PC预处理异体生物材料的应用前景

同种异体血管移植前,必须经过物理或化学方法的预处理,以封闭氨基酸残基,降低抗原性。化学法有甲醛、酒精、柳硫汞、戊二醛(Gluteraldehyde,GA)等,其中又以GA最为常用。但是经GA交联的血管、瓣膜存在钙化变性、组织僵硬、耐久性差的缺点,因此需要寻找新的处理试剂。多聚环氧化合物(Polyepoxy compound,PC)处理的生物材     

用于骨病治疗的酶抑制剂药物研发进展

近年来研究发现,多种骨病都伴随钙化异常发生,该钙化异常与组织非特异性碱性磷酸酶等生物酶的功能异常密切相关,破解这些酶的致病机理,研发能减缓异常钙化进程的相关酶抑制剂作为传统抗炎药物的重要补充,已成为该领域研究人员的关注热点,本文将针对过度钙化型骨病,对于其形成机理及药物研发的相关进展进行介绍。     

碱性磷酸酶钙-钴法染色的不同包埋方法比较

目的探讨石蜡切片、冰冻切片及碳蜡(聚乙二醇)包埋切片在碱性磷酸酶染色中的应用,综合分析几种组织处理方法的优缺点,以便在病理诊断及科研工作中能找到更适合的碱性磷酸酶染色方法。方法取新鲜乳腺组织及肝组织,每份标本各取3块组织,根据包埋方法的不同,分为3组:石蜡切片碱性磷酸酶染色、冰冻切片碱性磷酸酶染色、碳蜡包埋切片碱性磷酸酶染色。结果 3组切片均可见黑色碱性磷酸酶的存在,其中肝组织内显示碱性磷酸酶呈黑色,沿胆小管分布;乳腺组织内显示碱性磷酸酶呈黑色沉淀弥漫分布于乳腺间质中。结论碳蜡包埋切片在碱性磷酸酶染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,并弥补了常规冰冻切片和石蜡切片染色的缺点和局限性,在病理诊断及科研工作中具有一定的应用价值。     

配体依赖性Cre重组酶在培养肝细胞中介导条件性基因激活

嵌合性Cre重组酶与肝组织特异性调控区的结合使其在肝细胞上介导的条件性基因激活成为可能。为此 ,首先构建了在小鼠白蛋白基因调控区调控下的Cre ERt表达载体 (Alb Cre ERt) ,然后将其构件分别转染工程化的BRL(大鼠肝细胞 )和BRK(大鼠肾细胞 )细胞株 ,这些细胞携带的floxed βgeo框架位于启动子与人碱性磷酸酶基因 (hAP)之间 ,因而阻碍hAP表达。用 1μmol/L 4 羟基三苯氧胺 (4 hydroxytamoxifen ,4 OHT)处理后 ,经碱性磷酸酶染色 ,部分BRL细胞显示碱性磷酸酶染色阳性 ;用PCR方法证实Cre重组酶介导了floxed βgeo框架的切除。然而 ,在未用 4 OHT处理的BRL细胞未观察到碱性磷酸酶染色阳性细胞 ,在用 4 OHT处理或未处理的BRK细胞同样未观察到碱性磷酸酶染色阳性细胞。这些结果表明已成功构建肝细胞特异表达Alb Cre ERt载体 ,并在表达Cre融合蛋白的BRL细胞证实 4 OHT能够诱导Cre介导的DNA重组 ,从而激活碱性磷酸酶报告基因的表达。该研究将为进一步建立肝细胞特异表达Cre ERt转基因小鼠奠定基础。     

移植血管PC预处理反应条件初步探索

异体血管移植前必须经过预处理,以消除血管胶原上的异体抗原,戊二醛(Glutaraldehyde,GA)醛化作为经典的处理方法被广泛应用。但是,GA处理的生物材料仍有缺点;如钙化变性、耐久性差、组织僵硬等。为此,国外研究者已开始探索使用一种新的处理试剂——多聚环氧化合物(Polyepoxy compounds,PC)。文献报告PC处理的生物材料经体内及体外实验证实优于GA材     

长江中下游部分湖泊沉积物碱性磷酸酶分布及其作用研究

沉积物磷负荷在湖泊富营养化的发生与恢复过程中具有关键作用,其释放受物理、化学与生物机制调节,而碱性磷酸酶催化有机磷的矿化,故当为促进沉积物磷循环的重要因素。本文讨论了长江中下游部分湖泊沉积物碱性磷酸酶分布及其在磷释放过程中的作用。五里湖疏浚与未疏浚区以及太湖、巢湖、龙感湖、东湖、月湖、龙阳湖、莲花湖等不同湖泊的不同区域表层沉积物碱性磷酸酶活性(APA)明显不同,这种空间异质性与湖泊富营养化程度相联系。此外,APA随沉积物的深度递减,或在中间与较深层次出现峰值,且具明显的季节性。上述事实以及APA对抑制剂的不同响应方式暗示酶存在形态的多样性(同工酶)。苯丙氨酸(Phe)明显提高月湖与五里湖沉积物APA,沉积物与Phe相互作用并静置一天之后,生物可利用性磷(SRP)的释放量明显增加。再者,Phe可抑制月湖沉积物APA,沉积物与Phe相互作用并静置一天之后,SRP释放量无明显变化,溶解有机磷(DOP)的释放量则明显增加。因此,释放的SRP部分来自某些活跃的有机磷的酶促水解,沉积物碱性磷酸酶在内源磷的释放以及富营养化过程中具有重要作用。     

重金属镉对鲫鱼碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性的影响

研究了重金属镉对鲫鱼肠、肝胰脏、鳃组织碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性的影响。结果表明,在0.2、0.4、0.8mg/L镉浓度条件下静态染毒12h、24h、48h、96h后,鲫鱼肠、鳃组织中碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)的活性降低,肝和胰脏的碱性磷酸酶活性没有明显变化,其酸性磷酸酶活性则升高。     

高同型半胱氨酸血症促进大鼠血管钙化

目的:在大鼠血管钙化模型上,探讨高同型半胱氨酸血症对血管钙化的影响及其作用机制.方法:用维生素D3加尼古丁诱导大鼠血管钙化模型,并给以高蛋氨酸饮食六周诱导大鼠高同型半胱氨酸血症,用高效液相色谱法检测血浆总同型半胱氨酸(Hcy)水平;采用血管组织vonKossa染色、钙含量测定、碱性磷酸酶(ALP)活性和骨钙素(OC)含量测定以判断血管钙化程度,同时测定血浆脂质共轭烯(Diene键)含量反映其脂质过氧化水平.结果:钙化组大鼠血管yon Kossa染色可见大量黑色颗粒沉积,其血管的钙含量,碱性磷酸酶活性及骨钙素含量分别较对照组增加8.09倍、45.57%和2.81倍(P＜0.01).高蛋氨酸饮食的钙化组大鼠血管内钙含量较单纯钙化组增高了34.29%,而碱性磷酸酶活性及骨钙素含量则较单纯的钙化组降低29.13%和74.69%(P＜0.01).钙化组大鼠血浆脂质共轭烯含量与对照组比较无显著性差异,单纯高蛋氨酸饮食和钙化加高蛋氨酸饮食大鼠血浆脂质共轭烯含量较对照组增加了1.93和2.89倍(P＜0.01),而钙化加高蛋氨酸饮食大鼠血浆脂质共轭烯含量较单纯高蛋氨酸饮食大鼠又增加了32.90%(P＜0.01).结论:高同型半胱氨酸血症可以促进血管的钙化,可能与其所致的脂质过氧化程度增强有关.     

太湖不同解有机磷菌株胞外碱性磷酸酶活性对蓝藻碎屑的响应

浮游细菌胞外碱性磷酸酶在湖泊磷循环过程中具有关键作用, 但其与生物可利用性磷和颗粒态有机质之间的关系尚未得到充分的研究。研究以从太湖沉积物分离的3 株解有机磷细菌(OPB)和东湖水中OPB菌群为实验对象, 以蓝藻干物质为颗粒态有机质, 系统分析了模拟条件下OPB 的数量、不同大小颗粒所表现的胞外碱性磷酸酶活性(APA)与不同形态磷的浓度及其相互关系。从总体上讲, APA 与OPB 数量显著正相关, 且明显反比于溶解反应性磷(SRP)浓度, 在模拟实验过程中, 不同菌株(群)所对应的SRP 浓度均显著不同, 故其解磷能力各异。从绝对活性及其在总活性中所占的比例来看, 各处理间小颗粒(0.22—3.0 μm)APA亦明显不同, 而大颗粒(>3.0 μm)APA和溶解态(8 CFU/mL), SRP 浓度逐渐增加。实验后期(20—33 d)细菌数量大幅度减少, 且伴随SRP 和溶解态有机磷浓度的显著升高。因此, 在缺磷且富含颗粒态有机质的条件下, OPB 将产生胞外碱性磷酸酶, 分解有机磷, 进而满足其大量生长的需要, 同时有效改变溶解态磷的形态与生物可利用性。       

原代人胎成骨细胞体外培养方法的建立

我们分离、纯化人胎成骨细胞群,并在体外培养达15天。骨细胞群由5—6月龄的人胎长骨获得。使用形态学及生化指标测定,证实具有成骨细胞的典型特征:(1)形态学与外国学者报道的相一致;(2)碱性磷酸酶染色强阳性;(3)碱性磷酸酶含量较纤维母细胞酶含量高数倍至数十倍;(4)与纤维母细胞相比,成骨细胞有更高的钙摄入率;(5)在体外培养条件下可以发生钙化。纤维母细胞不具上述特点。使用成骨细胞做为生物学模型,可为体外条件下研究人体骨细胞的生理、病理及临床研究提供良好的实验手段。     

碱性磷酸酶在文昌鱼胚胎和幼体中表达图式的研究

研究组织特异性酶在胚胎发育中的表达图式对于研究细胞,组织和器官的分化具有重要意义。本文以BCIP为底物研究了碱性磷酸酶在文昌鱼胚胎和幼体中的表达图式,在囊胚、原肠胚和神经胚早期（12－13）未检测到碱性磷酸酶的特异性表达;到神经胚中期（15小时,约6个环节）,碱性磷酸酶在胚胎每一体节的中部开始表达,在胚胎中形成3－6个条纹（Fig.1);在18小时神经胚（9－10体节）中,碱性磷酸酶在肌节中表达（Fig.2);到24小时在后部内胚层中也开始表达（Fig.3）;在36－48小时幼体中,碱性磷酸酶在消化道中强烈表达,但在咽鳃区不表达,同时在肌节中仍有弱的表达（Fig.4)。研究表明碱性磷酸酶可能在肌节的发育过程中具有一定作用。碱性磷酸酶在消化道中的表达与这一时期消化道开始行使功能有关。另外,L－苯丙氨酸只抑制36、48小时文昌鱼肠碱性磷酸酶活性,不抑制其体节肠碱性磷酸酶活性（Fig.5)。表明文昌鱼至少存在两种碱性磷酸酶：在消化道中表达的是一种肠型的,与脊椎动物碱性磷酸酶可能为同一类型;另一种主要在肌节中表达,可能是组织非特异性的碱性酸酶。以上结果说明文昌鱼早期发育中碱性磷酸酶的表达与脊椎动物相似,具有时间和组织特异性。     

新型旋转壁式生物反应器内三维组织工程骨的构建

利用微载体悬浮培养法将成骨细胞在旋转壁式生物反应器内进行大规模扩增,并检测细胞的组织形态和生物功能.然后以此作为种子细胞,分别以2×10⁶个/ml和1×10⁶个/ml两种密度接种到支架材料上,于旋转壁式生物反应器(RWV)内进行三维组织工程骨的构建.并将所构建的骨组织分别进行倒置显微镜(inverted microscope)、扫描电镜(SEM)、碱性磷酸酶(ALP)、矿化结构和AO/EB双重荧光染色等生物学性能检测,以及对培养过程的营养物质代谢情况进行监控和分析.结果表明,在RWV中培养的骨组织生长良好,分泌大量胶原纤维,并有矿化基质和新骨样组织形成. 由上述结果可断定,通过RWV内部流体对流所产生的应力刺激,可提高成骨细胞碱性磷酸酶的活性表达,并加速矿化结节的形成,从而完成成骨细胞的快速增殖与分化以及工程化组织的三维构建.     

金黄地鼠不同组织碱性磷酸酶同工酶研究

采用聚丙烯酰胺圆盘电泳方法,分析了金黄地鼠血清,肝脏,心脏和骨骼肌4种组织的碱性磷酸酶同工酶。结果表明,在同种动物中不同组织的碱性磷酸酶谱具有明显的组织特异性,并且各部门酶带有重叠现象。在不同组织中碱性磷酸酶具有特异性,这是与各组织的生理功能相适应的结果。     

原花青素交联去细胞牛颈静脉带瓣管道的实验研究

目的:探讨原花青素(Proanthocyanidin,PA)交联去细胞牛颈静脉带瓣管道(valved bovine jugular vein conduit,BJVC)的方法和效果,为其在心血管外科和组织工程中的应用奠定实验基础.方法:新鲜BJVC 24根,随机分为原花青素交联组(PA组,n=8),戊二醛(Glutaraldehyde,GA)交联组(GA组,n=8)及新鲜对照组(Fresh组,n=8).分别检测各组牛颈静脉带瓣管道的生物物理性能.同时采用溶血实验和细胞毒性实验对PA和GA交联组分别进行生物学评价.结果:1.细胞成分去除彻底,纤维支架保存完整;2.固定指数检测显示虽然PA较GA交联速度慢,但两种交联剂交联效果无明显差异.3.生物物理性能检测显示:PA组管道厚度、管腔直径与新鲜对照组相当(P＞0.05),且优于GA组(P＜0.05);PA组合水量高于GA组(P＜0.05);两种方法交联后热皱缩温度、断裂强度、断裂延伸率均明显增强(P＜0.05),且PA组织断裂强度和断裂延伸率优于GA组(P＜0.05);Fresh组浸泡8d后失重率为98％,而PA组和GA组分别为3.68％和4.31％,两组间无显著差异.4.生物学评价结果表明,PA组细胞毒性低于GA组(P＜0.05);溶血实验结果表明两组溶血率均＜5％,符合国家生物材料溶血试验标准,且PA组明显低于GA组.结论:PA交联的BJVC具有良好的生物物理学特性,较低细胞毒性,为PA交联BJVC的深入研究做了初步探讨.     

补镁对大鼠血管钙化的影响

目的:在大鼠血管钙化模型上,观察外源性补充硫酸镁对大鼠血管钙化的影响,以探讨硫酸镁在血管钙化中作用及机制。方法:用维生素D3加尼古丁诱导大鼠血管钙化,von Kossa染色、钙含量测定及碱性磷酸酶活性测定判断血管钙化程度;用半定量RT-PCR方法测定血管钙化标志分子骨桥蛋白mRNA水平;用生物化学方法测定血管一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果:钙化组大鼠血压升高,收缩压较对照组高27%(P<0.05);血管von Kossa染色见血管中膜弹性纤维间可见大量棕黑色颗粒沉积,主动脉钙含量及碱性磷酸酶活性分别较对照高3.9倍和3.4倍(P<0.01),钙化血管组织骨桥蛋白mRNA表达上调40%(P<0.01),血管钙化后可加重血管组织过氧化损伤;而诱导钙化后外源性补充硫酸镁可减轻血管钙化程度,与钙化组比较,低、高剂量硫酸镁组均明显缓解上述指标的变化。结论:诱导血管钙化后外源性补充硫酸镁可以减轻大鼠血管钙化和血管损伤程度。     

6-BA、IAA、GA_3与ABA对木枣果实成熟衰老的调控作用

在木枣白熟期,用不同的植物激素处理果实,通过检测其生理生化变化,研究6-BA、IAA、GA3与ABA对枣果实成熟衰老的调控作用。结果显示,6-BA、IAA、GA3和ABA处理后枣果中DNA含量差异较为明显,其中,ABA和6-BA处理效果显著;GA3和IAA处理后枣组织中的丙二醛(MDA)含量明显低于对照组,6-BA和ABA处理则相反;除ABA处理外,枣组织中脯氨酸(Pro)含量明显低于对照组,维生素C(Vc)含量变化则相反;过氧化氢酶(CAT)活性表现差异很大,ABA和6-BA处理CAT活性显著高于对照组,IAA和GA3处理则相反。6-BA、IAA、GA3与ABA的生理作用在多方面表现为相互促进与互为拮抗的关系,有调控木枣果实成熟衰老的作用。     

碱性磷酸酶在文昌鱼胚胎和幼体中表达图式的研究(英文)

研究组织特异性酶在胚胎发育中的表达图式对于研究细胞、组织和器官的分化具有重要意义。本文以 ＢＣＩＰ为底物研究了碱性磷酸酶在文昌鱼胚胎和幼体中的表达图式。在囊胚、原肠胚和神经胚早期（１２～１３小时）未检测到碱性磷酸酶的特异性表达;到神经胚中期（１５小时,约６个体节）,碱性磷酸酶在胚胎每一体节的中部开始表达,在胚胎中形成３～６个条纹（Ｆｉｇ．１）;在１８小时神经胚（９～１０体节）中,碱性磷酸酶在肌节中表达（Ｆｉｇ．２）;到２４小时在后部内胚层中也开始表达（Ｆｉｇ．３）;在３６～４８小时幼体中,碱性磷酸酶在消化道中强烈表达,但在咽鳃区不表达,同时在肌节中仍有弱的表达（Ｆｉｇ．４）。研究表明碱性磷酸酶可能在肌节的发育过程中具有一定作用。碱性磷酸酶在消化道中的表达可能与这一时期消化道开始行使功能有关。另外,Ｌ－苯丙氨酸只抑制３６、４８小时文昌鱼肠碱性磷酸酶活性,不抑制其体节肠碱性磷酸酶活性（Ｆｉｇ．５）、表明文昌鱼至少存在两种碱性磷酸酶：在消化道中表达的是一种肠型的,与脊椎动物碱性磷酸酶可能为同一类型;另一种主要在肌节中表达,可能是组织非特异性的破性磷酸酶。以上结果说明文昌鱼早期发育中碱性磷酸酶的表达与脊椎动物相似,具     

环氧化合物交联牛颈静脉带瓣管道的体内抗钙化性能评价

目的:探讨环氧化合物交联的牛颈静脉带瓣管道的体内抗钙化性能.方法:取新鲜牛颈静脉带瓣管道16根,分为环氧化合物交联组、戊二醛交联组,经二种不同的方法处理后,建立犬右室肺动脉重建动物模型,观察10个月,采用原子吸收光谱法测定牛颈静脉的组织钙含量;von kossa 钙盐染色观察组织钙化情况;并对比研究重建后牛颈静脉的组织结构变化.结果:经环氧化合物交联的牛颈静脉管道的钙化程度轻,管壁及瓣膜的抗钙化性能比经戊二醛固定处理的均有明显提高.结论:环氧化合物交联方法与传统的戊二醛交联方法相比较,能较好的提高牛颈静脉体内抗钙化性能.     

B型烟粉虱与温室白粉虱不同虫态的碱性磷酸酶性质比较

为了探明B型烟粉虱Bemisia tabaci B-biotype 和温室白粉虱Trialeurodes vaporariorum体内的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)在两者竞争替代中所起的作用,以对硝基苯磷酸二钠 (pNPP)为底物,采用个体测定和群体测定的方法,研究比较了2种粉虱不同虫态中该酶的性质。结果表明：2种粉虱的碱性磷酸酶比活力在整个发育历期均逐渐增加,成虫期达到最大。温室白粉虱2至4龄若虫（伪蛹）期的碱性磷酸酶比活力分别是B型烟粉虱对应龄期酶比活力的2.58、2.68和3.14倍; B型烟粉虱雌雄成虫的碱性磷酸酶比活力分别是温室白粉虱雌雄成虫酶比活力的1.24和1.26倍,且2种粉虱雌虫的酶比活力显著大于其雄虫。2种粉虱2龄若虫到成虫的碱性磷酸酶最适pH均为7.8,最适温度均为47℃;在1龄若虫中均未能检测到该酶活性。测定并比较2种粉虱不同虫态碱性磷酸酶动力学特征参数的结果显示,温室白粉虱碱性磷酸酶在3、4龄若虫的亲和力以及在2, 3, 4龄若虫的酶蛋白浓度均显著大于B型烟粉虱的对应值,而在成虫期2种粉虱的亲和力、酶蛋白浓度无差异,B型烟粉虱的活化能显著小于温室白粉虱。据此推测,B型烟粉虱利用碱性磷酸酶在若虫期进行组织骨化和生长发育不如温室白粉虱,但羽化为成虫后利用其进行解毒代谢则可能强于温室白粉虱。     

CKD-5期肾病患者血清FGF-23水平与血管钙化的关系

为了探讨终末期肾病(ESRD)患者血清成纤维细胞生长因子23(FGF-23)水平与心血管钙化的关系。我们选取了2015年9月~2016年5月在我院各科室接受治疗的ESRD患者68例为实验组,选取46例健康成年人为对照组。使用超声和腹部X线平片对心血管和腹主动脉血管钙化情况进行评定,同时测量成纤维细胞生长因子23(FGF-23)、血清肌酐(Scr)、钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血红蛋白(HB)、甲状旁腺激素(i PTH)各项指标的含量。ESRD组患者FGF-23水平高于对照组,差异有统计学意义(p0.05),ESRD组患者FGF-23水平与Scr、P、iPTH、ALP呈正相关(r=0.423~0.687),与Ca、TC、TG、HB无相关性(r=-0.014~-0.113)。钙化组患者FGF-23水平高于非钙化组,差异有统计学意义(p0.05)。ESRD患者血清FGF-23水平的升高与心血管钙化的发生发展密切相关。