一种简易的聚丙烯酰胺凝胶脱色方法

PAGE是蛋白质分析、比较和特性鉴定的有效方法,常规SDS-PAGE分析蛋白过程中考马斯亮蓝色素脱除过程耗时低效。改变脱色液配方,使用20%的乙醇和10％冰醋酸作为脱色剂,在脱色液中放置3-5片纸巾吸附色素,并在脱色过程中换纸1-2次,可缩短脱色时间3-4h,减少脱色液用量2-3倍。     

白腐真菌AH28-2菌株发酵合成漆酶初步研究*

从 2 2 4个野外采集的真菌样品中筛选分离到一株产漆酶活性较高菌株AH28-2 ,经初步鉴定为白腐真菌。采用单因子相互比较法 ,研究了该菌株最适发酵产酶条件。应用添加有 1g/Lkraft木素的液体发酵培养基 ,接种量 5 %(V/V) ,初始pH8 5 ,装液量为 5 0 %,2 8℃、 1 5 0r/min摇瓶振荡培养 4～ 5d ,漆酶酶活水平达 2 0 1 84IU/L。     

白腐真菌AH28-2菌株发酵合成漆酶初步研究

从224个野外采集的真菌样品中筛选分离到一株产漆酶活性较高菌株AH28－2,经初步鉴定为白腐真菌,采用单因子相互比较法,研究了该菌株最适发酵产酶条件。应用添加有1g／LKraft木素的液体发酵培养基,接种量5％（V／V）,初始pH8．5,装液量为50％,28℃、150r/min摇瓶振荡培养4－5d,漆酶酶活水平达20184IU／L。     

蜜环菌胞外漆酶的合成、纯化及性质研究

研究了蜜环菌胞外漆酶合成条件和酶学性质。实验表明,培养基初始pH5.5、培养温度25℃有利于菌株产酶;与麦芽糖、山梨糖和半乳糖相比,纤维二糖和棉子糖作为碳源时漆酶产量更高;有机氮源比无机氮源有利于漆酶合成。泥炭提取液可显著诱导漆酶生成,当其含量为50%时,菌株漆酶最高产量是对照组的7倍。在蜜环菌发酵上清液中检测到3个漆酶同功酶组分,其主要活性（约占75%）组份漆酶A经 (NH₄)₂SO₄沉淀、制备级PAGE电泳和阴离子交换柱层析被分离纯化至电泳均一,SDSPAGE法测得酶亚基分子量59kD,凝胶过滤色谱法测定活性酶分子量58kD。纯化的漆酶A等电点pI为4.0,氧化愈创木酚的最适反应pH为5.6,最适温度为60℃,在60℃和65℃时半衰期分别为45min和36.8min,在pH5.2～7.2范围内稳定性较好。100mmol/L Cl^-对该酶有显著抑制作用,1mmol/L SO^2-₄ 对漆酶有激活作用,1mmol/L NaN₃可完全抑制酶活性,10 mmol/L EDTA对漆酶活没有明显影响,1mmol/L Cu²⁺对漆酶有激活作用。以愈创木酚为底物时,测得酶的K_m=1.026mmol/L,V_max=5μmol/(min·mg);以ABTS为底物时,测得其K_m=0.22mmol/L,V_max=69μmol/(min·mg)。