞壁和胞间连丝上,在管状结构也发现有少量的金粒子。这些结果进一步说明了GFLV是通过管状结构实现细胞间移动的。     

葡萄扇叶病毒外壳蛋白基因的克隆,序列分析及其在大肠杆菌中…

通过ＲＴ－ＰＣＲ方法把葡萄扇叶病毒（ＧＦＬＶ）外壳蛋白基因（ＣＰ ｇｅｎｅ）分成两部分扩增,扩增产物克隆入ｐｇＥＭ－５Ｚｆ（＋）载体,并通过ＢｇｌⅡ位点连接成一完整的外壳蛋白基因,通过序列分析测得全长外壳蛋白基因为１５１２ｂｐ,编码５０４个ＡＡ＇ｓ与国外株系ＧＦＬＶ－Ｆ１３相比,核苷酸同源性为８８．４％,氨基酸同源性为９５．８％。并且这一外壳蛋白基因在大肠杆菌Ｅ． ｃｏｌｉＤＨ－５α中得到了表达。     

葡萄孢菌真菌病毒研究进展(综述)

分析寄生于葡萄孢中真菌病毒的种类及其对寄主真菌的影响,描述其中5种病毒的形态及基因组结构,根据葡萄孢真菌病毒的研究现状提出未来研究方向,为葡萄孢真菌病毒的深入研究和利用提供参考。     

葡萄试管苗光自养培养快速繁殖

葡萄是世界上栽培面积和总产量都占第一位的果树。有关葡萄茎尖培养、侧芽培养和无 病毒苗的试管繁殖都有报道。但是试管苗移栽成活率一般较低而且很不稳定,这就使葡萄试管苗(特别是脱病毒试管苗)快速繁殖在生产上的应用受到很大限制。本试验利用光自养培养获得的葡萄试管苗生长发育正常,移栽前练苗时培养基不易污染,可适当延长练苗时间,并且,此试管苗对移栽后的环境条件具有很强的适应能力,成活率高,生长速度快。我们     

扇叶铁线蕨叶片对岩溶环境的生态适应

地理环境的不同造就了植物不同的适生机制。本研究对岩溶区和非岩溶区的扇叶铁线蕨(Adiantum flabellulatum)的叶片进行了比较, 结果表明, 二者在显微结构和亚显微结构方面都存在明显区别。在显微结构方面: 岩溶区生长的扇叶铁线蕨的叶片具有旱生植物叶片特点, 即叶片为等面叶, 叶肉细胞排列较 为紧密以及叶片维管组织发达等; 而非岩溶区生长的扇叶铁线蕨的叶片为异面叶, 特点为叶肉细胞排列相对疏松, 维管组织不发达。扫描电镜分析显示: 非岩溶区扇叶铁线蕨叶片表面具有很多明显的凹槽状结构, 而岩溶区扇叶铁线蕨的叶片与之有明显不同, 其叶片表面特别是叶脉位置具有明显的刺状结构, 超 薄切片发现这些刺状膨大部分细胞内存在液泡结构, 并且这些刺状结构在叶片抽真空的过程中变瘪, 说明这些刺状结构可能具有储存水分的功能。岩溶区扇叶铁线蕨特有的显微和亚显微结构保证了该种植物在岩溶干旱环境中可以正常生长。     

葡萄病毒B的RT-PCR检测技术研究

旨在建立适合葡萄的葡萄病毒B的RT-PCR检测技术。从感染葡萄病毒B的葡萄皮层中提取总RNA,以其为模板合成cDNA第一链,并利用两对引物分别进行PCR扩增;回收PCR特异扩增产物,与pUCm-T载体连接,并进行转化、重组克隆的筛选、重组质粒的酶切鉴定和序列测定。结果显示,两对引物均能获得与预期片段大小一致长约460 bp和470 bp的扩增产物扩增片段序列与已报道GVB序列(序列号:X75448)的核苷酸同源性均为81%,经反复多次试验证实,利用总RNA为模板合成cDNA并进行PCR扩增检测GVB是准确、可靠的。     

扇叶铁线蕨叶片对岩溶环境的生态适应

地理环境的不同造就了植物不同的适生机制。本研究对岩溶区和非岩溶区的扇叶铁线蕨（Adiantum flabellulatum）的叶片进行了比较,结果表明,二者在显微结构和亚显微结构方面都存在明显区别。在显微结构方面：岩溶区生长的扇叶铁线蕨的叶片具有旱生植物叶片特点,即叶片为等面叶,叶肉细胞排列较为紧密以及叶片维管组织发达等：而非岩溶区生长的扇叶铁线蕨的叶片为异面叶,特点为叶肉细胞排列相对疏松,维管组织不发达。扫描电镜分析显示：非岩溶区扇叶铁线蕨叶片表面具有很多明显的凹槽状结构,而岩溶区扇叶铁线蕨的叶片与之有明显不同,其叶片表面特别是叶脉位置具有明显的刺状结构,超薄切片发现这些刺状膨大部分细胞内存在液泡结构,并且这些刺状结构在叶片抽真空的过程中变瘪,说明这些刺状结构可能具有储存水分的功能。岩溶区扇叶铁线蕨特有的显微和亚显微结构保证了该种植物在岩溶干旱环境中可以正常生长。     

葡萄去病毒和无毒苗试管快繁技术研究

1.葡萄病毒的脱除:(1)热处理脱毒:在38℃条件下,保持相对湿度60—70%,处理29个盆栽葡萄品种2-3个月,使100%的植株脱除了四种主要病毒病。(2)试管内热处理及茎尖剥离培养脱毒:将葡萄试管苗进行热处理并配合茎尖剥离培养或单用茎尖剥离培养,前者成活率30.5%,脱毒率100%;后者成活率73%,脱毒率94.7%。