5''-磷酸腺苷对小鼠脾细胞氧化应激损伤的保护作用

目的研究5'-磷酸腺苷(5'-AMP)体外抗氧化和对体外氧化损伤脾细胞的损伤修复能力。方法用化学比色法测定5'-AMP体外清除二苯代苦味酰基自由基(DPPH自由基)的能力;建立过氧化氢(H2O2)氧化损伤体外培养小鼠脾细胞模型,用MTT法检测5'-AMP修复受损伤脾细胞的作用,并分析其对细胞抗氧化体系及抗氧化能力的影响。结果5'-AMP具有剂量依赖性的体外抗氧化和清除活性氧能力,添加0·5mmol/L、1mmol/L、5mmol/L和10mmol/L5'-AMP均能显著修复H2O2诱导的脾细胞氧化损伤(P<0·05),总抗氧化能力和抗氧化酶类活力(P<0·01),5'-AMP添加量大于1mmol/L时,可显著降低丙二醛(MDA)含量(P<0·01)。其细胞培养液的氧自由基(ROS)水平逐渐降低,5'-AMP添加量为10mmol/L时,ROS水平接近对照组水平。结论5'-磷酸腺苷能显著修复氧化损伤,具有显著的抗氧化作用。     

鸟苷酸二钠体外抗氧化能力的研究

本文研究了鸟苷酸二钠（GMPNa2）对羟自由基和DPPH&#183;自由基的清除效果,同时建立了H2O2氧化损伤体外培养脾细胞模型,用MTT法检测GMPN％的修复及增殖作用,并分析了GMPNa2对细胞抗氧化体系及抗氧化能力的影响,以评价其抗氧化活性。结果表明：GMPNa2具有剂量依赖性的体外抗氧化和清除活性氧能力,10mmol／LGMPNa2的羟自由基清除能力高达96．644％,但DPPH清除率为6．589％。GMPNa2清除羟自由基与同浓度Vc相近,而其清除DPPH自由基的能力很弱。添加0．5、1、5和10mmol／LGMPNa2均能显著修复H2O2诱导的脾细胞氧化损伤（P〈0．05）,提高总抗氧化能力和抗氧化酶类活力（P〈0．01）。GMPNa2添加量大于1mmol／L时,可显著降低MDA含量（P〈0．01）。说明GMPNa2具有显著的抗氧化作用。     

茶多糖的抗氧化活性及对细胞氧化损伤的保护机制

茶多糖是一种从茶叶中提取的酸性糖蛋白, 具有良好的抗氧化活性。以自由基清除率为指标, 分析皖西南地区夏秋茶多糖的抗氧化活性, 基于H₂O₂和EDTA-Fe²⁺建立的外源性羟基自由基(·OH)损伤细胞模型和PMA诱导内源性羟基自由基损伤模型, 进一步探讨茶多糖对自由基损伤的修复作用机制。结果表明, 茶多糖具有良好的体外抗氧化活性, 对DPPH·和·OH均具有较强的清除效果, EC₅₀值分别为209.5和535.2 µg∙mL^-1, 最大清除效率与Vc相当。细胞增殖实验表明, 外源性和内源性自由基氧化损伤模型中细胞存活率均随着茶多糖浓度的增加而升高, 在茶多糖浓度为800 µg∙mL^-1时细胞存活率分别高达87.41%和85.84%, 且显著高于模型组(47.67%和48.03%)。在修复机制上, 利用激光共聚焦显微镜显影细胞内活性氧(ROS)分布以及荧光强度, 分析结果显示, 与模型组相比, 茶多糖对于细胞模型中外源和内源性ROS均具有明显的清除效果, 与体外抗氧化实验结果一致。茶多糖在体外表现出良好的自由基清除效率, 可在细胞水平上改善自由基损伤。该研究在细胞水平上揭示了茶多糖清除自由基的抗氧化损伤机制, 为后续进一步阐明茶多糖抗衰老作用奠定了基础。     

溶血卵磷脂对人内皮细胞CD73的调节与PKC的关系

目的：探讨溶血卵磷脂（LPC）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）胞外5’-核苷酸酶（CD73）的调节作用及其与蛋白激酶C（PKC）的关系。方法：将含已融合HUVEC的细胞培养皿分为4组（n=15）：①LPC组：培养皿中加入LPC10μmol/L;②CHE（白屈菜赤碱,PKC抑制剂）组：加入CHE100μmol/L及LPC10μmol/L;③AOPCP（α,β-甲基腺苷-5′-二磷酸,CD73抑制剂）组：加入AOPCP50μmol/L及LPC10μmol/L;④对照组：无干预。每组均于实验开始时加入乙烯-单磷酸腺苷（eAMP,5μmol/L）。在实验第15、30、45min测定各培养皿中乙烯-腺苷（eAD）含量。结果：在上述三个时间点LPC组HUVEC的eAD生成均较对照组显著增高（P〈0.05）,加入CHE使LPC的这种增加作用消失,其eAD生成与对照组无差别（P〉0.05）,而AOPCP组eAD生成较其它三组均显著减少（P〈0.01）。结论：LPC可兴奋内皮细胞胞外CD73,此作用可被PKC抑制剂CHE抑制,LPC上调CD73活性作用可能与PKC有关。     

3′－大豆苷元磺酸钠的体外抗氧化研究

为研究3′-大豆苷元磺酸钠（DSS）的体外抗氧化活性,测定了DSS对超氧自由基（02&#183;）、羟基自由基（&#183;OH）和1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基（DPPH&#183;）的清除能力,及其对Fe^2＋诱导的脂质过氧化反应和β-胡萝卜素／亚油酸自氧化体系的抑制作用。结果表明,DSS对DPPH&#183;有一定的清除能力,对超氧自由基的清除能力较强,能很好地清除&#183;OH自由基,对脂质过氧化有一定的抑制作用,对β-胡萝卜素／亚油酸自氧化体系有明显的抑制作用。说明DSS的药理作用可能与其较强的抗氧化能力有关。     

热量限制对SH-SY5Y细胞氧化损伤的影响

目的观察热量限制培养条件下,SH-SY5Y细胞抗氧化应激损伤的能力。方法建立过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞损伤模型。体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组、损伤组（50、100、250、500、1 000μmol/L H2O2）、低糖组（2 g/L）、低糖＋损伤组,进行细胞形态观察、测定各组细胞的噻唑蓝（MTT）代谢率、乳酸脱氢酶（LDH）漏出率。结果与对照组比较,（50、100、250、500、1 000）μmol/L H2O2损伤1 h后MTT代谢率测定细胞活力,50μmol/L组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;其他组与对照组比较,随着H2O2浓度的增加,细胞活力呈递减趋势,差异具有显著性（P〈0.01）;选定250μmol/L H2O2组为损伤应激源。用低糖预处理细胞24 h,给与250μmol/L H2O2损伤1 h后测定MTT代谢率显示,与对照组比较,损伤组活力明显下降,低糖组活力上升（P〈0.01）;与损伤组比较,低糖＋损伤组活力明显上升（p〈0.01）;继续培养至7 h发现,与对照组比较,低糖组活力上升（P〈0.01）;与损伤组比较,低糖＋损伤组活力明显上升（P〈0.01）。进一步检测LDH漏出率显示,损伤1 h后结果显示,与对照组比较,损伤组漏出率明显增加（P〈0.05）,低糖组漏出率稍有减少（P〉0.05）;与损伤组比较,低糖＋损伤组漏出率明显减少（P〈0.01）;继续培养7h显示,低糖7h组与低糖1 h组比较,漏出稍有增多（P〉0.05）,低糖＋损伤组7 h组与低糖＋损伤组1 h比较漏出率稍有增加（P〈0.05）;细胞形态学观察显示,未加损伤之前,低糖组的细胞形态,与对照组比较无明显改变。加入损伤药物1h后的细胞形态与对照组比较无明显改变。加入损伤药物7 h后的细胞形态,低糖组和对照组细胞突起伸展良好细长,损伤组可见细胞数目明显减少,死细胞多,突起回缩,细胞明显变圆,贴壁性不好,透光性差。结论热量限制能提高神经细胞的抗氧化应激能力,增加细胞生存率,降低死亡率。     

半胱胺对肝细胞代谢油酸过程中ROS生成和ATPase活性的影响

目的 研究了半胱胺（CS）对油酸（0A）代谢过程中自由基（ROS）生成和ATP酶（ATPase）活性的影响。方法 通过培养体外小鼠原代肝细胞,添加不同浓度的OA作用24h,通过luminol化学发光法,TBA法、DTNB法、无机磷比色法分别测定ROS、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）和Na^＋-K＋-ATP酶活性;选取OA（0,150,250taM／L）三个梯度,添加CS（-,50,100,150,200,250,300,350,400,450,500taM／L）,测定相同的指标。结果 添加OA大于150μM／L时,ROS、MDA生成量急剧升高,ATPase活性显著降低（P〈0．05）。添加CS能提高GSH,减少ROS和MDA的生成,提高ATPase的活性,且作用的效果显著（P〈0．05）。但大量添加CS（350-500μM／L）则效果相反。结论 大量添加OA会引起肝细胞氧化应激;添加CS能清除ROS,提高ATPase活性;并伴随OA添加量的增加,CS的最佳需要量也增加。     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷诱导鼻咽癌细胞株Syk基因启动子去甲基化的研究

利用5-杂氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-2′-deoxycytidine,5-aza-CdR）处理体外培养的鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2及永生化非癌性人鼻咽上皮细胞株NP-69,采用BS-PCR、Q-RT-PCR及Westernblot方法分别检测经5μmol/L的5-aza-CdR处理前后,各细胞株中Syk基因启动子甲基化状况及SykmRNA和蛋白质表达情况。探讨去甲基化药物5-杂氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-CdR）对鼻咽癌细胞株中脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）启动子甲基化水平及其表达的影响。结果显示,Syk基因启动子甲基化水平与鼻咽癌细胞分化程度呈负相关,两种鼻咽癌细胞株的Syk mRNA和蛋白质表达水平显著低于NP-69细胞（P〈0.01）;经5-aza-CdR处理后两种鼻咽癌细胞株的Syk基因启动子甲基化水平降低,Syk mRNA及蛋白质表达升高（P〈0.05）;高分化鼻咽癌细胞株对药物敏感性高于低分化鼻咽癌细胞株（P〈0.01）。由此可见,两种鼻咽癌细胞株中存在不同程度的Syk基因启动子甲基化状态,5-aza-CdR能有效逆转鼻咽癌细胞株Syk基因启动子的甲基化状态,升高Syk mRNA及蛋白质表达,同时鼻咽癌细胞分化程度越高恢复Syk基因表达的比率越高。     

γ-聚谷氨酸的抗氧化及对UV辐射致皮肤细胞光老化的修复作用

寻找天然抗氧化物用于修复皮肤光老化问题是目前的研究热点之一。γ-聚谷氨酸(γ-PGA)是由微生物发酵制备的一种天然高分子聚合物材料,具有清除自由基的能力,但其抗氧化、抗皮肤光老化效果及与γ-PGA分子量的关系尚未明确。本文中,笔者考察不同分子量的γ-PGA对超氧阴离子自由基(·O~-_2)、羟基自由基(·OH)和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(·DPPH)的清除能力。结果显示:不同分子量的γ-PGA对以上3种自由基均表现出一定程度的自由基清除活性,清除率可分别达31.36%、97.55%和74.64%。通过构建紫外线诱导小鼠皮肤成纤维细胞(L929)氧化损伤光老化模型,确定不同分子量的γ-PGA都能一定程度修复光老化细胞损伤并能减少光老化细胞中氧自由基(ROS)、氮自由基(NO)的增加,其中分子量3.0×10~5的γ-PGA修复光老化细胞损伤的效果最佳。     

蝉虫草菌丝体胞内和胞外多糖抗肝细胞氧化损伤比较研究

蝉虫草（蝉花）作为我国传统的中药材,是一种药食两用的虫生真菌,因含有丰富的活性物质而具有广泛的医疗保健价值。本研究以自由基清除率为指标分析蝉虫草胞内和胞外多糖的化学抗氧化活性,再以H₂O₂诱导的人肝LO2细胞氧化损伤为模型,进而分析比较二者对肝细胞氧化应激损伤的改善作用。结果表明,在化学抗氧化能力比较上,蝉虫草菌丝体胞外多糖有效清除?OH自由基、ABTS自由基和DPPH自由基的EC₅₀值分别为1.06mg/mL、0.96mg/mL和0.63mg/mL,而胞内多糖的EC₅₀值分别为3.71mg/mL、2.83mg/mL和1.70mg/mL,表明蝉虫草胞外多糖的化学抗氧化能力更强;在改善细胞氧化应激损伤比较上,与模型组对比,二者均能随着浓度递增而显著地提高细胞存活率,但胞外多糖比胞内多糖更强,当多糖浓度为5mg/mL时,胞外多糖细胞存活率达到92.36%,胞内多糖只达到82.07%;在调节细胞抗氧化酶清除ROS的机制上,与模型组对比,胞外多糖分别上调SOD酶活力2.51倍和CAT酶活力2.91倍,极显著地降低了细胞ROS水平（P<0.01）来改善细胞的氧化应激损伤作用。相应地,胞内多糖只上调了1.85倍和2.33倍,显著性地清除了ROS（P<0.05）,表明蝉虫草菌丝体胞外多糖具有更显著的抗肝细胞氧化损伤作用。本研究结果显示蝉虫草菌丝体胞外和胞内多糖均具有良好的抗肝氧化损伤活性,且胞外多糖比胞内多糖活性更好,为蝉虫草菌丝体多糖在保肝产品中的开发和应用提供了科学依据。     

瘦柄红石蕊次生代谢产物Biruloquinone的抗氧化作用研究

讨论了从瘦柄红石蕊Cladonia macilenta发酵液中分离得到的一种自然界罕见的菲醌化合物biruloquinone的体外抗氧化能力;分别采用DPPH·自由基清除法和ABTS·+自由基清除法对其抗氧化活性进行测定。结果显示,biruloquinone具有较高的抗氧化活性,且在检测浓度范围内对自由基的清除效果呈现剂量依赖关系,在浓度分别为100μg/m L和1.2 mmol/L时对DPPH·和ABTS·+自由基清除能力最大值分别达到90.83%和75.39%,其自由基半数清除浓度(EC50)分别为24.91μg/m L和0.488 mmol/L,在ABTS·+法中,biruloquinone的总抗氧化能力为2.5 TEAC。     

胞外三磷酸腺苷对铅胁迫下植物细胞损伤和过氧化氢及其清除酶水平的调节

细胞外三磷酸腺苷（extracellular adenosine-5'-triphosphate）是植物细胞的重要信号分子。以烟草悬浮细胞BY-2（Nicotiana tabacum L.cv.Bright Yellow-2）为材料,探讨了胞外三磷酸腺苷对铅胁迫下细胞损伤、H₂O₂（过氧化氢）含量及H₂O₂清除酶活性的影响。结果显示,随着Pb（NO₃）₂浓度的不断提高（30~400 μmol·L^-1）,细胞外三磷酸腺苷含量呈现出逐渐下降的趋势,但胞内三磷酸腺苷含量及细胞的受损伤程度逐渐增大;同时,H₂O₂含量和过氧化氢酶的活性均有所上升,并在200 μmol·L^-1 Pb（NO₃）₂处理下达到最大值,而过氧化物酶的活性则不断降低。较之Pb（NO₃）₂胁迫下的细胞,对Pb（NO₃）₂胁迫的细胞加入外源三磷酸腺苷使得细胞受损伤程度显著降低,H₂O₂含量减少,过氧化氢酶活性减弱,而过氧化物酶活性增强。实验结果表明,Pb（NO₃）₂胁迫诱导的植物细胞损伤和H₂O₂及其清除酶水平的变化能受到细胞外三磷酸腺苷水平的调节。     

大革耳子实体多糖抗氧化活性

作者对大革耳子实体多糖的抗氧化能力及单糖组分进行了分析,并探究了大革耳子实体多糖体外对羟自由基、超氧阴离子自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、2'-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸[2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS]自由基的清除能力和铁离子还原能力;以人正常肝细胞系LO2为材料建立了过氧化氢细胞氧化损伤模型,并探讨大革耳子实体多糖在细胞水平的抗氧化能力;通过苯酚硫酸法及HPLC检测了子实体多糖的单糖含量及组分。体外化学抗氧化实验结果显示,大革耳子实体多糖对羟自由基、超氧阴离子、DPPH自由基和ABTS自由基的清除能力较强,且具有较高的铁离子还原能力;细胞水平抗氧化实验表明,大革耳子实体多糖对人正常肝细胞系LO2的H₂O₂氧化损伤具有显著的保护作用,并能极显著提高受损细胞内过氧化氢酶（catalase,CAT）（P<0.01）及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）（P<0.01）的活力。大革耳子实体活性多糖主要单糖含量及组分依次为：葡萄糖（2 985.50mg/kg）、甘露糖（1 867.23mg/kg）、木糖（814.98mg/kg）、半乳糖（724.24mg/kg）、岩藻糖（443.72mg/kg）、葡萄糖醛酸（419.41mg/kg）、鼠李糖（81.18mg/kg）、阿拉伯糖（64.40mg/kg）、核糖（39.95mg/kg）、半乳糖醛酸（24.40mg/kg）。本研究结果为更好的推广应用和科学开发大革耳提供了基础资料。     

金樱子总黄酮体外抗氧化活性的研究

本文研究了金樱子总黄酮(RLTF)体外清除自由基的能力,并观察其对过氧化氢诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)抗氧化作用的影响。采用邻苯三酚自氧化法、水杨酸法、DPPH法分别测定RLTF对超氧阴离子自由基(O-·2)、羟自由基(·OH)、二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除率;Hoechst染色法分析各组细胞凋亡情况;MTT法测定细胞活力;分光光度法检测各组细胞中SOD、CAT、GSH-Px活性。结果显示,在20~200μg范围内,随着样品加入量增大,RLTF对·OH和DPPH·的清除率逐渐增大,而对O-·2的清除率则是先增大后减少;RLTF对O-·2的清除作用偏低,对·OH的清除率与芦丁相当,对DPPH·的清除能力则强于芦丁而弱于Vc。Hoechst染色观察结果表明RLTF预处理细胞后,能明显提高细胞的抗凋亡作用。与H2O2损伤组比较,不同浓度RLTF预处理组的细胞活力均显著升高(P0.01);不同浓度RLTF预处理组细胞中的SOD、CAT和GSH-Px活性均明显增加(P0.01),且呈剂量依赖性。上述结果表明,RLTF具有较强的自由基体外清除能力,能有效提高氧化损伤HUVEC细胞中SOD、CAT、GSH-Px的酶活性,其可能通过清除细胞内自由基和提高细胞抗氧化酶活性来提高细胞的抗氧化活性。     

人线粒体tRNALeu(UUR)基因氧化损伤与修复研究

人mtDNA比核DNA更易受到自由基的氧化损伤,这些损伤可以被线粒体内的DNA修复机制所修复,损伤与修复是决定突变是否产生的两个重要因素.为了确定氧化损伤与损伤后修复对mtDNA突变的具体影响,采用四氧嘧啶处理LO2细胞,这种试剂进入细胞后,经氧化还原反应生成的自由基与线粒体自身代谢产生的自由基类似,然后观察自由基对细胞mtDNA的氧化损伤与损伤后DNA修复的动力学变化.由于线粒体的正常功能为修复机制所必需,采用MTT细胞活力实验检测不同浓度四氧嘧啶处理下线粒体酶活力,发现9 mmol/L四氧嘧啶培养细胞1h后,线粒体琥珀酸脱氢酶功能在撤去药物后0,2,8和24 h时间点均无明显变化.提取各组细胞的mtDNA,用EndoⅢ和Fgp两种酶切除受氧化损伤的核苷酸,然后用碱性琼脂糖凝胶电泳分离大小不等的mtDNA,进行DNA印迹实验,地高辛-抗体-碱性磷酸酶系统显色,检测完整与断裂的mtDNA量,利用Poisson公式(s=-lnP0/P,P0为未断裂链光密度值,P为所有链光密度值总和)计算一个mtDNA分子的平均损伤频率,结果显示,9 mmol/L四氧嘧啶处理细胞1 h,链平均损伤频率由对照的0.11个/分子增加至5.60个/分子,明显增加了mtDNA上核苷酸的氧化损伤,除去药物后8 h,绝大部分损伤可被修复,损伤频率减至0.40个/分子,除去药物后24h核苷酸的氧化损伤恢复至正常水平.采用接头介导PCR(LM-PCR)检测MTTL1基因区域内单个核苷酸的损伤与修复动力学.这种方法可以检测各组mtDNA上MTTL1基因75 bp区域内单个核苷酸损伤的部位及频率.结果显示,人MTTL1基因存在20个易受氧化损伤的核苷酸热点,经与相应区域内文献报道的16个突变热点比较,有12个热点部位重合,而修复未显示热点部位或区域.结果提示,自由基对核苷酸的选择性氧化损伤是决定mtDNA点突变发生及发生部位的主要原因.     

老黑谷米中多酚化合物的提取及体外抗氧化活性研究

以老黑谷米面粉为原料,提取分离其中的可溶性多酚、游离多酚、酯化多酚、醚化多酚、键合多酚,利用比色法进行多酚和类黄酮含量测定,并采用DPPH自由基清除能力、铁离子还原/抗氧化能力测定（FRAP）、总抗氧化能力测定（TEAC）、还原能力测定（RP）和H2O2清除活性等5种不同的体外抗氧化测定体系进行抗氧化活性测定。结果表明：5种多酚中,可溶性多酚含量最高,酯化多酚含量次之,显著高于游离多酚、醚化多酚、键合多酚。多酚中类黄酮含量最高为键和多酚和可溶性多酚,显著高于其他3种多酚。5种多酚均有较高的体外抗氧化能力,键合多酚的DPPH自由基清除能力最高,可溶性多酚的H2O2清除能力、FRAP还原能力、RP还原能力和TEAC总抗氧化能力最高。本研究为老黑谷米的开发利用提供科学依据。     

荒漠土壤中两株抗氧化细菌的抗氧化生理生化特征

【背景】微生物在荒漠生态系统中经常面临多重胁迫,包括干旱、高温、UV辐射,这些环境胁迫使得荒漠土壤微生物极易在体内外积累大量的超氧离子或过氧化物,抑制其生长或者直接造成死亡。【目的】荒漠土壤细菌为适应荒漠环境表现出抗氧化特性,作为荒漠生态系统重要组成部分,对其抗氧化特性的研究为荒漠地区抗氧化资源的开发提供科学依据和技术基础,也对荒漠微生物抗氧化机制的挖掘奠定了基础。【方法】利用过氧化氢氧化筛选出两株具有强抗氧化性的荒漠土壤细菌:海床动性微菌AX6(PlanomicrobiumokeanokoitesAX6)和海洋考克氏菌KD4(Kocuriamarina KD4),通过测定其在过氧化氢条件下的生长曲线、细胞受损程度、抗氧化酶活性以及自由基清除能力,探究荒漠土壤微生物的抗氧化生理生化特征。【结果】两株细菌在低浓度过氧化氢中细胞丙二醛含量显著低于阴性对照大肠杆菌,在1.5mmol/L过氧化氢中菌株AX6的谷胱甘肽过氧化物酶活性可达108.33 U/mL,同时DPPH、超氧阴离子自由基的清除能力显著升高;此外,在3 mmol/L过氧化氢中菌株KD4的过氧化氢酶活性升高至1.16 U/mL,显著高于阳性对照耐辐射球菌,羟自由基的清除能力也显著升高。【结论】不同荒漠土壤细菌的活性抗氧化酶种类、自由基清除能力存在较大差异,表明荒漠土壤微生物抗氧化过程的多样性。     

铜藻多糖对H2O2诱导的HaCaT细胞氧化应激的保护作用

为探究铜藻多糖(Sargassum horneri polysaccharides, SHP)对H₂O₂诱导的人角质形成细胞(HaCaT)氧化应激损伤的保护作用,测定了SHP对总抗氧化能力(T-AOC)、DPPH自由基、羟自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O₂^·-)的清除作用,以评价SHP的体外抗氧化能力,并建立H₂O₂诱导HaCaT细胞氧化损伤模型;通过测定细胞存活率、细胞活性氧以及酶活,评价SHP对HaCaT细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,当SHP为1 mg/mL时,DPPH的清除率为68%、·OH清除能力65.48 U/mL;在SHP为3 mg/mL时,O₂^·-清除能力为84.86 U/mL,T-AOC为33.55。SHP能显著提高H₂O₂诱导氧化损伤的HaCaT细胞活力,其中经100μg/mL SHP处理后,HaCaT细胞存活率由56.85%提高到80.57...     

蛹虫草MF27菌糠多糖对肝细胞氧化损伤的保护作用

蛹虫草是一种可利用大米、小麦等谷物培育的名贵药用真菌,其采收后的菌糠里仍富含许多生物活性物质。本研究立足于蛹虫草菌糠多糖,先分析其化学抗氧化活性,再以H₂O₂诱导氧化应激损伤的LO2细胞为模型,评价其对肝细胞氧化损伤的保护作用,进而解析活性多糖的单糖组分。结果显示,菌糠多糖能够有效清除DPPH自由基、羟基（?OH）自由基和ABTS自由基,EC₅₀分别为0.26mg/mL、1.03mg/mL、0.57mg/mL,提示其具有良好的抗氧化能力;在H₂O₂诱导氧化应激损伤的LO2细胞中,菌糠多糖能有效地保护细胞形态的完整性,并且随浓度梯度递增式地提高细胞存活率,当多糖浓度为5mg/mL时,细胞存活率可达91.83%;在分析其作用机制上,与模型组对比,菌糠多糖能通过调节细胞抗氧化酶SOD（提高4.91倍）和CAT（提高3.40倍）的表达来清除ROS含量（P<0.01）,降低氧化损害;经检测,虫草菌糠活性多糖主要含有葡萄糖、甘露糖、半乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸、木糖、半乳糖醛酸、鼠李糖和岩藻糖等单糖。研究结果表明蛹虫草MF27菌糠多糖具有保护肝细胞氧化损伤的作用,为进一步开发和利用虫草菌糠提供了重要理论依据。     

蛹虫草MF27高抗氧化活性提取物筛选及保肝作用研究

本研究对一株优质蛹虫草菌株MF27不同提取物进行体外抗氧化活性比较,筛选得到高抗氧化活性提取物,并进一步探究该提取物对CCl₄诱导的小鼠肝损伤的修复作用。以DPPH自由基和羟自由基的清除率为抗氧化评价指标,从菌丝体发酵液、菌丝体水提物/醇提物、以及子实体水提物/醇提物中筛选菌株MF27的高抗氧化活性提取物;以CCl₄致小鼠急性肝损伤为模型,通过检测血清生化指标、肝功指标的变化,来评价该高活性提取物的体内抗氧化保肝效果。体外抗氧化实验结果表明,MF27的不同提取物均具有较好的体外抗氧化活性,但对清除DPPH和OH自由基能力最好的提取物是子实体水提物,其对DPPH自由基的半数有效浓度（EC₅₀）为0.096mg/mL,对羟自由基的半数有效浓度（EC₅₀）为0.196mg/mL,当在1mg/mL 时对DPPH自由基的清除率为94.94%,对羟自由基的清除率为70.17%;体内抗氧化保肝结果显示,给药组（子实体水提物）相比模型组而言,小鼠血清中ALT、AST以及肝脏中MDA水平极显著降低（P<0.01）、SOD水平极显著升高（P<0.01）,表明子实体水提物能有效改善氧化性肝损伤,同时与阳性对照（联苯双酯）对比,给药组在肝脏指数上表现出相当的作用（P>0.05）。本研究表明菌株MF27的最有效抗氧化活性提取物是子实体水提物,它对体内氧化性肝损伤有一定的修复能力,揭示MF27子实体水提物具有成为抗氧化性肝损伤功能产品的潜力。