无菌马尾松种子超低温保存技术研究

该研究利用液氮将不同含水量的无菌马尾松种子(27.4%、24.6%、22.7%、16.8%、15.8%、10.7%、7.5%、6.1%、4.8%、3.2%)进行超低温保存。结果表明:(1)在3.2%～6.1%含水量范围内,经液氮冷冻保存后的发芽率随着含水量升高而逐渐升高,在含水量6.1%时,发芽率达到最大值(91.33%);当含水量大于6.1%时,发芽率逐渐下降,尤其是当含水量大于15.8%时,发芽率迅速下降;在3.2%～7.5%含水量范围内冻存后发芽率在80%以上。(2)冷冻、化冻方式影响超低温保存效果。种子无需低温预冷,直接投入液氮保存(快速冷冻)效果最好;室温空气化冻(缓慢化冻)较42℃水浴化冻发芽率高,且后者容易发生种皮炸裂现象。(3)种皮对马尾松种子超低温保存过程起到保护作用,使其免受机械损伤,去掉外种皮的种子冻存后发芽率显著下降,且容易出现形态不正常的幼苗。(4)超低温保存对马尾松种子萌发具有一定"刺激"作用,在最适含水量6.1%时,经超低温保存后种子的发芽率显著大于对照种子。总之,含水量、冷冻方法、化冻方法、种皮结构显著影响超低温保存效果,马尾松种子超低温保存的最优方法是将种子含水量控制在6.1%,直接投入液氮快速冷冻后室温空气缓慢化冻,冻后发芽率可在90%以上。马尾松种子超低温保存技术体系的建立,为其种质资源的长期保存提供了技术支持。     

八棱海棠种子超低温保存中含水量对糖代谢的影响

含水量是影响种子超低温保存效果的关键因素，而其作用机制尚不完全清楚。为探讨含水量对种子超低温保存生活力的影响途径，该研究以八棱海棠种子为材料，通过硅胶干燥法获得不同含水量的种子，测定超低温保存后种子生活力、糖含量及相关酶指标的变化并分析相关性。结果表明：(1)超低温保存15 d后，不同含水量种子生活力不同，随着种子含水量的降低，种子生活力呈现先升高后降低的趋势，含水量为9.02%的八棱海棠种子生活力最高，为53.33%;超低温保存120 d后，种子生活力随着含水量下降一直升高，含水量为6.40%生活力最高，为27.78%。这表明八棱海棠种子含水量对超低温保存后的生活力有明显影响，但受液氮保存时间影响，随着液氮保存时间的延长，最适含水量降低。(2)相关分析显示，超低温保存后种子含水量与生活力呈极显著负相关(r=-0.82);与果糖和蔗糖含量、酸性转化酶、果糖激酶呈显著负相关，而种子萌发率与这些指标呈显著正相关。这表明种子含水量通过影响酸性转化酶活性而影响蔗糖和果糖含量，进而影响蔗糖代谢，响应低温和脱水胁迫，最终导致生活力差异。种子生活力还受到介导果糖激酶的果糖代谢影响。此外，海藻糖也是种...     

五种豆科药用植物种子超低温保存技术研究

以豆科药用植物降香檀、决明、含羞草、灰毛豆和猪屎豆的成熟种子为材料,探讨含水量对其发芽率的影响,以及超低温冷冻方式对种子超低温保存的影响。结果表明,降香檀、决明、猪屎豆和灰毛豆种子发芽率均随含水量的下降而从80%左右降至20%以下,而含羞草种子含水量低于10%时,其发芽率仍在75%以上。经超低温冷冻后,五种豆科药用植物种子发芽率较对照组均有显著差异;适宜的含水量下,种子经过超低温冷冻后其发芽率与对照组差异不显著,甚至高于对照组。三种冷冻方法中,玻璃化冷冻法更适合降香檀种子的超低温保存,缓慢冷冻法更适合猪屎豆种子的超低温保存,快速冷冻法适合于决明种子、灰毛豆种子和含羞草种子的超低温保存。由此可知,液氮超低温冷冻法保存降香檀等五种豆科药用植物种子是可行的。     

桃花粉低温和超低温保存方法比较研究

桃(Prunus persica(L.)Batsch)是我国重要的无性繁殖作物种质资源,目前主要保存于3个国家无性繁殖作物种质圃。随着以茎尖、花粉、休眠芽为保存载体的超低温保存技术的发展,超低温保存已成为无性繁殖作物重要备份保存方式。本研究以15份桃种质花粉为研究对象,开展含水量、回湿处理和保存温度(4℃低温保存和液氮超低温保存)对保存后花粉离体萌发率的影响研究。研究结果:明确了桃种质花粉超低温保存的含水量;揭示了回湿处理对部分桃种质花粉超低温保存产生显著影响;超低温保存后花粉离体萌发率最高可达83%;4℃低温保存和超低温保存比较研究结果表明,超低温保存4年后14份桃种质花粉离体萌发率仍可保持30%以上,11份桃种质花粉离体萌发率与保存前花粉离体萌发率相比无显著变化甚至显著提高,而4℃低温保存的花粉离体萌发率降至0。该研究为国家种质库建立花粉规模化超低温保存提供技术支撑。     

顽拗性竹柏种子的贮藏特性

文章对竹柏(Podocarpus nagi)种子的脱水耐性和贮藏特性进行了研究,结果表明:竹柏种子成熟时初始含水量约为(35±0.7)%,种子对脱水敏感,其最低安全含水量约为(16.86±0.73)%,具有顽拗性种子的典型特征;湿藏和半干藏都可以作为短期保存竹柏种子的方法,且以4℃保存优于15℃保存,但不管种子含水量如何,零下低温保存对竹柏种子都是致命的;半干藏法保存实验中,未进行脱水处理的种子(对照)在4℃贮藏6个月,种子萌发率没有发生明显下降,但贮藏期延长到9个月时,临界含水量的种子萌发力保存最高;不管贮藏介质的含水量高低,也无论贮藏在4℃还是15℃,湿藏种子在9个月的贮藏期内萌发率均没有明显的降低,但当贮藏到12个月时,15℃湿藏种子的萌发率显著高于4℃贮藏的种子,但15℃湿藏的种子在贮藏到3个月时即发现种子在贮藏期间萌发,且随着贮藏介质含水量的升高和贮藏期的延长,萌发的种子增多;竹柏的离体胚经过2 h硅胶快速脱水至含水量7%后再冷冻即可获得90%以上的融后存活率,且超低温保存1年的离体胚解冻后,与只保存1周的存活率没有明显差异,表明超低温长期保存竹柏种子是可行的。本研究可以为进一步探究顽拗性种子的短期贮藏和长期保存提供理论基础和基础资料。     

顽拗性竹柏种子的贮藏特性?

文章对竹柏( Podocarpus nagi)种子的脱水耐性和贮藏特性进行了研究,结果表明：竹柏种子成熟时初始含水量约为(35±0?7)％,种子对脱水敏感,其最低安全含水量约为(16?86±0?73)％,具有顽拗性种子的典型特征;湿藏和半干藏都可以作为短期保存竹柏种子的方法,且以4℃保存优于15℃保存,但不管种子含水量如何,零下低温保存对竹柏种子都是致命的;半干藏法保存实验中,未进行脱水处理的种子(对照)在4℃贮藏6个月,种子萌发率没有发生明显下降,但贮藏期延长到9个月时,临界含水量的种子萌发力保存最高;不管贮藏介质的含水量高低,也无论贮藏在4℃还是15℃,湿藏种子在9个月的贮藏期内萌发率均没有明显的降低,但当贮藏到12个月时,15℃湿藏种子的萌发率显著高于4℃贮藏的种子,但15℃湿藏的种子在贮藏到3个月时即发现种子在贮藏期间萌发,且随着贮藏介质含水量的升高和贮藏期的延长,萌发的种子增多;竹柏的离体胚经过2h硅胶快速脱水至含水量7％后再冷冻即可获得90％以上的融后存活率,且超低温保存1年的离体胚解冻后,与只保存1周的存活率没有明显差异,表明超低温长期保存竹柏种子是可行的。本研究可以为进一步探究顽拗性种子的短期贮藏和长期保存提供理论基础和基础资料。     

DMSO浓度及降温速率对组织工程化真皮超低温保存效果的影响

组织工程化真皮的超低温保存技术是皮肤组织工程的重要组成部分,对皮肤组织库的建立有重要意义。低温保存与低温保护剂的种类、浓度、降温复温程序及低温保护剂的添加与去除方式有着密切的关系。实验目的：研究DMSO浓度及降温速率对组织工程化真皮超低温保存效果的影响。实验方法：以培养一定时间的组织工程化真皮为试材,以不同浓度的DMSO溶液为低温保护液,以不同的降温速率降温保存,以四唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率,辅以光学显微镜和扫描电镜观察分析。实验表明：降温速率为1℃／min,DMSO浓度为1．4mol／L时可获得在实验范围内较高的细胞存活率,为75％,超低温保存后的扫描电镜照片表明其细胞形态最为接近新鲜状态,细胞与支架材料的黏附也很紧密,这与细胞存活率的研究结果有很好的相关性。     

玻璃化法超低温保存对大叶藻种子活力的影响

通过设置玻璃化法超低温保存的3个关键要素,即冰冻保护液处理、玻璃化溶液脱水时间和冷冻处理,研究了玻璃化法超低温保存对大叶藻种子活力的影响.结果表明:冰冻保护液处理和玻璃化溶液脱水时间对大叶藻种子活力无显著影响;冷冻处理组种子活力显著低于对照组,而冰冻保护液和玻璃化脱水处理对冷冻后种子活力的影响不显著,表明冰冻保护液和玻璃化溶液未对种子起到明显的保护作用;未冰冻保护液处理组玻璃化溶液脱水4h时种子活力显著低于其他脱水时间,而冰冻保护液处理组脱水4h时与其他脱水时间无明显不同,表明较长时间的玻璃化溶液脱水处理需使用冰冻保护液进行预处理.研究结果为超低温保存大叶藻种子提供了参考.     

不同脱水速率对木奶果种子脱水敏感性及抗氧化酶活性的影响

研究了脱水速率对木奶果种子脱水敏感性和抗氧化酶活性的影响。木奶果种子初始含水量高达1.72gH2O·g^-1DW,萌发率为86.67%。含水量降至0.90gH2O·g^-1DW左右时,慢速脱水种子的萌发率为97.78%,而快速脱水的种子萌发率仅为64.44%。快速脱水至含水量为0.76gH2O·g^-1DW时萌发率为21.67%,而慢速脱水至0.68gH2O·g^-1DW时,萌发率仍高达55.56%。确定了木奶果种子是对慢速脱水耐受性更高的顽拗性种子。在种子脱水过程中,相对电解质渗透速率和脂质过氧化产物（TBARs）都呈升高趋势,但慢速脱水后的种子,其TBARs升高的速率较快速脱水的慢。快速脱水的种子中超氧化岐化酶（SOD）、脱氢抗坏血酸还原酶（DHAR）和抗坏血酸过氧化物酶（APX）的活性较慢速脱水的高,而过氧化氢酶（CAT）活性较慢速脱水的低,未检测出谷胱甘肽还原酶（GR）的活性。这些结果表明,在木奶果种子脱水耐性获得过程中过氧化氢酶比其他抗氧化酶作用更大。     

辽东栎种子的顽拗性——脱水和低温敏感性

该文采用硅胶(快速脱水)和35℃电子恒温干燥箱中脱水(缓慢脱水)、冷藏(4℃)和冻藏(-4℃)的方法,研究了辽东栎种子的脱水和低温敏感性及其对种子萌发的影响。结果表明:辽东栎种子成熟散落时具有较高的含水量(96.0%)和萌发率(78.9%),无论是快速脱水还是缓慢脱水,萌发率、萌发速率、萌发指数和活力指数均随着脱水时间的延长和含水量的降低呈现减小的趋势,至脱水96 h后(快速和缓慢脱水种子含水量分别为66.0%和69.8%),种子全部失去活力。辽东栎种子活力与含水量呈显著的正相关关系,但轻度脱水可促进种子萌发,快速脱水种子比缓慢脱水种子具有更高的脱水耐性。辽东栎种子不能耐受低温贮藏,萌发率、萌发速率、萌发指数和活力指数在4℃下冷藏30 d或-4℃下冻藏6 h后均显著降低,冷藏90 d或冻藏48 h后种子全部丧失活力。     

矮沙冬青种子特性和萌发影响因素的研究

 对矮沙冬青(Ammopiptanthus nanus)种子的特性和萌发影响因素进行了初步研究,结果表明：种子不易传播;虫蛀率高,室温贮藏60 d的种子虫害率为38%;易形成硬实,含水量为7.68%的种子在30 ℃温水中浸泡90 h,只有33.33%能吸水膨胀。种子萌发时不需光,在15～30 ℃和室温（18～32 ℃）条件下,经9 d的萌发,发芽率均可达80%以上,30℃时萌发最快;在1～2 cm深的沙壤中,种子出苗率可达75%以上,超过3 cm显著降低,超过6 cm则低于20%;种子在沙壤中萌发时,沙壤的适宜湿度为19.35%～28.75%,高于32.43%或低于3.85%,很少有种子萌发;含水量分别为19.36%、10.64% 和7.68%的种子发芽率无显著差异,在-10 ℃和5 ℃下贮藏7个月,发芽率也无显著降低,但在室温和35 ℃下贮藏7个月则显著下降,发芽率下降的速度与种子本身的含水量和贮藏温度正相关;在湿度分别为7.41%、13.79%和28.57%的沙壤中播种育苗,幼苗死亡率高达77.49%、81.25%和89.49%,即使用三唑酮拌种,死亡率亦高达50.27%、69.53%和76.03%,幼苗死亡率与沙壤湿度正相关。     

红皮糙果茶种子生活力测定与发芽试验

选取饱满有光泽的红皮糙果茶Camellia crapnelliana种子,进行种子贮存生活力测定、种子发芽试验及种皮解剖结构观察等研究,就种子繁殖探讨其濒危原因。结果表明,有利于保持种子生活力的贮存方式为：4 ℃贮存>常温贮存>－10 ℃贮存;种子发芽试验中,采用不同浓度赤霉素(GA₃)、吲哚丁酸(IBA)和不同温度温水处理,种子发芽率均不高,最高为40%;不同因素对种子发芽的影响不同,种子发芽最佳处理为800 mg·L^-1GA₃浸泡6 h;种皮解剖结构观察到红皮糙果茶种皮坚硬,由栓化壁和骨状石细胞组成,内、外部石细胞垂直交错排列,这可能是造成种子萌发困难的机械阻碍原因。     

Developmental Changes in Relation to Desiccation Tolerance of Archontophoenix alexandrae (Palmae) Seeds

Germination of Archontophoenix alexandrae seeds and embryos were studied under gradient water content treatments throughout the seed development phases of maturation in 2005 to investigate seed desiccation tolerance and storage characteristics. During the maturation process, seed water content decreased gradually from55 DAF (days after flowering) to 70 DAF, and seeds reached the maximum dry-weight at 90 DAF. Seed germinability appeared after 60 DAF. Seeds germinated with a temperature range from15℃- 40℃ under alternating photoperiod (14 h light, 10 h dark, 12μmol m^{- 2}s ^{- 1} ), while the best germination percentage was obtained between 30℃- 35℃. A maximum germination capacity reached at 70 DAF. However, seed germination was greatly inhibited by light. Desiccation tolerance of seeds and embryos increasedgradually from 55 DAF to 90 DAF and reached the maximum at 90 DAF with a semilethal water content of 0.18 g/g ( seed) and 0.3 g/g ( embryo) respectively. Rapid dehydration maintained higher seed germination percentage than thatof slow dehydration when drying to the same water content. Seeds with without water content treatments failed to germinate after 1 month storage under - 18℃, whereas appropriate desiccation treatment prolonged seed longevity under 4℃, 10℃ and 15℃ storage temperatures. It revealed obviously the recalcitrant characteristics of Archontophoenix alexandrae seeds torage behaviour which are tolerant toward neither deep desiccation nor low temperatures.     

理化因子对龙血树柴胡种子萌发的影响

本研究以龙血树柴胡（Bupleurum dracaenoides Huan C.Wang,Z.R.He&H.Sun）的种子为材料,采用不同温度、不同浓度赤霉素、不同化学试剂以及紫外线照射和微波辐射等方式处理后,统计其发芽率、发芽势、发芽指数和发芽时间等指标。结果表明：龙血树柴胡种子萌发最适温度为20℃;100 mg/L的GA₃、0.5％的KMnO₄和3％的H₂O₂处理均能促进其种子萌发,但不能使种子萌发和出苗时间提前;25 s微波辐射处理可大幅提高种子发芽率;紫外线照射处理种子0.5 h,萌发效果最佳,但随照射时间的延长对种子萌发则有不同程度的抑制。     

外源水杨酸对总状绿绒蒿种子萌发及生理特性的影响

以总状绿绒蒿（Meconopsis racemosa Maxim.）为实验材料,通过不同浓度水杨酸（SA）浸种处理,研究了SA在不同温度条件下对总状绿绒蒿种子萌发质量和相关生理特性的影响。结果表明,在5~30℃条件下,对总状绿绒蒿种子萌发都有不同程度影响,但在15~25℃条件下,萌发效果比较显著（P<0.05）,其中20℃萌发效果极为显著（P<0.01）;0.1~1.0 mmol·L^-1 SA浸种预处理明显促进了总状绿绒蒿种子的萌发,其萌发指数、发芽势、萌发率在0.1~0.7 mmol·L^-1 SA范围内呈显著增长趋势,其中0.7 mmol·L^-1 SA处理效果极为显著（P<0.01）;（3） SA浸种后总状绿绒蒿种子内可溶性蛋白质和脯氨酸含量的变化同种子的萌发和生长呈相似趋势,用0.7 mmol·L^-1 SA处理后,种子内可溶性蛋白质和脯氨酸的含量达到最高。通过SA浸种可以提高总状绿绒蒿种子的萌发率;并且SA在高温和低温条件下对其萌发有一定的缓解作用。     

福建厦门几种乡土香化植物的人工繁殖试验

选取4种观赏芳香植物进行人工繁殖试验以提高繁殖效率。播种试验中,深山含笑种子以50 ℃ GA3 300 mg·L^-1溶液人工催芽效果最好,发芽率、发芽势分别比去皮种子增加22.7%和17.3%;单叶蔓荆种子以50 ℃ GA3 1.0 g·L^-1溶液浸泡催芽效果最好,发芽率、发芽势分别比对照增加46.7%和25.4%。以植物生长调节剂预处理扦插枝条,栀子插穗用NAA 100 mg·L^-1 + IBA 100 mg·L^-1预处理,生根率、平均生根数、成活率最高,其生根率和成活率分别比对照增加18.7%和15.8%,平均生根数比对照提高58.9%;络石插穗用NAA 200 mg·L^-1＋IBA 200 mg·L^-1 预处理的生根效果最好,生根率、成活率分别比对照增加24.5%和19.1%,平均生根数比对照提高66.7%。     

乡土树种茶梨种子萌发特性及其对人工繁育的启示

本试验研究了中国南方优良的乡土树种茶梨(Anneslea fragrans)种子在假种皮有无、不同脱水水平、PEG渗透胁迫和不同温度、光照条件下的萌发特性.结果表明:假种皮的存在抑制了茶梨种子的正常萌发;新鲜种子含水量较高(65.6%),脱水对于种子萌发特征具有显著影响,随着在干燥剂硅胶中脱水时间的增加,种子萌发率和发芽势持续降低,在经过48 h的持续脱水后种子完全丧失萌发能力,表明茶梨种子属于顽拗性种子;种子萌发对PEG渗透胁迫较敏感,其萌发率和发芽势随着PEG胁迫浓度的增加而降低;茶梨种子萌发对光照并不敏感,其萌发的最适温度范围是20℃～25℃,高温会抑制种子萌发.基于种子萌发对不同生态因子的响应,提出了该物种人工繁育的合理建议.

Abstract：

This paper studied the seed germination characteristics of native species Anneslea fra-grans in Southern China under the conditions of aril removal, dehydration, PEG osmotic stress, and different light and temperature. Aril removal benefited the seed germination of A. fragrans. Fresh-harvested seeds had higher moisture content (65.6%), and dehydration gave significant impact on their germination. The germination rate decreased with increasing dehydration dura-tion, and the seed viability was completely lost after 48 h continuous dehydration. Soaking in 5% -30% PEG solution for 24 h decreased the seed germination rate significantly, indicating that A. fragrans seed germination was sensitive to osmotic stress. Light had little effects on the seed germination. The optimal temperature range for the seed germination was 20 ℃～25℃, while high temperature inhibited the seed germination. Based on the responses of the seed germination to the test factors, some suggestions were made on the artificial propagation of A. fragrans.     

不同天然居群小檗种子萌发障碍因子研究

以西天山野果林霍城居群、新源居群和特克斯居群黑果小檗以及特克斯居群红果小檗种子为试验材料,研究了4组野生小檗种子生物学特性、吸水特性以及去种皮、低温层积和不同浓度GA₃处理对小檗种子休眠与萌发特性的影响,结果表明：（1）4组野生小檗种子的吸水率均表现出逐渐增加的趋势,黑果小檗种子与红果小檗种子吸水率差异不明显,其种皮透水透气性相似;（2）霍城居群、新源居群和特克斯居群黑果小檗种子的种皮对萌发存在强烈的抑制作用;而新源居群红果小檗种子的种皮抑制作用不明显;（3）4℃低温层积处理对4组野生小檗种子萌发影响很大,随层积时间的增加小檗种子发芽率均逐渐提高,3组黑果小檗种子层积90 d时,休眠基本被解除;红果小檗种子层积30 d时,休眠基本被解除;（4）浓度为200 mg·L^-1的GA₃溶液处理可显著提高4组小檗种子发芽率,浓度过高或过低均会对小檗种子萌发起到抑制作用。层积60 d时霍城居群、新源居群和特克斯居群黑果小檗去种皮种子用200 mg·L^-1的GA₃溶液处理2 h后,发芽率分别为85.00%、83.33%和86.67%;红果小檗层积15 d时去种皮种子用浓度为200 mg·L^-1的GA₃溶液处理后,发芽率可达86.67%。研究结果将为今后野生小檗的种质资源保护,利用及可持续发展提供技术支持和科学依据。     

Seed germination ecology of Portulaca oleracea L.: an important weed of rice and upland crops

Portulaca oleracea , a C₄ species, is reported to be a serious weed in 45 crops in 81 countries. Experiments were conducted in the laboratory, the screenhouse and the field to determine the influence of environmental factors on seed germination and seedling emergence of P. oleracea . In the laboratory, germination in the dark was low and was not influenced by the tested temperatures (35/25°C, 30/20°C and 25/15°C alternating day/night temperatures). In the light/dark regime, however, germination was lower at 25/15°C and 35/25°C than at 30/20°C (70%, 75% and 81% germination, respectively). In conditions of 106 mM sodium chloride or −0.34 MPa osmotic potential, seeds germinated to only 50% of maximum germination of the control. Germination was not influenced by buffered pH solutions ranging from 5 to 9. In the screenhouse, germination was greatest for seeds placed on the soil surface, but emergence declined with increasing seed burial depth in soil; no seedlings emerged from the depth of 2 cm. Seedling emergence and seedling dry matter were markedly reduced by the addition of rice residue to the soil surface at rates equivalent to 4 to 6 t ha⁻¹. In the field, seedling emergence of P. oleracea was greater under zero till (ZT) (17–20%) than under minimum tillage (6–10%), a likely reflection of low seed burial and exposure of seeds to light with a ZT system. This study identifies some of the factors enabling P. oleracea to be a widespread weed in the humid tropics, and the information could contribute to improved control strategies.     

Cryopreservation of leucocytes of channel catfish for subsequent cytogenetic analysis

Channel catfish leucocytes cryopreserved with glycerol or dimethyl sulphoxide (DMSO) had significantly higher ( P <0.05) viability and recovery rates than did cells cryopreserved with methanol. After 7 days of frozen storage, a 24 to 27% reduction of viability was observed for cells cryopreserved with glycerol; a 25 to 43% reduction for cells frozen with DMSO, and a 67 to 100% reduction for cells frozen with methanol. The concentration of cryoprotectants affected the viability of cryopreserved cells significantly ( p <0.05). The viability reduction was 36% for cells frozen with 5% of cryoprotectants, 30% for cells frozen with 10% of cryoprotectants, and 49% for cells frozen with 15% of cryoprotectants. The viability of cells frozen at the slower rate (-2.7°C min⁻¹) was significantly higher ( p <0.05) than that of cells frozen at the faster rate (-45°C min⁻¹). Best results were obtained for cells cryopreserved with 10% of glycerol or DMSO and frozen at the slower rate. The chromosomes prepared from cells cryopreserved using this procedure were identical to those prepared from fresh cells, and to those reported in the literature for channel Catfish.