褪黑素对小鼠MFC前胃癌细胞的survivin、caspase-3表达的影响

目的探讨褪黑素（Melatonin,MLT）对小鼠前胃癌细胞（murine foregastric carcinoma,MFC）的生存素survivin和半胱天冬酶-3（cysteinyl aspartate-specific protease-3,caspase-3）表达的影响。方法使用不同浓度褪黑素处理培养的胃癌细胞,运用细胞免疫组化、实时荧光定量PCR、免疫印迹法、分光光度法等方法检测褪黑素在抑制小鼠MFC前胃癌细胞增殖过程中对细胞survivin、caspase-3的表达影响。结果与空白对照组相比,6mmol/L浓度褪黑素干预组的胃癌细胞survivin表达下调,caspase-3蛋白表达上调,并呈剂量依赖性。结论褪黑素能够降低胃癌细胞survivin的表达,进而激活caspase-3的活性,是褪黑素体外抑制肿瘤细胞增殖的作用机制之一。     

褪黑素的抗胃癌效应及其引起的Bcl-2、Bax、p21和p53的表达变化

为了探讨褪黑素体内抗小鼠胃癌作用及其机制,本研究应用小鼠胃癌(murine foregastric carcinoma,MFC)细胞建立荷胃癌小鼠模型,不同浓度褪黑素干预后,运用实时荧光定量RT-PCR、免疫印迹等方法检测Bcl-2,Bax,p21,p53的表达变化。结果显示:(1)褪黑素能够缩小荷胃癌小鼠的肿瘤体积,减轻肿瘤重量,达到抗胃癌作用;(2)褪黑素在抑制胃癌生长过程中下调肿瘤组织Bcl-2表达,上调Bax、p21和p53表达。以上结果表明,褪黑素可通过促进胃癌细胞凋亡从而实现体内抑制胃癌生长作用。     

褪黑素的抗胃癌效应及其对TNF-α、NO表达的调节作用

目的 探讨褪黑素(melatonin, MLT)在体内外对胃癌细胞增殖活性的影响及其对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)表达的调节作用。方法 构建不同浓度褪黑素干预皮下荷胃癌小鼠模型。测量各组小鼠肿瘤质量、体积;胸腺、脾脏指数;HE染色观察肿瘤组织形态;分离各组小鼠腹水巨噬细胞并计数分析。ELISA和比色法检测外周血清及腹水巨噬细胞培养液TNF-α、NO表达水平。不同浓度褪黑素干预小鼠胃癌细胞(MFC)。CCK-8检测各组MFC细胞的增殖活力;ELISA和比色法检测各组细胞培养上清TNF-α、NO表达水平。结果 褪黑素干预后小鼠肿瘤质量、体积均显著下降,脾和胸腺指数无明显变化;相比对照组,褪黑素组外周血清和腹水巨噬细胞培养液TNF-α、NO表达水平均明显升高。褪黑素干预后MFC细胞增殖活力明显下降,呈剂量依赖性;同时,褪黑素组相比对照组MFC细胞上清NO表达降低,TNF-α表达升高。结论 褪黑素体内外均能抑制胃癌细胞增殖活性,该作用与TNF-α表达上调、NO表达水平改变有关;也与体内巨噬细胞分泌TNF-α、NO水平增强有关。     

新加良附方对移植性人胃癌细胞Survivin与Caspase-3蛋白表达影响

目的:观察新加良附方对移植性人胃癌细胞(BGC-823)Survivin与Caspase-3蛋白表达的影响.方法:建立移植性人胃癌动物模型,并将动物模型随机分为模型对照、5-Fu组及新加良附方高、中、低剂量5组.新加良附大、中、小剂量组给药量分别为10g/kg、5g/kg和2.5g/kg;5-Fu组给药剂量为17mg/kg;模型组给予等量无菌生理盐水.连续给药、给水15天处死模型小鼠分离肿瘤,瘤块称重,石蜡包埋,并将肿瘤组织切片,免疫组化法检测Survivin与Caspase-3蛋白表达.结果:新加良附方高、中剂量组能上调肿瘤组织Caspase蛋白表达,与模型对照组比较,有统计学意义(P＜0.05);新加良附方高、低剂量组均能下调Survivin蛋白表达,与模型对照组比较,有统计学意义(P＜0.05).结论:新加良附方能通过上调肿瘤组织Caspase蛋白表达,下调Survivin蛋白表达,从而诱导胃癌细胞发生凋亡.预示新加良附方在抗肿瘤方面具有进一步深入研究价值.     

XIAP及survivin在原发性肝细胞癌组织中的表达及其相关性研究

目的：探讨X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）和survivin在原发性肝细胞癌中的表达及两者的相关性。方法：选取本院收治的60例原发性肝细胞癌患者,应用免疫组织化学染色的方法对肝癌组织及癌旁组织中的XIAP及survivin的表达进行检测。结果：经比较,肝癌组织中XAIP及survivin的阳性率均显著高于癌旁组织,差异有统计学意义。XIAP和survivin的表达强度与肿瘤的大小无关,但随肿瘤的分化程度的降低而升高,且不同分化程度之间差异有统计学意义;XIAP和survivin存在正相关关系。结论：XIAP与Survivin在肿瘤组织中的高表达在促进肿瘤发生、增殖、转移以及耐药,并且能够降低肿瘤的分化程度,增加肝癌的恶性程度。此外,两者可能存在协同作用,但两者的相关性及作用机制仍需进一步探讨。     

XIAP及survivin 在原发性肝细胞癌组织中的表达及其相关性研究

目的：探讨X 连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）和survivin 在原发性肝细胞癌中的表达及两者的相关性。方法：选取本院收治的60 例原发性肝细胞癌患者,应用免疫组织化学染色的方法对肝癌组织及癌旁组织中的XIAP及survivin 的表达进行检测。结果：经 比较,肝癌组织中XAIP 及survivin 的阳性率均显著高于癌旁组织,差异有统计学意义。XIAP 和survivin 的表达强度与肿瘤的大 小无关,但随肿瘤的分化程度的降低而升高,且不同分化程度之间差异有统计学意义;XIAP 和survivin 存在正相关关系。结论： XIAP与Survivin 在肿瘤组织中的高表达在促进肿瘤发生、增殖、转移以及耐药,并且能够降低肿瘤的分化程度,增加肝癌的恶性 程度。此外,两者可能存在协同作用,但两者的相关性及作用机制仍需进一步探讨。     

褪黑素通过调节survivin和Caspase-3表达诱导人骨肉瘤细胞凋亡

目的研究褪黑素对人骨肉瘤细胞survivin、Caspase-3表达的调控,进一步探讨褪黑素的抗肿瘤机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞MG63、U2,Hoechst33258染色观察两种骨肉瘤细胞凋亡的改变,实时荧光定量PCR及免疫印迹法检测两种骨肉瘤细胞survivin、Caspase-3表达。结果 Hoechst33258染色显示褪黑素作用后促进骨肉瘤细胞MG63、U2凋亡,实时荧光定量PCR及免疫印迹分析结果表明,经褪黑素作用后的骨肉瘤MG63、U2细胞中survivin在mRNA水平表达的无明显差别,但其蛋白质水平较用药前明显降低;Caspase-3在mRNA及蛋白质水平上均较用药前明显增高。结论褪黑素诱导人骨肉瘤细胞MG63、U2发生凋亡,可能是通过抑制survivin基因在蛋白水平的表达,同时上调Caspase-3基因的表达,进而促进细胞凋亡,发挥其抗肿瘤作用。     

硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)在胃癌中的表达及对胃癌细胞生长的影响*

目的: 探讨胃癌组织硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)表达与生存时间的关系及其对胃癌细胞生长的影响。方法: 用Real-time PCR法检测76例胃癌组织及癌旁TrxR1 mRNA表达,并分析其与胃癌患者临床病理特征及预后的关系;随机选取3例胃癌组织及癌旁组织,采用免疫组化法、Western blot法检测TrxR1蛋白表达。采用Western blot法和Real-time PCR法检测胃癌细胞系及人胃粘膜上皮细胞中TrxR1的表达。采用小RNA干扰序列(siRNA)处理AGS细胞,根据处理方法不同将AGS细胞分为3组:阴性对照组:转染NC-siRNA、TRXR1 siRNA干扰1组:转染TRXR1-siRNA1、TRXR1 siRNA干扰2组:转染TRXR1-siRNA2。使用Real-time PCR法检测各组AGS细胞中TrxR1 mRNA的表达,克隆形成试验和MTT法检测AGS细胞生长情况。结果: 胃癌组织中TrxR1 mRNA和蛋白表达量均显著性上调,TrxR1主要定位于细胞质中。TrxR1高表达与患者TNM分期及淋巴结转移有关,且TrxR1高表达组患者的中位生存时间短于低表达组(P＜0.05)。胃癌细胞中TrxR1表达量高于人胃粘膜上皮细胞系中的表达。TRXR1-siRNA1组AGS细胞和TRXR1-siRNA2组AGS细胞中TrxR1 mRNA和蛋白与NC-siRNA组相比均显著性降低(P＜0.05),且AGS细胞克隆形成与增殖能力均降低(P＜0.05)。结论: 胃癌组织中TrxR1高表达提示患者预后不良,沉默TrxR1能抑制胃癌细胞的增殖。     

VEGF-C 和VEGFR-3 在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨胃癌患者血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C及血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3)在胃癌组织中的表达,从而确定胃癌预后的分子标志物。方法:搜集整理临床资料,采用Real-time PCR及ELISA法检测43例胃癌组织VEGF-C和VEGFR-3的表达。结果:43例胃癌组织中均有不同程度的VEGF-C和VEGFR-3的表达,Real-time PCR结果显示胃癌组织淋巴结转移组和非转移组VEGF-C和VEGFR-3的表达分别为0.07±0.01和0.12±0.01,0.03±0.01和0.06±0.02,与正常对照组相比,差异有显著性(p<0.05)。ELISA检测显示,与正常胃组织中VEGF-C和VEGFR-3的蛋白表达相比,胃癌无淋巴结转移组及胃癌并发淋巴结转移组中VEGF-C和VEGFR-3均明显增加。结论:VEGF-C和VEGFR-3的表达与胃癌淋巴结转移密切相关,提示胃癌标本VEGF-C和VEGFR-3的检测可作为胃癌预后的分子标志物。     

VEGF-C和VEGFR-3在胃癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨胃癌患者血管内皮生长因子C（vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C及血管内皮生长因子受体-3（vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3）在胃癌组织中的表达,从而确定胃癌预后的分子标志物。方法：搜集整理临床资料,采用Real-time PCR及ELISA法检测43例胃癌组织VEGF-C和VEGFR-3的表达。结果：43例胃癌组织中均有不同程度的VEGF-C和VEGFR-3的表达,Real-time PCR结果显示胃癌组织淋巴结转移组和非转移组VEGF-C和VEGFR-3的表达分别为0.07±0.01和0.12±0.01,0.03±0.01和0.06±0.02,与正常对照组相比,差异有显著性（p〈0.05）。ELISA检测显示,与正常胃组织中VEGF-C和VEGFR-3的蛋白表达相比,胃癌无淋巴结转移组及胃癌并发淋巴结转移组中VEGF-C和VEGFR-3均明显增加。结论：VEGF-C和VEGFR-3的表达与胃癌淋巴结转移密切相关,提示胃癌标本VEGF-C和VEGFR-3的检测可作为胃癌预后的分子标志物。     

纳米氧化铁双歧杆菌LTA对实验性胃癌抑制效果的影响

目的探讨纳米氧化铁（Fe3O4）双歧杆菌脂磷壁酸（Lipoteichoic acid,LTA）对实验性胃癌体内抑制效果的影响及其抑瘤途径。方法用人胃癌BGC823细胞建立裸鼠移植瘤模型,用硝酸还原酶法检测各剂量组裸鼠腹腔巨噬细胞分泌NO和iNOS的含量,用免疫组化法检测移植瘤内VEGF、Survivin和TAMs的表达。结果纳米Fe3O4-LTA各组与阴性对照组相比,NO生成量增加、iNOS活性增高,差异有非常显著性（P〈0.01）。移植瘤内VEGF、Survivin和TAMs蛋白表达显著低于阴性对照组（P〈0.01）。结论纳米Fe3O4-LTA对人胃癌裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其抑瘤机制可能与激活巨噬细胞,使其分泌多种具有杀瘤作用的活性因子以及下调胃癌内VEGF、Survivin和TAMs的表达,进而抑制其血管形成有关。     

Survivin与VEGF在良、恶性胃溃疡组织中的表达及研究

目的:研究凋亡基因生存素(Survivin)及血管内皮生长因子(VEGF)在良、恶性胃溃疡中的表达及二者在溃疡型胃癌中的表达与临床病理特征之间的关系,分析二者在胃癌发生发展中的作用和在胃癌中表达的相关性。方法:应用免疫组化S-P染色检测Survivin及VEGF在良性胃溃疡,胃溃疡伴中-重度不典型增生和溃疡性胃癌中的表达,结合临床病理特征进行相关分析。结果:Survivin及VEGF在良性胃溃疡中的表达率分别为16.2%、24.3%,在胃溃疡伴中-重度不典型中的表达率分别为52.3%、45.5%,在溃疡型胃癌中的表达率分别为71.4%、55.4%,差异具有显著性(P0.01);Survivin和VEGF的表达与溃疡型胃癌的浸润深度、淋巴结转移、TNM分期具有相关性。Survivin和VEGF的表达亦呈正相关。结论:Survivin基因在溃疡型胃癌组织中的表达显著增高,是胃癌演变进程中的重要步骤,过表达Survivin可能提示预后不良。Survivin对胃癌的诊断及预后有潜在的应用价值。Survivin和VEGF在溃疡型胃癌的发生发展中起协同作用,动态随访二者对胃溃疡的演变可能有一定的价值,可作为判断肿瘤进程和浸润转移的生物学指标。Survivin及VEGF的联合检测可能对胃癌的综合治疗提供理论依据,对其进行深入研究有望为胃癌的诊疗开辟新的天地。     

胃癌中显著下调的miR-433的作用靶点研究

目的为了筛选胃癌中miRNAs的表达标记,验证胃癌相关miRNAs的作用靶点,建立一种新的诊断和治疗胃癌的方法。方法运用基因芯片技术检测3个正常胃组织标本,24个胃癌组织标本,胃癌细胞SGC7901和正常胃黏膜细胞GES-1中328个miRNAs的表达情况。用以上方法检测出在胃癌组织和SGC7901中,miR-433的表达水平显著下调。为了确保结果的准确性,采用实时荧光定量PCR对其进行验证。并用基因克隆和Western印迹方法分析miR-433的作用靶点。结果共有26个miRNAs在胃癌标本（包括24个胃癌组织和SGC7901）中异常表达。其中19个miRNAs下调,7个miRNAs上调。实时荧光定量PCR检测出miR-433在胃癌标本中的表达水平显著下调,该结果和基因芯片检测结果一致。另外,在本实验中发现miR-433与Grb2（growth factor receptor—bound protein 2）的表达呈负相关。结论胃癌相关miRNAs已进行了初步筛选。其中,miR-433可能是胃癌中的标记性miRNAs之一,Grb2是其作用靶点。这为建立新的以miRNAs为基础的诊断和治疗胃癌的方法提供了相关信息。     

miRNA-105在胃癌组织中的表达情况

目的:分析胃癌组织与癌旁正常胃黏膜组织中miRNA的差异表达情况。方法:收集胃癌组织和其相应癌旁正常胃黏膜组织共33对,经抽提、纯化RNA后,反转录合成荧光分子Hy3的cDNA探针,将其与miRCURYTMLNA Array(v.16.0)(Exiqon公司)芯片进行杂交,应用Axon GenePix 4000B芯片扫描仪来扫描miRNA芯片的荧光强度,GenePix Pro 6.0软件(Axon)把图像转化为数字信号,以差异大于2倍的为标准来确定胃癌黏膜组织中差异表达的miRNA。再用实时荧光定量PCR方法验证芯片结果中表达异常增高的miR-105在33例胃癌组织中的表达情况。结果:miRNA表达谱芯片结果显示:胃癌组织共中有51种miRNA表达异常,其中miR-105、miR-548n、miR-214*、miR-4309等31种miRNA表达上调,miR-31、miR-1275、miR-26b*、miR-744等20种miRNA表达下调;实时荧光定量PCR证实与癌旁正常胃黏膜组织相比,胃癌组织中miR-105表达显著上调(P0.01)。结论:miR-105在胃癌组织的表达明显高于正常胃黏膜组织,可能与胃癌的发生、发展相关。我们的研究为胃癌的发病机制和诊断治疗提供了一个新的研究方向。     

Combined effect of sCD40L and PI3K siRNA on transplanted tumours growth and microenvironment in nude mice with gastric cancer

The objective of the paper is to investigate the combined effect of sCD40L and phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) siRNA on transplanted tumours growth and microenvironment in nude mice with gastric cancer. 48 h after modeling, the animals were randomly divided into saline + AGS group (A), sCD40L + AGS group (B), saline + PI3K siRNA group (C) and sCD40L + PI3K siRNA group (D), six mice in each group. The mouse in the groups was inoculated with exponential phase AGS cell or PI3K gene silencing cells (100 μl, 5 × 10(6)). After tumour size reaches 0.2-0.3 cm, Tumours in animals of groups were injected with sCD40L (100 μl, 10 mg/kg) or equal volume of saline, thrice each day, respectively. Microvessel density (MVD), apoptosis index, and expression levels of PI3K, Survivin and vascular endothelial growth factor (VEGF) proteins in transplanted tumor cells in gastric cancer nude mice were analyzed by utilizing Immunohistochemistry, western blot, terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling assays. Results showed that combination of sCD40L with PI3K siRNA could significantly decrease tumour size, MVD, expression levels of PI3K, Survivin and VEGF proteins, and increase apoptosis index. It can be concluded that combination of sCD40L with PI3K siRNA provides a promising future for gastric cancer therapy.     

Induction of cell differentiation and promotion of endocan gene expression in stomach cancer by melatonin

The pineal hormone melatonin has been shown to have anticancer therapeutic properties in patients with gastric cancer, the mechanisms, however, remain largely unknown. The present study examined the effects of melatonin on cell differentiation related factors, namely, endocan, alkaline phosphatase, and lactate dehydrogenase, in gastric adenocarcinoma cell line SGC7901. Expression of endocan was significantly decreased in tissue of gastric cancer as compared to normal stomach tissue, as determined by immunohistochemical staining, and there is correlation between the degree of the decrease of endocan expression and the degree of differentiation of the cancer. Treatment of cultured gastric adenocarcinoma cells with 10⁻⁴ mol/l melatonin significantly increased the gene expression of endocan and down-regulated the activity of alkaline phosphatase and lactate dehydrogenase, two enzymes that promote de-differentiation in gastric tissue; and there was a negative correlation between the level of endocan expression and the activities of differentiation marker enzymes in the melatonin treated cancer cells. Gastric cancer cells treated with melatonin show more differentiated morphologic phenotype as compared the untreated cells. The findings indicate that melatonin may play its anticancer role in gastric adenocarcinoma by acting as a differentiation inducer.