一个水解纤维素的嗜热厌氧菌新种

本文报告了一株分解纤维素的嗜热厌氧菌。该菌株细胞革兰氏阴性,直或微弯杆状,大小0.2-0·6x1·5—9 0μm,以单端丛生鞭毛游动,形成端生膨大芽孢。可利用多种碳水化合物。在纤维素培养基中产生黄色。发酵纤维素的主要产物为乙醇、乙酸、CO2和H2。最适生长温度60℃,生长温度范围40—70℃;最适生长pH7．3—7．5。DNA中G+C含量为34mol％。经鉴定,它与已知的嗜热纤维素水解菌均有较大差别,定名为产黄纤维素梭菌(Clostridiumcelluloflavum sp．nov．)。     

梭菌属的一个新种——产气梭菌

从豆腐废水为原料的厌氧降解反应器中,采用亨盖特氏厌氧技术,分离到两株厌氧生芽孢的杆菌,革兰氏染色通常为阴性。直杆或稍弯杆形,以周生鞭毛运动。芽孢椭圆或卵圆形,不膨胀细胞,通常次端生,最适生长温度为30—37℃,在45℃不生长。在pH 4．5或9．0也不生长。6．5％NaCl抑制其生长。能发酵多种碳水化合物。在PYG培养液中从葡萄糖产生大量的H2和CO2中量的乳酸和少量的乙酸、丁酸、乙醇和丁酵。不利用柠橡酸盐和丙酮酸盐。DNA中G+C含量为41.2mol％。经鉴定为棱菌属(又名校状芽孢杆菌属)的一个新种,命名为产气梭菌(Clostridium aerogenes sp.nov.)。     

一株厌氧纤维素分解细菌的分离和鉴定

从猪粪、玉米秸作原料的甲烷发酵瓶中,分离到一株中温厌氧纤维素分解细菌。在纸浆纤维素琼脂滚管中的表层菌落为圆形,具有不规则边缘,深层菌落为扩散形。菌落白色或淡黄色,周围溶纤维素透明圈的直径一般可达10一30mm。细胞革兰氏染色阴性,稍弯杆状,0．6一0.8×2—5．5μm(活细胞),具有周生鞭毛,能运动。芽孢卵至球形、端生(有时次端生),直径1—1．2×1—1．5μm。最适生长温度35一40℃,最适pH7．0—7．5。DNA的G+C含量为35mol％(热变性中点方法)o该菌利用木聚糖、纤维二糖、淀粉、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖、麦芽糖和七叶苷。用纤维素或葡萄糖发酵,产物有氢、二氧化碳、乙醇、乙酸、丁醇和丙酮酸。该菌株与c菌株十分相似“’,认为它们是同一个种。     

一个分解纤维素的瘤胃梭菌新种

报道了一个厌氧中温分解纤维素的瘤胃梭菌新种。在RGCA培养基中,细胞杆状、0.6～1.0×4.0～6.0lm,单生或成对,革兰氏阳性,能运动。芽孢卵～球形,端生或次端生,使细胞膨大。菌落圆形、黄色、边缘不整齐。在纤维素琼脂滚管中培养24～48h,菌落周围产生溶纤维透明圈。生长的最适条件是37～40t和pH6.5～7.0。所需要的生长因子为多种挥发脂肪酸(VFAs)、生物素、对氨基苯甲酸和盐酸吡哆醇。纤维素、纤维二糖、糖原、淀粉和麦芽糖等可作为生长底物。不能发酵葡萄糖、果糖、七叶灵、苦杏仁苷、阿拉伯糖、乳糖、甘露糖、核糖、蔗糖,木糖、鼠李糖、甘露醇、肌醇和山梨醇等。不能水解明胶。发酵纤维二糖产生乙酸和丁酸。DNA的G+c含量为35.9mol％(Tm)。该分离菌株与已知梭菌均有不同,故命名为瘤胃梭菌新种(Clostridlum rurnenum sp. nov. Zhang, Tan & Liu)。保藏号为AS 1.1862。     

昆虫病原菌苏云金芽孢杆菌群(Bacillus thuringiensis Group)的分类

采用形态、生化、血清学的方法对国外引种的15株巳知菌和本国51株未知菌进行了变种的分型研究。结果表明：苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)作为有益的细菌资源在藏国分布较广。51株菌中属于血清型H1苏云金芽孢杆菌苏云金变种(Baeillus thuringiensisvar. Thuringiensis)有11株,血清型H50-5b苏云金芽孢杆菌蜡螟变种(B．Thur．Var．Galleriae)31株,血清型H4-4b苏云金芽孢杆菌松蜩变种(B.thur. Var. dengrolimut)3株,血清型H4-4a。苏云金芽孢杆菌肯尼亚变种(B. thur. Var kenyae) 5株,同时发现血清型H．苏云金芽孢杆菌玉米螟变种(B. thur var. ostrinia,)一株。玉米螟变种不同于该菌群的巳知菌株,认为是一个新变种。实践证明,利用血清学抗原抗体具有高度特异{生的凝集反应来鉴别苏云垒芽孢杆菌变种,简便,快速,准确。而该群噬菌体却不能作为区分变种的标准。     

活动甲烷微菌的分离和性状

应用改良的Hungate技术,从湖南省常德市酒厂下水道的污泥中分离到一株产甲烷菌cc8l。该菌株细胞短杆状(0．6—0．8×1．5—2．0Fro),两端圆钝,具一根端生鞭毛,能运动,不形成芽孢,革兰氏阴性,通常单个存在,从不成链状a菌落很小,圆形,直径0．7—1mm,凸起,边缘完整,半透明,初为乳白色,后中央褐黄色。菌株只能利用H,／co,或甲酸盐作为碳源和能源,不能利用CH30H、CH,COONa、CHsNH,。在培养基中分别加入牛的瘤胃液、酵母膏、胰酶解酩蛋白均能刺激菌株的生长和产甲烷,但不需夕。．源辅酶M。生长温度25。一45℃,最适生长温度40℃。生长pH值在5．5—7．5,最适生长pH7．0左右,菌体倍增时间为Il12．5小时,根据形态和生理性状,cc8l菌株与活动甲烷微菌(Jdethanorobium mobile)很相似,确定为活动甲烷敢菌。     

芽孢杆菌属产生的胞外多糖的研究

不同芽孢杆菌能产生不同的胞外多糖,根据多糖中的中性糖组成,可以把产生多糖的芽孢杆菌划分为三大类：第一类为中性糖由甘露糖和葡萄糖组成的菌株,计有B. subtils, B. pu-milus, B alvei B. cereus, B. sphaerieus, B. lichniformis, B. laterosporus, B．Pulvifaciens,B.brevis,B．Mycoides,B．Polymyxa,B．Popilliae,B．Macerans,B. fitmus 和 B. megaterium; 第二类为中性糖由甘露糖,葡萄糖和半乳糖组成的菌株,计有 B.polymyxa,B. larvae, B. thermop-hilus 和 B．Mycoides;第三类为中性糖由四种以上单糖组成的菌株,计有B. megatetium, B.coagulans 和 B．Circulans B．Polymyxa 和 B．Larvae产生的胞外多糖是一种类琼脂型的多糖,它们的水溶液(1％)具有加热熔化,冷却后凝固的特征,这种多糖是酸性多糖,它由甘露糖、葡萄糖,半乳糖和糖醛酸组成。     

球形芽孢杆菌Ts-1灭蚊毒蛋白的酶联免疫吸附测定

通过Sephadex G—200柱层析纯化得到球形芽孢杆菌Ts-1毒蛋白,其中主要是42Da和43kDa两种毒蛋白。用此毒蛋白免疫家兔获得抗血清。利用ELlSA双抗体夹心法比较测定了三种灭蚊球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)高毒株和两种无毒株,证明ELlSA具有很强的特异性。ELISA测定球形芽孢杆菌Ta-1纯化毒蛋白,最低可检值为1．56 x 10-5mg／ml。球形芽孢杆菌Ts—1发酵液的最低可检度为1：16000倍稀释。ELISA测定12和24小时发酵培养的Ts—1样品处理液中毒蛋白的含量,分别为0．049mg／ml和0．22mg／ml,毒蛋白含量相差4.59倍。而相应的生物测定LC50。值分别为0．71 ppm和0．154 ppm,毒力相差4.61倍。 ELISA与生物测定方法结果吻合。     

枯草芽孢杆菌BF7658a-淀粉酶的性质

枯草芽孢杆菌(Baeillas subtilis) BF7658产生的a-淀粉酶(EC 3．2．1．1)在免疫学上与解淀粉芽孢杆菌(B．Amyloliquefaciens)产生的液化型一淀粉酶相同。 并且二者的a-淀粉酶的淀粉水解产物的层析谱带相同,分子量相等(约55000道尔顿),等电点相近(5．12和5．28);B．Subtilis Marburg 168a-淀粉酶分子量为64000道尔顿,等电点为6．12。因此,B.subtills BF7658产生的a-淀粉酶是液化型a-淀粉酶。因而建议将B．Subtilis BF7658改名为B．Amylolique]aeiens BF7658。     

土壤来源的五个苏云金芽孢杆菌新亚种的鉴定

从中国土壤中分离的大量苏云金芽孢杆菌菌株中鉴定出H42、H43、H56、H60及H62等5种新H血清型,并进行了形态、培养特征、生化反应、晶体蛋白质成分及毒力特性等项检测鉴定,鉴定了5个苏云金芽孢杆菌新亚种： Bacillus thuringiensis subsp. jinghongiensis (H42), B.thuringiensis subsp. guiyangiensis (H43),B.thuringiensis subsp. rongseni(H56),B.thuringiensis subsp. pingluonsis(H60)及B.thuringiensis subsp. zhaodongensis(H62) 。毒力生物测定证明5个新亚种的代表菌株对棉铃虫(Heliothis armigera)\,小菜蛾(Plutella xylostella)\,柳蓝叶甲(Plagiodera versicolora)幼虫均无毒力。H42、H43、H56、H60对埃及伊蚊(Aedes aegypti)\,斑须按蚊(Anopheles stephensi)及尖音库蚊(Culex pipiens)亦均无毒;H62对埃及伊蚊无毒,但对尖音库蚊与斑须按蚊有低毒。     

芽孢杆菌E2菌株纤维素酶形成条件的研究

芽孢杆菌E,菌株(Bacillus sp.strain E2)能在55℃下良好生长并在培养液中大量积累胞外纤维素酶(190 mu／ml培养液),所产生的纤维素酶为单一的CMCa se。对芽孢杆茁E2菌株产酶条件进行了研究． 该菌产酶的最适培养基装量为200ml/500mI三角瓶,最适起始pH为6 5,最适产酶温度为45℃,产酶高峰在培养时间8—12小时。E2菌株不能利用单一的无机氮源形成纤维素酶。酪蛋白是试验过的供E2菌株形成纤维素酶的最好氮源,其用量为3g／L。CMC—Na,纤维二糖,能作为碳源供芽孢杆菌E2菌株形成纤维素酶。高浓度的葡萄糖(8g／L)对芽孢杆菌E2菌株纤维素酶的形成有抑制作用。天然纤维素不能作为芽孢杆菌E2菌株形成纤维素酶的碳源。     

湖南张家界的丝孢菌I．假尾孢属

本文报道了假尾孢属的6个种,其中有2个新种,即：枫杨假尾孢(Pseado-cercospord pterocaryae Gu et W. X. Zhao)和清风藤假尾孢(Pseudocercosporasabiae Guo et W．X．Zhao);3个新组合：紫珠假尾孢[Pseudocercospora callicarpae(Cooke) Guo et W. X．Zhao], 蕺菜假尾孢[Pseudocercospora houttuyniae(Togashi& Kats) Guo et W．X．Zhao],冬青假尾孢[Psegocercospora mate (Speg．) Guo etW．X．Zhao]。两个新种的模式标本保存在中国科学院微生物研究所真菌标本室,其等模式标本保存在中国林科院林业科学研究所病理标本室。 枫杨假尾孢(Pseudocercospora pterocaryae Guo et W．X．Zhao)斑点叶两面生,近圆形,直径O．5—12 0 mm,无明显边缘,叶面褐色至暗褐色,叶背灰褐色,子实体叶背生,具表生菌丝。子座生于表皮下,近球形。分生孢子梗浅青黄色至青黄色,不分枝,0—4隔,9．7—73．5×3．7—4．3 μm。分生孢子倒棍棒形至倒棍棒一圆柱形,极浅的青黄色,光滑,干燥,具2—10个不明显的隔膜,35．0—99．5×3．7—4 3μm。 清风藤假尾孢(Pscudocercospora sabiae Guo et W. X. Zhao)斑点叶两而生,圃形,直径1．5—4．0μm。叶面黄褐色至褐色,外围以暗褐色细线圈,有时还具浅黄褐色晕圈,叶背中度褐色。子实体叶面生,具表生菌丝,无子座。分生孢子梗青黄褐色至浅褐色,平滑,具2一10个隔膜,17．0—162．O×3．0—3．9(一4．3)μm。分生孢子倒棍棒形至圆柱形,浅青黄色,平滑,干燥,3—8隔,43．0—99．5×2．8—3．9(一4．3)μm。     

蛋白酶产生菌种间原生质体融合的研究

Baci llus属中的一些种是生产蛋白酶的重要菌株。 采用2500u／ml溶菌酶制备的两种芽孢杆菌原生质体在30％聚乙二醇(Mw6000)的作用下,成功地获得了枯草芽孢杆菌(Bacillusfubtilis)和地衣状芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的种间融合重组子。融合频率为7．47 x10—2．28×10-5经过四代的移接验证,融合子的稳定率达到12—20％。结果表明,两种产蛋白酶的芽孢杆菌融台后,营养缺陷和抗药特性方面可以互补;菌落形态发生某些变化;生产性能有较大的改进。     

中国的新月孢属真菌

本文报道了我国新月孢属真菌Harposporium anguillulae,Harcuatum,H crassum,Hlilliptotanum,H. oxyeoracum和一个新种——小旋孢新月孢Harposporium microspirale sp,nov.。新种主要特征为球形瓶梗上着生1～3个小梗,孢子微旋,9．6～13．9×0．6～0．9μm.     

几株解纤维素生防芽孢杆菌的分子鉴定及其抗逆促生特性分析

【目的】探究青藏高原解纤维素生防芽孢杆菌资源。【方法】采用BOX-PCR指纹图谱分析、gyr B基因及16S r RNA基因序列分析,对分离自青海互助北山桦树根围的5株芽孢杆菌进行分子鉴定;通过CMC法检测菌株降解纤维素活性;平板对峙法检测菌株拮抗病原真菌及病原细菌活性;检测菌株的耐盐性、低温适生性;测定菌株促种子萌发及幼苗生长特性。【结果】5株菌均鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens;具有显著降解纤维素的特性,在CMC平板上形成纤维素降解透明圈直径≥20 mm;对油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、瓜类枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae)及植物梨火疫病菌(Erwinia amylovora)均有显著拮抗活性;菌株可在含Na Cl浓度为11%的LB平板上正常生长,在10°C低温条件下生长良好;菌株BS11、BS12菌悬液(细胞浓度106 CFU/m L)可促进水稻种子萌发及幼苗生长。【结论】5株B.amyloliquefaciens菌株为抗逆性强的、具有降解纤维素活性的生防芽孢杆菌,在青藏高原生态农业及畜牧产业中具有应用潜力。     

高活性纤维素酶菌株778-1的筛选鉴定与产酶条件的研究

我们从湖南省隆回县河岸土中分离筛选到产生高活性纤维素酶的野生菌株778-1,其酶活性比优良的木霉野生菌株高一倍[1,2],并对秸杆类天然纤维素有较强的降解作用。此菌株按《青霉鉴定手册》[3]鉴定属于散枝亚组微紫青霉系(P．Janthinellum series)鱼肝油青霉(P．Piscarium wcstling)和微紫青霉(P. janthinellum biourge)的中间类型。最适培养基成分为：苞米秸粉(1号)10g,营养盐溶液(NaNO,1.5％,(NH4)：SO4 0．8％,KH2PO4 0．2％,MgSO47H2O 0．05％)30ml。pH5-5—6．0,25—30℃培养96小时。在此条件下该酶分解滤纸、CMC、棉花的活性分别为200—220 mg／g.h、4000一4200mg／g．H 580--650mg／g．H。在上述 培养基中加入0．2—0．6g豆饼粉酶活性可以进一步提高。     

苏云金芽孢杆菌鲇泽变种7-29杀虫蛋白质结构基因的改造和表达

对苏云金芽孢杆菌鲇泽变种(Bacillus thuringiensis var.atezawai)7—29杀虫蛋白质基因调控区(181bp)和第五活性区(217bp)修饰后,在它的5’端和3’端分别插入一个人工合成并带有启动密码子(ATG)的。Dapter I(15bp)和PCR合成并带有终止密码子(TAA)的第五活性区(229bp)。使负责编码N-端肽的DNA片段,改造成既有启动翻译功能又有终止翻译功能的结构基因。经过western blotting检测,改造后的结构基因能在E．Coli JM103中正常表达。生物杀虫定性实验结果表明,3'端和5'端全改造后的杀虫基因比只改造3端的杀虫基因更具有较好的杀虫活性。     

嗜热厌氧纤维素降解细菌的分离、鉴定及其系统发育分析

利用纤维素降解细菌和纤维素粘附的方法分别从新鲜牛粪、高温堆肥和本实验室保存的纤维素降解富集物中分离得到4株嗜热厌氧纤维素降解细菌。分离菌株为革兰氏染色阴性,直的或稍弯曲杆菌,菌体大小为0.4μm～0.6μm×3μm～15μm,严格厌氧,不还原硫酸盐,形成芽孢。多数芽孢着生于菌体顶端。分离菌株能利用纤维素滤纸、纤维素粉Whatman CFII、微晶纤维素、纤维素粉MN300和未经处理的玉米秆芯、甘蔗渣、水稻秸杆。分离菌株在pH6.2～8.9、温度45℃～65℃范围内利用纤维素,最适pH为7.0～7.5,最适温度为55℃～60℃,发酵纤维素产生乙醇、乙酸、H2和CO2。分离菌株还可利用纤维二糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖、山梨醇作为碳源。部分长度的16S rDNA序列分析表明,分离菌株EVAI与Clostridium thermocellum具有99.8%相似性。     

苏芸金杆菌的质粒检测及载晶体蛋白合成基因的质粒在不同菌株间的传递

分析了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)7个变种19个野生菌株及无晶体(sp+cr-)和无芽孢(sp-cr+)突变株的质粒图型,证实了苏芸金杆菌的质粒组成既有变种的特异性,亦有菌株的特异性。载有晶体蛋白质合成基因的质粒,B. thuringiensis var．Kurstaki HD-191 菌株可能为42和50Mdal,B．Thuringiensis var. aizawai HD-282菌株为47Mdal, B．Thuringiensis var．Israelensis IPS-82菌株为57Mdal的质粒,而B．Thuringiensis var. wuhanensis 140 菌株的此种基因则可能不在质粒上而在染色体中。HD-191载晶体蛋白合成基因的质粒以很高频率被传递给其无晶体突变株HD-1并在后者细胞中表达。B. thuringiensis var. israelensisIPS-82菌株和 B．Thuringiensis var. kurstaki 无晶体突变株HD—1之间载晶体蛋白合成基因质粒的传递未能成功,提示可能存在着不相容性的障碍。     

芽孢杆菌原生质体作为质粒DNA转化的受体

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) B3F 7658,短小芽孢杆菌(B. pumilus) AS 1.940,巨大芽孢杆菌(B．Megaterium) AS 1.941,和多粘芽孢杆菌(B. polymyxa) AS 1.878等菌株,既不能作为染色体DNA的转化受体,也不能作为质粒DNA的转化受体。用不同量的溶菌酶处理这些菌株形成原生质体,然后加pUB110质粒DNA,经聚乙二醇6000(PEG)诱导,在含新霉素(400μg／ml)的DM-3再生培养基上恢复细胞壁,培养48小时后,转化子数为1.0 x 103一4.6×105／μg DNA。若同时用PEG和Ca2+ 离子诱导,转化子数可提高2—3倍。质粒pUBll0用EcoRI酶切后,转化子数大大下降(2.0×102转化子／μg DNA)。Eco RI酶切后,用T4连接酶连成环状,转化子数有所增加(1．7×103转化子／μg DNA)。