双价外壳蛋白基因植物表达载体的构建及马铃薯转基因植株的鉴定

在克隆了马铃薯Ｘ病毒（ＰＶＸ）、马铃薯Ｙ 病毒（ＰＶＹ）和马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）的外壳蛋白基因的基础上,构建同时包含ＰＶＸ和ＰＶＹ 与ＰＶＹ 和ＰＬＲＶ 两个外壳蛋白基因植物表达框架的表达载体,通过农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）介导转化烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ ）和生产上常用的几个马铃薯（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ ）优良品种：“Ｆａｖｏｒｉｔａ”、“虎头”、“克４”。经ＰＣＲ检测证明外源基因已整合到植物的染色体上,得到批量转基因植株。在转ＰＶＸ＋ＰＶＹ 外壳蛋白基因的烟草上接种ＰＶＸ （５ μｇ／ｍ Ｌ）、ＰＶＹ（２０ μｇ／ｍ Ｌ）病毒,得到有一定抗性的植株     

马铃薯卷叶病毒（PLRV）基因组研究进展

马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）基因组研究进展张鹤龄（内蒙古大学生物系,呼和浩特０１００２１）关键词马铃薯卷叶病毒,基因组ＴｈｅＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＰＬＲＶＧｅｎｏｍｅＲｅｓｅａｒｃｈＺｈａｎｇＨｅｌｉｎｇ（ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ,...     

马铃薯卷叶病毒复制酶基因5端克隆及序列分析

马铃薯卷叶病毒（Ｐｏｔａｔｏｌｅａｆｒｏｌｖｉｒｕｓ,ＰＬＲＶ）是正链ＲＮＡ病毒,属黄化病毒组（Ｌｕｔｅｏｖｉｒｕｓ）〔１〕,严格虫传,分布广泛,难以控制,侵染马铃薯能引起大面积减产,给马铃薯生产造成巨大损失。ＰＬＲＶ基因组全长６．０ｋｂ,有６个读...     

马铃薯卷叶病毒基因间隔区的克隆及序列分析

根据已报道的马铃薯卷叶病毒基因组序列．设计合成一对特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）的ＲＮＡ为模板,反转录合成ｃＤＮＡ第一条链,经ＰＣＲ扩增后克隆于ｐＵＣ１９质粒中,进一步用ＰＣＲ鉴定、限制酶切分析和序列分析,结果表明：ＰＬＲＶ－Ｃｈ基因间隔区由１９７个核苷酸组成,与国外报道的荷兰ＰＬＲＶ－Ｎ加拿大ＰＬＲＶ－Ｃ,澳大利亚ＰＬＲＶ－Ａ,苏格兰ＰＬＲＶ－Ｓ各株系核苷酸序列具有很高的同源性,同源率依次为９９％、９８％、９３％、９８％。     

马铃薯卷叶病毒基因间隔区转化的马铃薯抗病性研究

将本室合成、克隆的马铃薯卷叶病毒（ＰｏｔａｔｏＬｅａｆｒｏｌＶｉｒｕｓ,ＰＬＲＶ）中国分离株的基因间隔区（ｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｓｅｑｕｅｎｃｅ,ＩＳ）双链ｃＤＮＡ以正、反向两种方式分别构建于转化载体ｐＲＯＫ２中,通过致瘤农杆菌介导,以马铃薯叶圆片为转化材料,转化马铃薯栽培品种Ｄｅｓｉｒｅ,获得了转基因植株。卡那霉素抗性分析和ＰＣＲ检测目的基因,证明ＰＬＲＶＩＳ双链ｃＤＮＡ已经整合到转基因马铃薯的染色体基因组中。将转基因植株移栽网棚用蚜虫接种ＰＬＲＶ,观察症状并用酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）检测转基因植株中ＰＬＲＶ含量。结果表明,表达ＰＬＲＶＩＳ正意和反意ＲＮＡ的转基因植株,接种病毒后表现无症状或症状轻微,ＰＬＲＶ平均滴度均较未转基因对照植株低。表达正意ＲＮＡ的转基因植株ＰＬＲＶ滴度降低４３％～７２％,表达反意ＲＮＡ的转基因植株ＰＬＲＶ滴度降低７２％～８６％,由此可见,表达ＰＬＲＶＩＳ反意ＲＮＡ的转基因马铃薯对ＰＬＲＶ抗性较强。     

马铃薯卷叶病毒56kD蛋白基因及3‘端非编码区克隆和序列分析

根据已报道的马铃薯卷叶病毒基因组序列,设计合成一对特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国分离株的ＲＮＡ为模板,反转录合成了ｃＤＮＡ第一条链,经ＰＣＲ扩增后克隆于ｐＵＣ１９质粒中,进一步用ＰＣＲ鉴定,限制酶切分析用序列分析。结果表明,ＰＬＲＶ－Ｃｈ５６ｋＤ蛋白基因由１５２７个核苷酸组成,编码５０８个氨基酸,３‘端非编码区由１４１个核苷酸组成,与国外报道的苏格兰ＰＬＲＶ－Ｓ,荷兰ＰＬＲＶ－Ｎ,加拿大ＰＬＲＶ     

抗病毒、抗虫害的马铃薯在美国得到认可

《日经生物技术》１９９８年１２月２１日号第１５页报道：美国孟山都公司１２月８日宣布,具有抗病毒和抗病虫害两种性状的马铃薯“ＮｅｗＬｅａｆＰｌｕｓ”通过了为了在美国商业化的必要的规定。马铃薯“ＮｅｗＬｅａｆＰｌｕｓ”是对马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）和马铃...     

噬菌体T7溶菌酶及其融合蛋白在大肠杆菌中的表达

以噬菌体Ｔ７ＤＮＡ为模板,ＰＣＲ扩增Ｔ７溶菌酶基因,插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ载体中,ＤＮＡ序列分析表明,克隆的Ｔ７溶菌酶基因和已报道的序列无氨基酸水平上的差异。将Ｔ７溶菌酶基因分别拼接在烟草病原相关蛋白（ＰＲ１ｂ）信号肽编码序列的３’末端和马铃薯卷叶病毒外壳蛋白（ＰＬＲＶＣＰ）基因靠近３’末端处,构建成两个融合蛋白基因。将Ｔ７溶菌酶及其融合蛋白基因插入大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２１,蛋白电泳及溶菌实验表明,Ｔ７溶菌酶基因在大肠杆菌中高效表达,其产物的表达量占菌体可溶性蛋白的２０％以上,ＰＬＲＶＣＰ的表达量并没有因Ｃ端融合Ｔ７溶菌酶而提高,高等植物的信号肽在大肠杆菌中也能起分泌信号作用。     

马铃薯卷叶病毒中国株（PLRV-Ch）ORF2a基因特征分析

马铃薯卷叶病毒 (ＰＬＲＶ)是正链ＲＮＡ病毒 ,属黄化病毒组[1 ] 严格虫传 ,分布广泛 ,难以控制 ,侵染马铃薯 ,给生产造成巨大损失。ＰＬＲＶ基因全长 6 0ｋｂ ,有 6个读码框架 ,其中ＯＲＦ2ａ是第二读框 ,全长 192 0ｂｐ ,编码一个 70ｋＤ的多肽。另外 ,ＯＲＦ2ａ在与ＯＲＦ2ｂ重叠处可发生移码继续转译 ,直到ＯＲＦ2ｂ的尾 ,转译产物为一条 118ｋＤ的多肽 ,该蛋白的Ｃ端与复制酶的序列具很大的同源性[2～ 4] 。Ｐｒｕｆｅｒ[5] 等和Ｋｕｊａｗａ[6] 等分别研究了ＰＬＲＶ基因组上ＯＲＦ2ａ与ＯＲＦ2ｂ重叠区附近与移码有关的滑动序列及其…     

表达马铃薯X病毒和Y病毒双价外壳蛋白基因马铃薯植株的抗病性

表达马铃薯Ｘ病毒（ＰＶＸ）和马铃薯Ｘ病毒（ＰＶＹ）双价外壳蛋白（ＣＰ）基因的马铃薯虎头和克新４号,用机械摩擦同时接种ＰＶＸ和ＰＶＹ后,通过症状观察,植株中ＰＶＸ和ＰＶＹ的ＥＬＩＳＡ检测结果表明,转基因头虎头和克新４号的多数株系的平均病毒含量均明显低于未转基因的对照植株,不同时期病毒测定结果表明,许多株系病毒积累缓慢,延迟发病,说明转ＰＶＸ,ＰＶＹ双价ＣＰ基因的马铃薯,对ＰＶＸ和ＰＶＹ复合侵染发生不     

特异切割马铃薯卷叶病毒复制酶基因负链的核酶研究

根据锤头状核酶的作用模式,设计、合成并克隆了特异性切割马铃薯地病毒中国分离株（ＰＬＲＶ－Ｃｈ）复制酶基因负链ＲＮＡ的核酶序列,以体外转录的ＰＬＲＶ－Ｃｈ复制酶基因负链ＲＮＡ作为底物,与转录的核酶ＲＮＡ共同保温,以检测核酶对底和的体外切割作用。实验结果表明,核酸疼 ＲＮＡ对ＰＬＲＶ－Ｃｈ复制酶基因负锭ＲＮＡ具有特异切割作用。     

马铃薯卷叶病毒中国株（PLRV—Ch）复制酶基因结构研究

用设计合成的两对特异性引物,以马铃薯卷叶病毒中国分离株ＰＬＲＶ－Ｃｈ ＲＮＡ为模板,经反转录ＰＣＲ扩增,将复制酶基因３＇端０．６ｋｂ和５＇端１．２ｋｂ,克隆于ｐＵＣ１９中,分别构建了重组质粒ｐＬＲ３和ｐＬＲ５,并分五段进行了序列分析。将获得的核苷酸序列氨基酸序列与国外报导的四个ＰＬＲＶ分离株的相应区段的序列同源性进行了比较。结果表明具有高度同源性。文中对核苷酸序列中存在的问题移码序列和其下游的茎环     

马铃薯卷叶病毒中国株ORF1及5′端非编码区序列特点分析

马铃薯卷叶病毒（potato leafroll virus,PLRV）是一种严格由蚜虫以持久性方式传播的病毒,是黄化病毒属（Luteovirus）成员,可侵染马铃薯（Solanum tuberosum L）引起卷叶、黄化、矮缩、僵化及块茎网状坏死等症状,严重影响马铃薯的产量和品质,是一种世界范围的马铃薯主要病毒病害。因此,有效防治此病害具有重要经济意义。     

中国六省,市辣（甜）椒病毒种群及其分布的研究

１９８３－１９９１年间,国家“６５－７５”重点科技攻关项目协作组,在京、津、辽、苏、吉、新六个地区,采集辣（甜）椒病毒病标样３６１８个,采用三常规（生物、血清、电镜）鉴定手段分离出烟草花叶病毒（ＴＭＶ）、黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）、马铃薯Ｘ病毒（ＰＶＸ）、马铃薯Ｙ病毒（ＰＶＹ）、烟草蚀纹病毒（ＩＥＶ）、苜蓿花叶病毒（ＡＭＶ）、蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）、烟草脆裂病毒（ＴＲＶ）等八种病毒;描述了它们的生物学、血清学、电镜学性状及危害辣（甜）椒的特性;分析了各类病毒在不同地区、季节的消长规律,明确了各地辣椒上的主导病毒病原,为抗病育种及制定综合防治措施,提供了科学依据。     

转PVY外壳蛋白基因马铃薯及其田间实验

报道了将马铃薯Ｙ 病毒（ＰＶＹ）中国分离株的外壳蛋白基因通过农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａ－ｃｉｅｎｓ）介导转入马铃薯（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ Ｌ．）的生产品种“Ｆａｖｏｒｉｔａ”、“虎头”和“克４”,在获得大量再生植株的基础上经过ＰＣＲ检测和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交证明,大部分株系中ＰＶＹ 外壳蛋白基因的表达框架已完整整合到马铃薯的染色体上。人工接种ＰＶＹ 病毒（２０ ｍ ｇ／Ｌ）后一些转基因株系对ＰＶＹ 病毒的侵染表现较强的抗性,同时其单株结薯数和平均薯重有所增加。在田间实验中,转基因马铃薯植株生长良好而且部分转基因株系产量高于未转基因的脱毒马铃薯,从这些株系中有希望得到抗病性好而且高产的马铃薯品系     

黑龙江省及长春市烟草病毒病的种类鉴定

１９９１－１９９３年在黑龙江省主要烟区的１１个县及长春市采样,得１２９个毒株。经鉴别寄主测定,抗血清反应（板式酶联法或斑点酶联法）及电镜或免疫电镜观察,有ＴＭＶ（４３．４％）,ＰＶＹ（１７．８％）,ＣＭＶ（３．９％）,ＴＲＶ（０．８％）,ＴＳＷＶ等病毒,ＴＭＶ与ＰＶＹ混合侵染的占１０．１％,ＰＶＹ与其它病毒混合侵染的占１１．６％,另有５个标样为马铃薯Ｙ病毒组成员,１０个为未知。     

葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ外壳蛋白基因的克隆

根据美国报道的葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ（ＣＬＲａＶ－３）ＣＰ基因序列,设计并合成一对引物,用ＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲ对ＧＬＲａＶ－３进行检测,琼脂糖凝胶电泳表明其大小与预计相符。将其ＣＰ基因克隆到ｐＧＥＭ－３ｚｆ（＋）中,经双酶切和序列分析表明所克隆的是ＧＬＲａＶ－３ ＣＰ基因,它与美国分离物相应序列同源性为９４．１％。     

利用转基因生物技术防御水稻东格鲁病毒

《ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｒｅｅｄｉｎｇ》１９９９年５卷２期１７７～１８５页报道：美国蒙大拿州立大学植物学与土壤和环境科学系的科学家Ｓｉｒａｍａｎｉ等利用粒子轰击法将水稻东格鲁球状病毒（ＲＴＳＶ）的衣壳蛋白（ＣＰ）基因ＣＰ１、ＣＰ２和ＣＰ３个别或共同引入籼稻和／或粳稻细胞。再通过ＲＴＳＶ的天然传播媒价二点黑尾叶蝉将ＲＴＳＶ接种于原始转化体的自交后代植株。ＲＮＡ印迹分析表明,在含有目标基因的１９个选育转基因水稻株系中的１６个株系及其Ｒ１、Ｒ２和／或Ｒ３后代中积累了嵌后ＣＰ基因的转录本。还发现,个别或共…     

我国培育成功抗卷叶病毒转基因马铃薯

内蒙古大学张鹤龄教授主持的课题组首次用我国自己克隆的马铃薯卷叶病毒 (中国株 )外壳蛋白基因转化并培育成功抗卷叶病毒的转基因马铃薯 ,专家鉴定认为 ,这一成果处于国际先进水平。马铃薯卷叶病毒是引起马铃薯退化的主要病毒 ,严重续发感染可导致减产 80 % ,每年使世界马铃薯减产约 2 0 0万吨。在内蒙古大学张鹤龄教授主持下 ,1993年完成了国家自然科学基金项目“马铃薯卷叶病毒外壳蛋白基因分子克隆”课题。此后 ,他们利用自己合成克隆的马铃薯卷叶病毒 (中国株 )外壳蛋白基因通过农杆菌介导转化 ,经过数年选育 ,获得了性状稳定的 5个品…     

用脊髓灰质炎病毒作表达载体的研究进展

用脊髓灰质炎病毒（ＰＶ）减毒株构建的表达载体可分３种类型：ＰＶ抗原嵌合体、有缺损的ＰＶ杂交复制子和非缺损的ＰＶ杂交病毒。本文对这３种类型ＰＶ表达载体的研究进展进行综述。