琼脂搭片法观察链霉菌菌丝体形态

我们在进行链霉菌的分类鉴定工作中,用琼脂搭片法观察菌丝体形态,效果较好。现简单介绍如下。选择皿底平坦的直径为9厘米的培养皿,灭菌后注入琼脂培养基5—6毫升,使其凝固成厚度约为0.7毫米的薄层,用无菌小刀切成约0.5×1.0厘米的琼脂薄片(如室温较高,应将培养皿置冰箱冷却后再切)。另准备好约装20毫     

实验8 质粒DNA的提取

一、氯化铯超速离心提取法 1.在LB培养基(10克蛋白胨,5克酵母膏,10克氯化钠,15克琼脂粉,溶解于水后,用1N NaOH调节pH至中性,加水至1,000毫升,高压蒸汽灭菌)上划线接种含有待抽提的质粒的细菌。37℃培养过夜。如果质粒上带有抗性基因,则在培养基内加入相应的抗菌素,例如20微克氨苄青霉素/毫升,12.5—15微克四环素/毫升。 2.挑出单菌落接种在10毫升LB培养液(除不加琼脂粉外,成份与LB培养液相同)中,37℃培养过夜。     

介绍一种培养衣藻的新方法

最近,我用琼脂培养基培养衣藻效果很好,其配方如下:硝酸钾1克、氯化钾0.25克、硫酸镁0.25克、磷酸氢二钾0.25克、1％的硫酸亚铁0.2毫升、水1000毫升。以上各盐类溶于1000毫升水中,再加10克琼脂,加热溶解后,倒入试管中(占1/4)高压(1.5kg/cm)灭菌40分钟,取出摆成斜面,自然冷却后在无菌条件下,用接种环将衣藻接种在斜     

高压灭菌前后培养基pH值和渗透压的变化

配制马铃薯和N_6培养基,蔗糖浓度为9％,pH值为3—9(间隔0.5),渗透压分别为315mO_s(马铃薯培养基)和335mOs(N_6培养基)。经高压灭菌(120℃.1.5kg/cm~2·18分钟)后分别测量了各培养基的pH值和渗透压。高压灭菌前pH值低于4.5的培养基,其pH值在高压灭菌过程中升高;pH值越低,这种升高的趋势越明显。相反,高压灭菌前pH值高于5的     

实验14 M13克隆和DNA顺序分析

一、制备感受态受体菌 1.配制M13(单链DNA噬菌体)宿主菌E.coliK12 JM103的基本琼脂培养基。JM103的基因型是[△(lac pro)thi,str A,supE,end A,sbc B15,hsdR4,F′tra D36,pro AB,lac I~qz M15]。基本琼脂培养基的配制如下: (1)2×Bacto琼脂:15克琼脂粉溶于450毫升水,高压蒸汽灭菌。 (2)2×盐溶液:K_2HPO_4 10.5克,KH_2PO_4 4.5     

高压蒸汽灭菌对麦康凯琼脂培养基质量的影响

目的探讨高压蒸汽灭菌对麦康凯琼脂培养基主要质量指标(p H、性能)的影响。方法配制p H为6.80、7.00、7.10、7.20、7.30、7.40、7.50、7.60、7.70、7.80的麦康凯琼脂培养基,经高压蒸汽灭菌后进行p H测定,并将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、鼠伤寒沙门菌和粪肠球菌接种于麦康凯琼脂培养基上,37℃培养24 h,观察不同p H对细菌生长的影响。结果高压蒸汽灭菌后麦康凯琼脂培养基p H降低0.30~0.50。p H为6.78~7.28时,大肠埃希菌生长率≥0.5;p H为6.93~7.39时,鼠伤寒沙门菌生长率≥0.5;不同p H的麦康凯琼脂培养基上金黄色葡萄球菌及粪肠球菌的生长指数均为0。结论高压蒸汽灭菌可影响麦康凯琼脂培养基的p H及性能。     

遗传转化选择培养基的改良

用根癌农杆菌（Agrobacteriumtumefacirens）的Ti质粒进行植物基因转移的遗传操作过程中,必须配制含一定浓度卡那霉素（Km）和校等青霉素（Cb）的NBK和MS选择培养基。Km是遗传转化选择剂,Cb是剩余工程菌生长抑制剂k’,两者均不耐高温。高压灭菌后只能待琼脂培养基自然冷却到45”C左右（盛培养基的容器不烫手）时再另加入并摇匀,趁培养基尚未凝固这一段时间内及时分装到50～100ml的三角瓶中。显然,这在实际操作上较为麻烦：（回）培养基高压灭菌后必须随时观察它的温度变化;（2）安排稍有不周就会耽误其它事情;（3）时间太紧迫,…     

植物淀粉酶的作用实验

种子萌发时,淀粉酶的产生,可用碘色反应进行定性鉴定.具体步骤如下: (一)实验材料的准备 1.琼脂培养基 10克可溶性淀粉和10克琼脂加1升蒸馏水,搅拌加热熔化后,慢慢地倒入灭过菌的培养皿中,铺成厚2—3毫米的薄层.琼脂凝固后备用。 2.萌发种子取大麦、小麦、水稻之类的种子,先用清水冲洗干净,再在5—7％漂白粉溶液中浸泡约10分钟进行灭菌.用清水冲洗2—3次,再将种子排放在垫有吸足水的脱脂棉的培养皿中(如图).使之萌发,一日后即可使用。 3.碘溶液取碘1.2克和碘化钾2.5克于烧     

蝴蝶兰花梗腋芽的离体培养

植物名称:蝴蝶兰(Phalanopsis hyorid) 材料类别:花梗腋芽及花序顶端。培养条件:蝴蝶兰开花约一个月后,剪取其花梗顶端及各个花梗腋芽,用漂粉精溶液分两级消毒后,切成2—3厘米长的切段(每段带一胶芽),基部向下插于培养基上。诱导花梗腋芽启动的培养基(A): Hyponex(7—6—9)3克蔗糖 35克胰蛋白胨 2克琼脂 15克水 1000毫升 PH=5.0     

用印片法制青霉和曲霉的永久封片

(一)材料和方法 1.菌种:青霉(Penicillium chrysogenum),黑曲霉(Aspergillus niger) 2.培养:将青霉和黑曲霉斜面制成悬液,吸0.1ml于马铃薯培养基(马铃薯200克,蔗糖20克,琼脂粉11克,水1000毫升,15磅/吋~2灭菌30分钟)平板上涂布,于28℃培养2天。 3.制片:取两块干净载玻片,在其中一块上涂一层薄胶层(胶为光学树脂),然后用解剖针在青霉或曲霉平板上挖一小块带菌琼脂(约0.5厘米~2),将琼脂块放在薄胶层上(培养面朝下),用另一块载玻片在琼脂块上轻轻按压,然后将琼脂块小心弃去。将印有菌迹的载玻片     

淀粉可以做培养基的凝固剂

在配制固体培养基时,通常用琼脂做凝固剂。近来我们用普通淀粉做凝固剂,进行了根霉、曲霉、青霉和蕨的原叶体的多次培养实验,效果也很好。一、根霉、曲霉和青霉的对比实验:把马铃薯去皮后切成小块,取20克马铃薯小块放入100毫升水中,加热煮沸十分钟,用两层纱布过滤后在滤液中补足水到100毫升,加2克白糖,用     

亚碲酸钾棉棒使用结果初步观察

1960年秋,在某农村有白喉流行,我们使用亚碲酸钾棉棒进行了白喉杆菌的培养,调查了现症病人及带菌者,证明有使用价值,现介绍如下: 亚碲酸钾鸡蛋棉捧成分为鸡蛋3份,生理盐水1份,2%亚碲酸钾。制备是以无菌鸡蛋浸泡棉棒,高压灭菌后,浸沾无菌2%亚碲酸钾保存备用。如先加亚碲酸钾然后灭菌,则棉捧变黑,有碍观察结果。亚碲酸钾鸡蛋平板成分是250毫升普通琼脂培养基,加2%亚碲酸钾溶液7.5毫升及0.5%膀胱氨基酸7.5毫升,待琼脂稍凉,加入打匀无菌的鲜鸡蛋1个摇匀,倾倒平板备用。以亚碲酸钾鸡蛋棉捧采取标本。     

金针菇的人工栽培

金针菇((Collybia velutipes)又名冬菇、构菌、朴蕈等。属伞菌目、口蘑科。口味鲜美,营养丰富,特别是人体所必需的赖氨酸和精氨酸的含量比其它食用菌高数倍。另外,它还有抑癌和抗癌的作用。 (一) 培养基和培养料的配制 1.马铃薯培养基:去皮马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,加水至1000毫升。 2.棉籽壳培养料:棉籽壳88％,麸皮10％,葡萄糖     

一种霉菌放线菌悬滴标本的制作方法

青霉(Penicillium)、曲霉(Aspergillum)和放线菌(Actinomycetes)是中学植物实验课必需的实验材料。本人经过摸索,为中学制作出霉菌、放线菌活体悬滴标本和永久装片,很受中学老师们的欢迎,在中学简陋条件下很易制作,效果极佳,现介绍如下。 1.悬滴活标本的制作方法 (1)倒平板 100毫升水中加2克琼脂,煮开使琼脂溶化,待凉至40℃左右(不烫手为度),将该液态琼脂培养基倒入直径90毫米的培养皿中,每皿倒培养基15—20毫升左右,约2—3毫米厚。待琼脂凝固(5—10分钟左右)     

液体培养灵芝菌

灵芝菌的液体培养,省时省料,生长周期短,发酵产物与子实体有同等的药效。同时,对菌丝的发育过程能进行肉眼观察,也能锻练学生的操作能力。下面介绍一般中学都能搞的简易方法。培养基液的配制花生饼粉20克、蔗糖10克、淘米水加至1000毫升。如果没有花生饼粉,可用麦麸或玉米粉代替,只是效果稍差。搅匀后装入500     

青霉素酰化酶产生菌的筛选和大肠杆菌AS 1.76产酶条件的研究

为筛选较优的产青霉素酰化酶的菌种,我们从9个属的232株纽菌中选出了19株产青霉素酰化酶的大肠杆菌,其中,AS 1．76和E 110为最好。还对大肠杆菌AS 1.76的产酶条件进行了研究。结果表明,最适的培养基成分是(％)：蛋白胨l,苯乙酸0．2,玉米浆0．3,氯化钠0．5;在250毫升的三角瓶中装30毫升培养基时,通气量正合适：培养基的初始pH以7.0为佳;培养时间15小时。在未加玉米浆的培养基中,少量的Fe2+(5馓克／毫升)对酶形成有刺激作用,过量的Fe2+(大于10教克／毫升)是不利的;在培养基中添加0．3％的玉米浆能降低Fe2+对酶形成毒害作用。     

培养基灭菌方式对细菌分离效率的影响

自然界蕴含大量未/难培养微生物,分离这些微生物对理论研究和资源开发具有重要意义。本研究使用高压灭菌和过滤除菌方式制备培养基,采用稀释涂布方法,从红树林灰泥样品中分离获得123株细菌,通过16S rRNA基因序列分析对其进行鉴定,进而探究培养基灭菌方式对细菌分离效果的影响。结果表明：过滤除菌培养基生长的单菌落数目（339±82）个显著多于高压灭菌培养基生长的单菌落数目（179±65）个;两种培养基分离细菌的群落结构在门、科和属分类水平上总体相似,但优势类群的数目和少数类群存在差异;过滤除菌培养基分离细菌的Shannon Wiener’s指数、均匀度、新种率、基因多样性均高于高压灭菌培养基,而其与近缘模式菌株相似度的平均值和中位数则低于高压灭菌培养基。因此,过滤除菌培养基分离获得细菌的多样性、均匀性和新颖性均高于高压灭菌培养基。本研究首次探究培养基灭菌方式对细菌分离效果的影响,具有更高分离效率的过滤除菌培养基为未/难培养微生物菌株资源获取提供了借鉴。     

“遗传学和进化”实验

实验4 单基因杂种杂交 (一)实验器材 1 培养管的真实遗传野生型雄果蝇;1培养管的残翅处女雌;2培养管的培养基(每管贴有一空白标签);孵化箱(调至25℃);其它器材见实验3。注释: 下列配料可为100个培养管提供足够的培养基:120克玉米粉;20克琼脂;20克黄糖;80克红糖;20克酵母;3克尼巴精(nipagin,一种霉菌抑制剂),1升凉水。配制时用约20毫升凉水,使玉米粉呈糊状。把琼脂放入剩余的凉水中加文火。逐渐加入糊状玉米、黄糖和红糖,充分搅拌混合液。沸     

油梨童期茎切段试管培养发根的生物鉴定

材料与方法 种子的发芽 将去皮种子用含有0.5％次氯酸钠(“Purex”,用水稀释10倍)和0.1％吐温20乳化剂的溶液浸泡灭菌。将子叶分开,切下带有1—2厘米厚的子叶的胚轴(带有胚根和胚芽),移栽入营养管内。发芽培养基含有MS培养基的盐分和蔗糖3000(单位:毫克/升,下同)、肌醇100、盐酸硫胺素0.4、活性炭1000和“TC”琼脂8000。在加入琼脂前,pH调整到5.7。每个容积为25×150毫米的试管加入营养琼脂25毫升。试管用聚丙烯罩罩口,以1.05公斤/厘米~2压力消毒15分钟。每个培养管放入一     

烟草叶肉原生质体悬滴培养成再生植株

普通烟草(Nicotiana tabacum L.)“革新一号”和“柳叶”的叶肉原生质体悬浮液,在6厘米直径的培养皿皿盖反面滴7—12滴,每滴5—10微升,含200—300个原生质体。皿底内加3毫升0.4M甘露醇溶液以保持湿度。然后置于恒温中培养。经观察叶肉原生质体在NT培养液中,培养7天后发生第1次分裂,12天后形成细胞团,20几天后进一步分裂,形成肉眼可见的愈伤组织。以后将它转移到MS培养基,使其生长到一定大小的愈伤组织,再转移到诱导分化茎叶、根的培养基,获得完整的再生植株。