禾本科植物超薄切片应注意的问题

在透射电镜的生物样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术,一般来说,植物样品的超薄切片比动物样品难度要大,而在植物材料中,禾本科植物材料的制样又特别困难,因为禾本科植物(如水稻、小麦、玉米、高梁、甘蔗等)质地坚硬,细胞壁角质化,并且充满硅质,它们对固定液的渗透具有不可忽视的障碍作用,按常规的生物样品制备方法常常失败或效果不佳。样品制备的好坏,很大程度上依赖于操作者的经验和操作技术,作者近几年来对禾本科植物叶片做了一些超薄切片工作,体会到要获得较理想的超薄切片,必须十分认真地对待制样过程中的每一操作步骤,任何环     

介绍一种超薄切片中细胞定位的薄层包埋方法

电子显微技术中,对研究材料中的特定组织或细胞的定位在超薄切片时是最困难的一步。曾提出的用还氧树脂厚切片重新包埋的方法以及类似的厚切片重新粘贴法在克服这一困难上有很好的效果。对于单细胞或分离的原生质体,以及花粉和萌发的花粉管等材料,电镜样品的制作常用离心进行材料的收集、固定、脱水和渗透等步骤,并按寻常的方法     

植物超薄切片制备技术

用电子显微镜(指透射式)来研究植物细胞的超微结构,必须把植物材料制成超薄切片,其厚度不能超过0.1微米,以0.05微米(500埃)以下更为适宜。这是由于电子束穿透能力弱和电镜分辨率高的特点所要求的。     

超薄切片用刀值得注意的几个问题

本文就超薄切片过程中玻璃刀的制作及使用玻璃刀和钻石刀切片时容易勿视的几个技术问题进行探讨,以期对提高超薄切片的质量有一定的帮助。     

低温电镜技术及其在植物（动物）材料研究中的应用

通过一些实例介绍了高压冷冻,冷冻置换和冷冻超薄切片等低温电镜样品制备技术,并且与传统方法对照,说明低温电镜技术的优越性,其中,发菜（Nostoc flagelliforme)营养细胞的冷冻超薄切片（未经化学固定,脱水）所显示的超微结构更客观地反映了生物样品的自然生理状态。此外,应用高压冷冻和冷冻置换的免疫标记电镜技术,首次对发菜营养细胞中的DNA进行定位,明确了核区的位置及范围。     

薄切片的放射自显影术

薄切片是指厚度为0．5～1μm的树脂类切片。文献中称它为厚切片（thicksection）或半薄切片（semithinsectio）,籍以与电镜观察用的薄切片（thinsection）区别。我国已习惯称电镜用的切片为超薄切片,因此,把这类切片称薄切片就能说明其比超薄切片厚,比普通石蜡切片薄的特性。用薄切片作放射自显影具有下列优点：（1）改善分辨力：放射自显影象的分辨力与样品的厚度成反比,薄切片的厚度低于普通石蜡切片,所以其分辨力高于用石蜡切片制作的放射自显影象的。（2）减少人工假象：用薄切片作放射自显影,不需去除包埋剂,因此,提供了平正…     

一种简便快速的超薄切片裸面载网法

电镜生物样品制作的质量,直接影响到对标本的观察及结果分析与判断。要获得既整洁,平坦又结构清晰的优质超薄切片,除标本的固定、包埋等一系列步骤必须严格操作外,超薄切片制作完成后的捞片载网也是一个十分重要的问题。为此,我们从实际工作中摸索出了一种超薄切片裸面铜网捞片法,将超薄切片直接载至经过特定处理的裸面铜网上。其处理的步骤是:首先将市售未经过处理的300目铜网(北京创业电镜铜网工艺社产品)入小称量瓶中,以双蒸馏水清洗2次,每次1～2分钟;继入用重铬酸钾配制的硫酸清洗液(取洗液1伤;水1份,释稀为1∶1)浸洗5—10秒钟,充分震荡直至铜网沉降在清洗液底部,迅速倾去清洗液。再用双蒸水洗3～5次,每次1分钟,彻底洗净清洗液用沪纸吸于水份,再浸入无水乙醇     

植物树脂半薄切片染色方法的改进

以双子叶植物棉花的幼根、幼茎、叶、胚珠和单子叶植物玉米茎为实验材料,制作树脂半薄切片,对样品染色方法等进行了改进,将蕃红-固绿染色、苏木精-伊红染色、氯化铁-苏木精染色方法系统应用于植物树脂半薄切片制备中,获得了结构完整、染色清晰的棉花各器官和玉米茎半薄切片,建立了一套适合于植物树脂半薄切片制作的染色方法。     

定量电子束显微分析中生物薄样品的质量损失

对多种生物薄样品和标样进行电子探针X射线能谱显微定量分析,分别以电子束轰击后样品的O Kα峰计数和介于4.2-6.2keV区间的连续X－射线计数变化监测质量损失,结果显示样品O Kα峰计数减少幅度大于连续X－射线计数减少幅度,在相同的分析条件下,各样品质量损失程度不相同（P＜0.05）。培养肝癌细胞冷冻干燥超薄切片、明胶冷冻干燥超薄切片、BSA薄膜、氨基塑料超薄切片、红细胞冷冻干燥超薄切片和卵黄高磷蛋白薄膜样品的质量损失分别为33％、28％、26％、18％、13％和13％,以上结果提示：以O Kα峰计数的减少监测样品的质量损失较敏感,在进行生物薄试样定量EPMA时应对各样品的质量损失进行相应校正。     

胶体金免疫电子显微技术用于病毒抗原的检测

本文报道了一种改良的胶体金免疫电镜技术:以低温包埋,常规超薄切片代替超薄冰冻切片,成功地显示了细胞内的病毒抗原定位。     

辣根过氧化物酶标记与样品后染色联用在微观脑联结组学中的应用

三维电子显微成像(volume electron microscopy)是微观尺度脑联结组学(micro-brain connectomics)研究的主要研究手段.自动卷带式连续超薄切片-收片系统(automated tape-collecting ultramicrotome,ATUM)及扫描电镜序列成像系统的联合应用,是三维电镜成像中一种重要的技术手段.该方法利用卷带式收集超薄切片,形成完整的样品切片库,进而在后续成像中形成样品三维电镜成像数据库.根据ATUM系统镜外切片-收片、保留样本切片库等特点,对相应的生物样品制备方法进行改进,包括树脂配方及树脂渗透方式改良,神经元细胞膜辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)稀疏化标记与样本切片库后染色联用——从而很大程度上减少样品切片的褶皱率,并使得在整体高衬度的样品图像库中高效地识别神经元身份成为可能,最终获得符合脑联结组学所需的高质量成像数据.     

一种简单快速植物组织冰冻切片方法

比较不同冷冻方法对植物细胞超微结构的影响,结果表明:直接包埋法处理的植物细胞超微结构保存较好,而液氮冷冻处理的植物细胞内膜系统损伤严重.建立了一种直接包埋冷冻和适当回温相结合的方法,不仅可以制作出植物细胞基本结构保存完整的组织切片,而且避免了使用冰冻保护剂的弊端.其操作程序是:样品固定→冰冻与包埋→适当回温→快速切片→展片→染色.此法制作的切片可进行不同的染色和组织细胞化学测定,具有操作简便,易于推广的特点.     

植物细胞骨架

细胞骨架是细胞生物学发展中较晚发现的一种新的细胞器.1963年Ledbetter和Porter以及Slautherback几乎同时分别在植物和动物细胞的超薄切片中发现微管[74,136],尔后又     

第11届国际生物奥林匹克竞赛(2000)实验试题

实验一植物形态,解剖和分类学 亲爱的参赛者,这个实验室包括两组独立的试题,你将可以从试题１或试题２的任何一组开始,３０ｍｉｎ后从一组试题转答另一组试题。 请你确认给你的在你桌子上的考卷与你的实验任务一致。 国家 姓名 编号 试题１．制作植物组织切片,鉴定组织类型,解释结构 材料：植物组织样品 设备：刀片染料载片和盖片显微镜 （１０×和４０×） １．制备叶片样品１的横切片,如果需要可使用泡沫塑料支持物切片（在泡沫塑料中切开叶片,从中可获得切片）。并制备水浸切片。观察组织,选择正确代号填在１ａ．和１ｂ．的空白…     

辣根过氧化物酶标记抗体在免疫定位上的应用 Ⅱ.肝细胞内乙型肝炎表面抗原的电子显微镜定位方法

本文介绍辣根过氧化物酶标记抗体对肝细胞内乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的免疫电镜定位方法。电镜样品制备,可采用酶标免疫显色组织切片的再包埋、或直接利用超薄切片进行酶标免疫显色定位。对实验中应注意的一些问题进行了讨论。在电子显微镜下初步观察了HBsAg 阳性肝细胞中HBsAg 的分布和形态,并发现在光学显微镜下,辣根过氧化物酶标免疫定位HBsAg 完全为阴性部位的肝细胞中,有的细胞胞浆内或扩大的内质网池内,尚可见到少量散在的HBsAg 与酶标抗体的沉积物,提示电镜观察有更好的灵敏性。     

透射电子显微镜(TEM)在孢粉学研究中的应用

透射电子显微镜作为常规的显微镜工具,已被广泛运用于观察研究生物组织超微构造,20世纪60年代开始在生物化石的研究中得到应用,特别是孢粉学,如大孢子、花粉、疑源类等的研究。通过对处理后的化石样品进行超薄切片,可观察到生物组织中保存下来的有机质壁及内含物的显微构造,对孢粉系统分类学及个体发育学的研究有重要的作用。即使是古生代的或更早期的生物样品也有一些保存下来的有价值的组织可供于超微构造的研究,只是样品在进行前期处理及超薄切片过程中会遇到一些技术问题。文章简要阐述这些具体技术问题。     

生物样品冷冻超薄切片技术简介

电子显微镜超薄切片技术的发展开拓了组织学和细胞学的显微和亚显微结构的研究。但由于常规超薄切片术采用强烈化学囿定,有机溶剂脱水和塑料包埋等步骤所带来的结构损伤和分子活性散失等缺点,人们在光学显微冷冻切片和常规超薄切片基础上,近年来发展了冷冻超薄切片制样技术。七十年代初期,商品冷冻超薄切片装置先后问世,进一步促进了这一技术的发展。     

LKBⅢ型超薄切片机故障检修二例

自动切片时故障的排除瑞典LKBⅢ型超薄切片机,其样品臂的动作是上下垂直运动的形式,在切削过程中,样品臂因受热而成线性膨胀。当样品臂因重力作用下降进行切片后,在返程上升时,退刀磁铁通电,使刀台产生一向下弯曲动作,于是刀向后退回30微米,这样样品臂才能无阻地升到切削冲程最高位置。当退刀磁铁断电,刀即恢复原位继续进行切片。因     

植物材料光学和电镜蛋白A-金胶体结合体标记技术

这里介绍一种可在光学显微镜薄切片和电子显微镜超薄切片上标记的技术。我们初步应用这一技术来做燕麦球蛋白的定位,结果是成功的(图版图1,2)。现将操作方法简述如下: 一、样品制备 1.把切成2—3微米~3的新鲜材料,用磷酸缓冲液(pH 7.1)配制的3—4％甲醛(加2.5％蔗糖),在室温固定2小时; 2.用磷酸缓冲液清洗两次,每次30分;     

植物冰冻切片条件的优化及其与石蜡切片在组织化学应用中的比较

冰冻切片是植物组织学研究中一项重要的实验技术,冷冻温度和冷冻时间是决定切片质量的关键因素。通过比较15种冰冻切片条件,得出植物组织直接冰冻切片较适宜的冷箱温度、冷台温度和冷冻时间。同时,通过对5种植物的不同组织进行组织化学染色,比较了新鲜材料直接冰冻切片与常规石蜡切片在不同化学成分鉴定上的异同及各自的适用范围。结果表明,对于多糖、蛋白质和角质,两种切片方法的鉴定结果比较一致,但对于脂肪只能采用冰冻切片技术。研究结果对植物组织学实验和研究方法的改进具有一定的参考价值。