科学家开发出实验性猿类艾滋病病毒疫苗

美国研究人员开发出一种实验性猿类免疫缺陷病毒疫苗,可大幅降低恒河猴感染猿类艾滋病病毒的风险。这一研究成果为开发人类艾滋病疫苗提供了新思路。研究显示,与注射安慰剂疫苗的恒河猴相比,注射实验性疫苗的恒河猴感染猿类免疫缺陷病毒(SIV)的风险低80%。反复接触病毒后,大部分注射疫苗的恒河猴最终感染猿类免疫缺陷病毒,即猿类艾滋病病毒,但血液中病毒     

恒河猴Mamu-A^＊01基因与SIV／SHIV感染相关的研究进展

SIV／SHIV感染的恒河猴是研究艾滋病及艾滋病药物筛选、疫苗评价较理想的动物模型。MHC在细胞免疫中起着关键作用,研究表明,MHC-I类分子的多态性与SIV／SHIV感染者的疾病进展有着明显的关联作用,Mamu-A^＊01是恒河猴中的一种MHC-I类分子,它可以呈递特定的病毒蛋白片段到细胞的表面,从而激发CTL反应。国外发现Mamu-A^＊01阳性的猴艾滋病恒河猴会出现疾病进展缓慢,存活时间长等特征。本文就恒河猴Mamu-A^＊01基因与SIV／SHIV感染相关的研究进展做一综述,以期进一步加深对MHC在疫苗研究中的作用的了解,并促进更行之有效地对HIV／AIDS疫苗进行评价。     

艾滋病疫苗：赋予猴子持久的免疫力

亚特兰大Emory大学的Harriet Robinson在重新设计艾滋病疫苗实验中获得了激动人心的结果——发现一种两步艾滋病疫苗,这种疫苗能激发持久的免疫力。 Robinson与她在Emory以及国家过敏反应和传染病研究院(NIAID)的同事合作,围绕一种实验室制备的杂交病毒SHIV 设计了他们的实验。这种病毒是由部分HIV和部分SIV(一种猴的艾滋病病毒)组成的。他们首先将含有连接在细菌DNA 上的几种SHIV基因的疫苗给24只猴子注射。然后,用含有重组的改良牛痘Ankara(MVA,被用作天花疫苗的一种病毒)携带的一系列SHIV基因的试剂对动物加强免疫。裸DNA和MVA都能刺激免疫系统以消除被感染的细胞,而不只是防止感染。Robinson与其同事计划将SHIV置于动物直肠“攻击”已接种过疫苗的猴子来检验这种疫苗。他们进行了3次实验,成功地制备了攻击物,即用已在猴子身上确定了的能直肠接种感染的最小量的SHIV。接种过疫苗的24只猴都被SHIV感染了,但20周后其中的23只控制住了感染且未受到免疫损害。4只未接种疫苗的对照猴却相反,它们的血中均具有高的SHIV水平,随后都死于艾滋病。这种DNA/MVA疫苗的HIV变体被批准于明年初在美国进行人类实验。 (Science,2001,291:1879～1881)(马兵李学军)     

我国研制的艾滋病疫苗已与国际同步

由我国科研人员自行研制的复合型艾滋病疫苗,11月25日获得国家食品药品监督管理局批准进入Ⅰ期临床研究。这是我国首次开展艾滋病疫苗的临床研究,标志着我国在艾滋病疫苗研究领域已与国际同步。复合型艾滋病疫苗由DNA疫苗及重组病毒载体疫苗组成。从1996年开始,我国科技人员利用在国内流行的艾滋病毒株基因,包括病毒的包膜蛋白、核心蛋白等,进行了为期8年的研究。     

SHIV-1157i及衍生病毒的研究进展

C亚型是世界上流行的HIV-1主要亚型,带有HIV-1 C亚型env区的SHIV和相应的非人灵长类模型是研究人类艾滋病的有效工具。SHIV-1157i及其衍生病毒能够成功地通过黏膜途径感染恒河猴和猪尾猴,并诱发艾滋病类似症状,而且恒河猴缓慢的发病进程与人类感染HIV-1相似。因此,掌握SHIV-1157i及其衍生病毒感染恒河猴的发病规律并探索其机制,将对研究人类HIV-1感染和发病机制,以及评价HIV-1 C亚型env区为靶点的艾滋病候选疫苗具有重要意义。     

1992年生物科学进展信息集萃(国外部分)

1～3月△美国华裔科学家胡小乐博士领导的研究小组,已在短尾猴身上试验成功预防艾滋病的疫苗。所有受试猴子在接受疫苗接种后免疫力都大大增加。接受疫苗的受试猴不仅自身不会感染艾滋病毒,并且也不会成为病毒的载体。△英国剑桥农业遗传公司和杜拉姆大学的科学家在雪花莲属(Galanthus)植物中发现一种能杀死蚜虫、粉虱、稻褐飞虱等吮吸植物汁液的害虫的天然蛋白质,并且还找到了制造这种蛋白质的基因。并成功地将这种基因导入烟草和莴苣。     

表达SIV Gag/Env基因的DNA疫苗、重组腺病毒和重组痘苗病毒三载体疫苗联合免疫小鼠的细胞免疫研究

获得性免疫缺陷综合征即艾滋病是人类面临的严重公共卫生威胁,目前常用的药物疗法仍存在一定的缺陷,尚不能彻底治愈AIDS并阻断HIV的传播。将治疗型疫苗用于HIV感染的治疗具有一定的发展潜力,但缺乏适宜的HIV感染动物模型阻碍了治疗型HIV疫苗的研制。SIV能够感染非人灵长动物并引起类似AIDS的猴免疫缺陷病,因而常被用作研究HIV及其疫苗的替代动物模型。为了对SIV疫苗在猴感染模型中治疗SIV感染的效果进行评价,我们分别构建了表达SIV gag和env基因的DNA疫苗、重组腺病毒和重组痘苗病毒疫苗,并联合使用这三种疫苗免疫小鼠,对包括不同抗原组合、不同免疫次序及间隔的免疫策略进行探索和优化。IFN-γ酶联免疫斑点和小鼠体内杀伤试验的结果显示,通过三载体疫苗联合免疫,能够在小鼠体内诱导出强度较高、持续时间较长的SIV Gag/Env特异性细胞免疫反应。并且,重复免疫后仍可以诱导较高水平的免疫反应。该结果为在SIV感染猴模型中评价多载体疫苗序贯和重复免疫治疗SIV感染的研究奠定了基础,也为治疗型HIV疫苗的研究提供了参考。     

重组艾滋病疫苗gp120

美国Genentech公司和Southwest生物医学研究基金会用黑猩猩证明利用基因重组生产的部分疫苗对艾滋病病毒有抑制效果.用于攻击试验的病毒株与作为疫苗使用的病毒同样具有相关基因.艾滋病疫苗的最大麻烦之一是不能适应抗原的变异.用黑猩猩证明利用基因工程生产的部分疫苗的有效性,还是第一例.该公司在《Nature》杂志上发表了     

模拟HIV性传播特点的SIVmac239恒河猴直肠黏膜感染

目的制备SIVmac239恒河猴(Macaca mulatta)细胞适应株病毒,模拟HIV性传播感染特点进行恒河猴直肠黏膜感染研究,探索引起系统性感染的病毒阈值水平与机体病毒、免疫学之间相关性,为我国艾滋病黏膜疫苗等生物制剂有效性评价提供新的模型构建思路。方法参照HIV性传播自然感染剂量范围,选用SIVmac239连续升高的3种剂量直肠黏膜途径感染两只恒河猴,采取多种方法进行病毒血症和免疫反应特点分析。结果两只恒河猴经2×101TCID50和2×102TCID50病毒滴度2次攻击后45d,经检测均未建立系统性感染,病毒特异性免疫反应均为阴性;第3次2×103TCID50病毒滴度攻击后,M296猴表现出典型的系统性感染特点,并诱导特异性免疫反应。结论确认了HIV性传播过程中的病毒剂量效应关系,为预防性生物制剂的猴体有效性评价提供了新的思路。同时,发现SIVmac239Gag区特异性的T细胞免疫反应在病毒控制过程中发挥了关键作用,对于新一代艾滋病黏膜疫苗的抗原选择具有指导性意义。     

B亚型SHIV_（SF162p3）中国恒河猴小剂量多次阴道黏膜感染

目的模拟HIV性传播感染特点进行中国恒河猴阴道黏膜小剂量多次感染研究,为我国艾滋病疫苗有效性评价提供新的模型构建思路。方法选用20-30TCID50剂量的SHIVSF162p3病毒阴道黏膜途径感染六只成年雌性中国恒河猴,共感染13次,每次攻毒间隔4～7 d。采取测定血浆病毒载量和外周血CD4＋∶CD8＋。结果 6只中国恒河猴经13次病毒攻击后,经检测均建立系统性感染,血浆病毒载量呈阳性;CD4＋∶CD8＋均有下降。结论成功建立了中国恒河猴阴道黏膜小剂量多次感染模型,为艾滋病研究提供了新的更接近于自然感染状态的模型建立模式。     

灵长类动物中TRIMCyp融合基因模式及对逆转录病毒复制的限制作用

TRIM5-CypA融合基因(TRIMCyp)是一种独特的TRIM5基因形式。迄今已发现新大陆猴中包括鹰猴在内的夜猴属所有代表种,以及在北平顶猴、巽他平顶猴、食蟹猴、印度恒河猴和熊猴等旧大陆猴中均存在这种基因融合现象,但在新大陆猴与旧大陆猴中的TRIMCyp融合基因的基因融合模式和表达剪接方式不同。新大陆猴TRIMCyp融合基因是由CypA假基因的cDNA序列通过LINE-1逆转座子介导的逆转座方式插入至TRIM5α基因的第7和第8外显子之间的内含子中形成,而旧大陆猴TRIMCyp融合基因则是由CypA假基因的cDNA序列以相似的逆转座方式插入至TRIM5基因的3’非翻译区(untranslatedregions,UTR)形成。TRIMCyp融合基因在不同灵长类动物中的存在比例、基因型、TRIMCyp融合蛋白的表达以及对逆转录病毒的限制活性均有所差异。鹰猴和平顶猴的TRIMCyp融合基因研究较多,鹰猴TRIMCyp融合蛋白可能以与TRIM5α相似机制限制HIV-1的感染,而平顶猴TRIMCyp融合蛋白则丧失了限制HIV-1的作用。这两个功能截然不同的融合基因为TRIM5α作用机制研究提供了难得的实验材料,也为建立HIV-1感染的新型灵长类动物艾滋病模型奠定了科学依据。该文综述了TRIMCyp融合基因在灵长类动物中的分布、存在形式及其限制逆转录病毒复制的作用机制等方面的研究情况。     

SIV模型猴石蜡包埋淋巴结组织DNA的提取及病毒基因检查

从取材于３只ＳＩＶ感染治疗猴和４只ＳＩＶ艾滋病模型猴治疗前后的１１份石蜡包埋淋巴结活检组织中提成基因组ＤＮＡ,分别用ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ方法检测ＳＩＶ病毒基因,ＰＣＲ共检出１０份阳性,巢式ＰＣＲ检测１１价样品均阳性,而同期采样的猴外周血标本病毒分离仅３份阳性,ＰＣＲ扩增产物的特异性用限制性内切酶酶切反应得到证实。实验说明,从淋巴结组织中检测ＳＩＶ的病毒基因较外周血病毒分离更能真实地反映病毒感染状况,本研究将对全面和正确评价艾滋病药吻和疫苗治疗效果提供帮助。     

大肠杆菌重组颗粒性戊型肝炎疫苗对恒河猴的免疫保护

大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白ORF2片段HEV 239重组蛋白颗粒,经铝佐剂吸附后,分别以5μg、10μg和20μg剂量免疫恒河猴,28天时以相同剂量加强免疫1次,3周后分别以不同病毒滴度的基因Ⅰ型或基因Ⅳ型HEV静脉攻击.结果,加强后3周,3个免疫剂量组猴的抗体几何平均滴度分别为1∶27175、1∶34409、1∶41607,以世界卫生组织参比血清定量,则分别为1098IU/ml,1357IU/ml、1724IU/ml.每个剂量免疫组及对照组各有3只猴接受107病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染,对照组3只猴均被成功感染,2只出现肝炎;20μg免疫组3只猴均未被感染;10μg和5μg免疫组各有2只猴未被感染,另1只猴出现短暂感染,免疫猴均未出现肝炎.3个剂量免疫组及对照组另外3只猴,接受104病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染,对照组3只猴均被感染,1只出现肝炎;而免疫猴均未被感染,也未出现肝炎.3只10μg免疫猴和3只对照猴分别接受107病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染,对照组均被感染并出现肝炎,而免疫组均未出现肝炎,有2只未被感染,另1只被短暂感染.另有3只10μg免疫猴和3只对照猴分别接受104病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染,对照组均被感染,而免疫组均未被感染.这些结果表明:HEV239疫苗可以完全预防HEV导致的肝炎,并保护大多数恒河猴不被HEV感染.另外,疫苗对基因Ⅳ型HEV的保护性与基因Ⅰ型HEV相近.     

艾滋病猴特异性细胞免疫的胞内细胞因子检测方法优化与应用

目的 为准确检测艾滋病猴模型特异性细胞免疫,优化、确定胞内细胞因子染色(ICS)影响因素和条件.方法 使用三种多克隆激活剂分别刺激SIV感染猴外周血单个核细胞(PBMC),确定最佳阳性刺激物和刺激时间;然后使用五种浓度SIVmac239混合肽库分别刺激SIV感染猴PBMC,体外培养,不同时间点进行细胞染色和流式检测,确定肽库的最适刺激浓度和最佳刺激时间.最后,初步应用该方法检测SIV感染猴细胞免疫水平.结果 PMA+离子霉素组合可用作本实验的阳性刺激物;2μg/mL肽库,37℃5％ CO2培养16 h,能更有效的刺激T细胞分泌TNF-α、IL-2、IFN-γ.结论 该方法的优化对艾滋病药物的临床前评价和疫苗研发等研究具有重要意义.     

猴D型逆转录病毒和猴艾滋病

1983年在加里福利亚和新英格兰灵长类研究中心先后发现了与人艾滋病的表现相似的猴艾滋病(Smian AIDS,SAIDS)(Letvin et al.,1983;Henrickson et al.,1983)。引起SAIDS的病原体有猴艾滋病D型逆转病毒(Simian AIDS Type D)Retrovirus,SRV)和猴免疫缺陷病毒(Simian Immunodefiency Virus,SIV)。由     

恒河猴Fas基因的克隆

目的研究猴艾滋病发病机制中细胞凋亡的作用,克隆凋亡相关基因Ｆａｓ的ｃＤＮＡ序列。方法从恒河猴腹股沟淋巴结中提取总ＲＮＡ,根据人的Ｆａｓ ｃＤＮＡ序列设计上、下游引物,通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增出目的ｃＤＮＡ片段,将这一片段克隆到ｐＧＦＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体中,筛选阳性克隆并进行序列测定。结果首次克隆了恒河猴Ｆａｓ基因,编码序列为１００５ ｂｐ,将其序列提交ＧｅｎＢａｎｋ,收录号为ＡＹ００７５７２。结论克隆的新序列与ＧｅｎＢａｎｋ已收录的人和食蟹猴的Ｆａｓ基因在编码序列的长度上稍有区别,人的编码序列为１００８ｂｐ,食蟹猴的为９９６ ｂｐ。     

马传染性贫血病毒囊膜基因的研究进展

马传染性贫血病毒是反转录病毒科慢病毒属的成员之一 ,不仅与人免疫缺陷病毒具有序列同源性 ,而且与其血清具有交叉反应。马传染性贫血驴白细胞弱毒疫苗是迄今为止唯一研究成功的慢病毒疫苗。在马传贫病毒囊膜基因的研究中有助于弄清其抗原变异、持续感染和疫苗免疫机理 ,为艾滋病疫苗的研究提供借鉴。对囊膜基因的结构、变异及其在机体免疫应答中的作用进行了讨论。     

HIV-2 Gag蛋白的表达研究

HIV-2是引起艾滋病的主要病原之一,与HIV-1相比,其致病性弱,感染的潜伏期长,有的甚至不发展成艾滋病。但HIV-2的易感宿主较HIV-1广,除人和猩猩之外,HIV-2还能感染猴等灵长类动物,这将为艾滋病疫苗和实验动物模型的研究提供有利条件。 我们应用原核高效表达载体pBV220在大肠杆菌中分别表达了HIV-2gag全部和部分蛋白(去掉与pol重叠序列)。在此基础上我们又将gag全部和部分序列置于痘苗病毒P7.5和     

熊猴存在TRIM5/TRIMCyp杂合子基因型

缺乏合适的动物模犁是制约艾滋病研究取得重大突破的关键瓶颈之一.细胞内的抗病毒蛋白被称为限制因子.研究不同灵长类动物抗HIV-1宿主限制因子的存在形式及作用机制对建立合适AIDS灵长类动物模型有十分重要的意义.TRIM5α是哺乳动物细胞中一种重要和关键的限制因子,它以物种依赖的方式限制包括HIV-1在内的逆转录病毒的感染.TRIM5-CypA融合基因是存在于新大陆猴与旧大陆猴中的一种独特的TRIM5基因形式.为了研究不同灵长类动物TRIM5基因的存在方式,该文对熊猴、藏婀猴、红面猴及中闰恒河猴4个物种共110只灵长类动物进行了TRIM5-CypA融合模式的研究.首次发现熊猴也存在TRIM5-CypA基因融合现象.熊猴TRIMCyp融合基因形成模式类似于北平顺猴TRIMCyp融合基因模式,即CypA假基因的cDNA序列通过逆转座方式插入到TRIM5基凶的3'-UTR区域.基因序列分析表明,该基因与北平顶猴相应基因序列高度相似;并且其TRIM5内含子6的3'-剪接位点也相应存存G-to-T突变现象(G/T).这提示熊猴也极有可能像北平顶猴一样表达TRIM5-CypA融合蛋白,从而导致熊猴可能跟北平顶猴一样可能被HIV-1感染.因此,熊猴极有希望成为一种新的HIV/AIDS灵长类动物模型.     

《细胞》：艾滋”马赛克疫苗”拼接多种基因

美国研究人员10月24日说,他们开发出一种拼接多种基因的”马赛克疫苗”。动物试验显示,该疫苗可使艾滋病病毒感染风险降低约90％。这一研究成果有可能为人类”防艾”带来新希望。