沙眼衣原体感染对大鼠早期妊娠的影响

目的检测沙眼衣原体(CT)感染后妊娠大鼠子宫内膜热休克蛋白70(HSP70)和整合素α4β1的表达,探讨CT感染对妊娠的影响.方法取正常未孕大鼠、阴道接种CT后妊娠大鼠和正常妊娠大鼠孕4～8d子宫作切片,采用免疫组织化学方法,研究CT感染对早期妊娠子宫HSP70和整合素α4β1表达的影响.结果 HSP70在未孕及妊娠大鼠子宫均有表达,其主要存在于子宫内膜固有层的基质细胞及蜕膜细胞,整合素α4β1存在于内膜上皮、腺上皮和基质细胞.CT感染后(实验组)妊娠大鼠子宫内膜HSP70的阳性表达在孕4～6d较正常妊娠组(对照组)及未孕组明显增强,差异有显著性(P< 0.01);在孕7～8d与对照组相比无明显差异,但强于未孕组.而整合素α4β1的阳性表达在孕4～6d弱于对照组(孕第5d尤为明显),强于未孕组,差异有显著性(P< 0.01).结论 (1)大鼠生殖道感染CT引起胚泡着床期(4～6d)HSP70的高表达,且主要存在于子宫内膜固有层的基质细胞及蜕膜细胞,内膜上皮、腺上皮中未见表达,推测CT生殖道感染可能影响母体子宫内膜蜕膜细胞的增殖,干扰妊娠,引起不孕或流产.(2)生殖道感染CT引起胚泡着床期整合素α4β1的低表达,并与HSP70表达的变化趋势相反,推测CT生殖道感染可影响孕早期胚泡植入,其不良妊娠结果可能通过HSP70与整合素α4β1的共同作用导致.     

子宫内膜蜕膜化的特征及其调节因素

子宫内膜向蜕膜的转化是正常着床和妊娠的一个重要特征,对于胚泡着床是必不可少的。在蜕膜化过程中,子宫内膜基质细胞在形态和生理等方面都发生了很大的变化。蜕膜化过程受多种因素的调节,包括cAMP、胰岛素样生长因子结合蛋白-1(IGFBP-1)、自然杀伤细胞、同源盒基因-10(HOXA10)、激活素等。但对蜕膜化的机制及调节等仍不清楚。     

幼龄大鼠子宫内膜蜕膜化的研究

出生10—14天的Wistar大鼠,在雌二醇和孕酮一定剂量和时程的作用下,以油剂作为蜕膜化刺激,成功地诱发了蜕膜瘤。并在亚显微结构水平上,系统地观察了基质细胞转化为蜕膜细胞的过程。结果表明,出生10—14天的幼龄大鼠子宫内膜,已能对卵巢甾体作出迅速反应。孕酮加微量雌激素处理第三天,基质细胞已处于敏感时期,具备了向蜕膜细胞转化的条件,只是在蜕膜化刺激作用后12小时,才实现了这一转化。子宫内膜上皮在子宫腔内注油后开始解体,基膜处积聚大量无定形物质,它在基质细胞蜕膜化中可能起重要作用。     

小鼠围着床期子宫内膜甲基化CpG结合域蛋白2的表达规律

为研究甲基化CpG结合域蛋白2（methyl-CpG binding domain protein 2,MBD2）在围植入期小鼠子宫内膜的表达规律,通过采用实时荧光定量PCR（Real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR）、Western blot和免疫组化技术检测未孕小鼠（d0）和不同孕天小鼠子宫MBD2的表达情况。qPCR结果显示,d0至d7的小鼠子宫内膜组织均有MBD2 mRNA表达,在d5至d7高表达。MBD2蛋白在子宫内膜的表达规律与qPCR结果相符。MBD2蛋白在孕d1到d4中度表达于腔上皮、腺上皮和基质细胞,在d5至d7基质细胞表达增强,主要表达于蜕膜区。假孕小鼠子宫内膜中,MBD2在腔上皮、腺上皮和基质细胞中中度表达,d5至d7基质细胞表达明显减弱。动物模型中,宫角注射MBD2基因反义寡聚脱氧核苷酸,可抑制MBD2的表达,降低人工诱导蜕膜化反应和蜕膜化标志物PRL的表达。MBD2在早孕小鼠子宫内膜的表达模式提示其可能参与了蜕膜化过程。     

MK基因对小鼠子宫基质细胞蜕膜化进程的影响

为探索肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)的死亡受体(mouse killer,MK)对小鼠子宫基质细胞蜕膜化进程的影响,构建MK基因过表达和siRNA干扰重组腺病毒.原代培养的小鼠子宫基质细胞感染MK过表达或者干扰重组腺病毒并诱导蜕膜化,72 h后用免疫细胞化学与流式细胞术分别检测蜕膜细胞的标志物催乳素(prolactin,PRL)与蜕膜细胞凋亡率的变化情况.妊娠d4小鼠子宫角注射MK重组腺病毒,观察胚胎植入点的数量变化.实验结果表明,与对照组相比,在诱导的蜕膜细胞中过表达MK使得催乳素的含量显著降低(P<0.05),同时,蜕膜细胞的凋亡率明显升高(P<0.05),而siRNA干扰之后催乳素的含量显著升高,凋亡率明显下降(P<0.05),但是,宫角注射MK基因过表达和siRNA干扰重组腺病毒之后,胚胎植入数量均显著减少(P<0.01).提示MK基因通过参与小鼠子宫内膜基质细胞的蜕膜化进程,调节蜕膜细胞增殖与凋亡之间的平衡从而影响胚胎的植入.     

DEK对人子宫内膜蜕膜化的调节作用

为探讨DNA结合蛋白果蝇Eph激酶(Drosophila Eph kinase,DEK)对人子宫内膜基质蜕膜化的调节作用和途径,该研究采用qPCR(Real-time quantitative polymerase chain reaction)、免疫组化(immunohistochemical)和蛋白印迹(Western blot)分别检测人子宫内膜增生期、分泌期和蜕膜组织中DEK基因和蛋白的表达;利用siRNA抑制基质细胞和蜕膜细胞的DEK,再用细胞流式技术、细胞免疫荧光、qPCR、细胞碱性磷酸酶脂显色和Western blot检测DEK沉默后细胞的变化。结果显示,蜕膜组织中DEK mRNA表达水平低于增生期和分泌期(P0.05),蜕膜组织中DEK蛋白表达水平高于增生期和分泌期(P0.05);抑制基质细胞DEK会使细胞增殖和分化能力降低,从而抑制基质细胞蜕膜化;抑制蜕膜细胞DEK可使细胞凋亡增加,DNA损伤情况加剧,导致蜕膜细胞的维持和发展受到影响。综上,该研究初步证实,DEK可能通过调控细胞蜕膜化而参与胚胎着床过程,其可能途径与其通过调控细胞增殖、分化、凋亡和核损伤有关。     

蛋白激酶H11基因在小鼠子宫中的表达及其性激素调节

为研究蛋白激酶H11基因在生殖系统中的作用,我们采用半定量RT-PCR和原位杂交方法,研究了蛋白激酶H11基因在小鼠中的组织特异性表达,在妊娠初始期胚胎植入位点、妊娠期子宫和胎盘以及正常动情周期子宫中的表达及其受性激素的调节。结果发现:蛋白激酶H11基因在小鼠多种组织中都有表达,在卵巢及子宫等一些生殖相关的组织中表达水平较高;妊娠初始期,蛋白激酶H11基因在小鼠子宫内膜植入位点处有明显的高表达,其mRNA定位于腔上皮细胞和基质细胞中。在动情周期中,蛋白激酶H11基因在动情前期子宫中表达水平较低;卵巢切除模型显示雌激素和孕激素均可显著上调蛋白激酶H11基因的表达。以上结果提示蛋白激酶H11可能参与了胚胎植入过程中腔上皮细胞凋亡和基质细胞增殖与蜕膜化以及动情周期小鼠子宫内膜细胞的功能调节[动物学报51(3):462-468,2005]。     

环状RNA circCapzb在早孕小鼠围植入期子宫内膜中的表达

环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类新型内源性非编码RNA,与多种疾病的发生、发展密切相关,但在胚胎着床的过程中罕见报道。该文旨在探讨环状RNA circCapzb在早孕小鼠围植入期子宫内膜中的表达。采用Real-time PCR检测正常妊娠小鼠孕第5天(d5)至第7天(d7)胚胎着床点及胚胎着床旁组织中circCapzb的表达水平;分别构建小鼠体内人工诱导蜕膜化模型和原代小鼠子宫内膜基质细胞体外人工诱导蜕膜化模型,采用Real-time PCR分别检测circCapzb在组织及细胞蜕膜化诱导模型中的表达;通过生物信息学预测circCapzb下游靶miRNA:miR-377-3p和miR-7005-5p,并采用Real-time PCR检测其在蜕膜化诱导模型中的表达。结果表明,circCapzb在小鼠孕第5天至第7天胚胎着床点的表达明显高于着床旁;circCapzb在组织及体内外细胞蜕膜化诱导模型中诱导组的表达明显高于未诱导组(对照组);circCapzb下游靶miR-377-3p和miR-7005-5p在组织及体内外细胞蜕膜化诱导模型中诱导组的表达明显低于未诱导组。该研究初步表明,circCapzb在小鼠早孕期胚胎着床点高表达,在组织及体内外细胞蜕膜化诱导模型中高表达,在小鼠妊娠早期子宫内膜蜕膜化过程中可能发挥作用,但具体机制有待进一步研究。     

母胎界面自然杀伤细胞的研究进展

自然杀伤(natural killer,NK)细胞是母胎界面丰度最高的免疫细胞,在妊娠早期的子宫蜕膜中大量积聚。研究表明母胎界面NK细胞具有独特表型和功能,在妊娠期免疫耐受调节、子宫内膜蜕膜化、滋养细胞侵袭、子宫螺旋动脉重塑、胎盘形成和胎儿生长、发育等多方面都发挥关键作用,但是其在妊娠中的功能及其作用机制还有待深入研究。本综述总结了近年来母胎界面NK细胞的功能以及它们在妊娠相关疾病中作用的研究进展,旨在对母胎界面NK细胞功能有更全面的了解,并为妊娠相关疾病的诊治提供新的思路。     

子宫自然杀伤细胞在人类早孕蜕膜血管 生成中的作用研究

子宫内膜蜕膜化过程伴随着活跃的血管生成是妊娠时新血管形成的关键步骤. 本研究旨在明确子宫自然杀伤细胞(uNK, CD56⁺细胞)在人类早期妊娠蜕膜组织中的分布, 并观察这类细胞是否表达血管内皮生长因子(VEGF-A)和促血管生成素2(Ang2). 免疫组化研究发现, uNK细胞(CD56⁺)大量存在于子宫蜕膜间质中, 主要集中在血管和腺体周围的间质组织, 蛋白水平的VEGF-A和Ang2表达于蜕膜间质细胞、微血管内皮细胞和腺上皮细胞中, uNK细胞在子宫蜕膜间质中的阳性率与平均微血管密度(MVD)、uNK细胞的阳性率与VEGF-A蛋白阳性表达率呈正相关关系, 而与Ang2无相关性. 另外, 在激光微切获得的单个uNK细胞进行巢式PCR的研究结果显示, 人类蜕膜的uNK细胞能够表达VEGF mRNA, 未测得Ang2 mRNA在单个uNK细胞表达. 表明人类早孕子宫蜕膜中的uNK细胞通过表达VEGF-A, 在蜕膜化过程和胎盘早期形成时的血管生成中发挥重要作用.     

层粘连蛋白(LN)和纤维连接蛋白(FN)在植入期地鼠子宫内膜中的表达——形态学和免疫组织化学研究

选用未孕及怀孕4－8天地鼠子宫内膜,用组织学、免疫组织化学染色及图像分析法,研究植入前后地鼠子宫内膜中LN、FN分布及含量的变化,探讨其与植入过程的相关关系。结果：在未孕地鼠,LN主要分布于宫内膜各类上皮基膜内,FN存在于基膜及细胞外基质中。孕4－8天,各类上皮基膜中LN、FN表达明显增多,与未孕地鼠相比,差异显（P＜0.01）。随着蜕膜形成,蜕膜（基质）细胞周围LN及FN表达增多。上述结果表明,LN、FN与植入过程及蜕膜功能密切相关。     

子宫自然杀伤细胞在人类早孕蜕膜血管 生成中的作用研究

子宫内膜蜕膜化过程伴随着活跃的血管生成是妊娠时新血管形成的关键步骤. 本研究旨在明确子宫自然杀伤细胞(uNK, CD56⁺细胞)在人类早期妊娠蜕膜组织中的分布, 并观察这类细胞是否表达血管内皮生长因子(VEGF-A)和促血管生成素2(Ang2). 免疫组化研究发现, uNK细胞(CD56⁺)大量存在于子宫蜕膜间质中, 主要集中在血管和腺体周围的间质组织, 蛋白水平的VEGF-A和Ang2表达于蜕膜间质细胞、微血管内皮细胞和腺上皮细胞中, uNK细胞在子宫蜕膜间质中的阳性率与平均微血管密度(MVD)、uNK细胞的阳性率与VEGF-A蛋白阳性表达率呈正相关关系, 而与Ang2无相关性. 另外, 在激光微切获得的单个uNK细胞进行巢式PCR的研究结果显示, 人类蜕膜的uNK细胞能够表达VEGF mRNA, 未测得Ang2 mRNA在单个uNK细胞表达. 表明人类早孕子宫蜕膜中的uNK细胞通过表达VEGF-A, 在蜕膜化过程和胎盘早期形成时的血管生成中发挥重要作用.     

前蛋白转换酶Furin和PC7在小鼠母胎界面的动态表达及其在胚胎粘附和扩展中的作用

通过免疫组化、免疫荧光和小鼠胚胎-子宫内膜上皮细胞共培养体系,研究了前蛋白转换酶Proprotein Convertases (PCs)家族中的Furin和PC7在小鼠妊娠早期子宫和胚胎中的表达及对胚胎植入的影响.结果显示:Furin和PC7在妊娠D1-D4小鼠子宫的腺上皮和D5-D7小鼠子宫的蜕膜、腺上皮高表达;PC7在植入前胚胎的2-细胞和4-细胞期表达很低,8-细胞期表达开始增加,囊胚期滋养外胚层有显著的高表达.Furin的抑制剂Dec-RVKR-CMK可显著抑制共培养体系中胚胎的粘附和扩展.以上结果表明,Furin在植入期胚胎的粘附和扩展中发挥重要作用.此外,Furin和PC7可能参与子宫内膜蜕膜化和早期胚胎发育.     

PCOS易感基因Hmga2在小鼠子宫蜕膜化中的表达与调节

目的研究PCOS易感基因Hmga2在子宫内膜容受性和蜕膜化中的表达与调节。方法通过早期妊娠、延期着床与激活、人工蜕膜化、卵巢类固醇激素处理等实验,利用q PCR、Western blot技术,阐述Hmga2在子宫内膜容受性中的作用。结果 Hmga2随着妊娠表达量逐渐增加,着床点与非着床点相比表达量显著升高,胚胎激活组比延迟着床表达量显著增高,人工诱导蜕膜化与非蜕膜化比较表达显著升高,Hmga2的表达与雌激素和孕激素呈正相关,体内受雌孕激素调节。结论表明Hmga2的表达与小鼠早期妊娠胚胎着床过程密切相关,参与子宫内膜蜕膜化过程,受活化胚泡和类固醇激素的影响。     

组蛋白乙酰化与哺乳动物生殖

组蛋白乙酰化是表观遗传修饰方式之一,在哺乳动物生殖活动中的作用至关重要,它参与哺乳动物精子发生、卵母细胞成熟和胚胎发育以及子宫内膜基质细胞蜕膜化等生殖过程。组蛋白乙酰化水平和功能的异常可以导致生殖细胞生成障碍从而致使胚胎死亡,还可影响子宫内膜容受性和蜕膜化的发生。此外,组蛋白乙酰化与胎盘的功能也密切相关。组蛋白乙酰化修饰的进一步研究将为不孕不育病因的阐明和治疗提供理论基础,对人类优生优育意义重大。     

着床期小鼠子宫内膜中EGF及其受体转录和表达状况的研究

为探讨表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF)在胚泡着床过程中的作用。本文应用原位杂交和免疫组织化学方法,检测了EGE及其受体在胚泡着床前后小鼠子宫内膜中的转录和表达。结果显示：未孕和受精后第4-5天,子宫内膜表面上皮和腺上皮细胞仍呈EGF,EGFR原位杂交和免疫组化阴性着色,受精后第4-5天子宫内膜基质细胞EGF及其受体转录和表达较未孕期增强,受精后第6天,EGF及其受体免疫组化和原位杂交阳性着色主要分布于初级蜕膜带（primary decidual zone,PDZ);随着胚泡植入的进行,PDZ区蜕膜细胞EGF及其受体的转录和表达明显减少,而PDZ周围蜕膜细胞EGF及其受体的转录和表达增强,结果提示,EGF是小鼠胚泡着床过程中的一个重要调节因子。     

沙眼衣原体感染对大鼠着床期间子宫内膜E-cadherin的影响

目的 研究沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,CT）感染后大鼠着床期间子宫内膜上皮钙粘蛋白（E-cad-herin,E-cad）的变化。方法 大鼠雌雄合笼建立早孕模型,取正常和CT感染后妊娠4-7d的子宫组织,免疫组化SP法检测E-cad的表达。结果 正常和感染后妊娠组E-cad的表达均存在先上升后下降的趋势,表达峰值均在妊娠第6d,CT感染组低于正常组,且存在显著性差异（P〈0.05）;其表达部位在子宫内膜上皮细胞的胞膜或/和胞浆,蜕膜细胞无或少量表达。结论 沙眼衣原体感染后可能通过影响子宫内膜黏附分子E-cad的表达,破坏子宫内膜微环境,进而干扰早期妊娠。     

早孕小鼠子宫内膜钙网蛋白的表达规律

采用RT-PCR、间接免疫荧光组织化学、Western 印迹及原位杂交技术分别检测未孕(d0)和妊娠d1、d2、d3、d4、d5、d6、d7天小鼠子宫内膜中钙网蛋白(calreticulin, CRT)的表达规律, 探讨CRT在胚胎着床中的作用.结果显示CRT mRNA在妊娠小鼠子宫内膜中的表达明显高于未孕小鼠(P <0.05), 且随着妊娠天数的增加呈逐渐增强的趋势.间接免役荧光组织化学结果显示CRT表达于子宫内膜基质细胞、腺上皮以及腔上皮, 并在妊娠第4、5天基质细胞的胞浆中呈现高峰.实验结果提示, CRT在妊娠早期子宫内膜的持续表达, 可能通过调节整合素介导的细胞信号通路而调节胚胎滋养层细胞的黏附、侵袭, 参与胚胎着床.     

早孕小鼠子宫内膜mTOR基因表达增高

利用实时荧光定量PCR、原位杂交法、免疫组化(SP法)和Western印迹法分别检测未孕、假孕及孕d3、d4、d5、d6、d7小鼠子宫内膜哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian tar get of rapamycin,mTOR)mRNA和蛋白质的表达,研究mTOR基因在早孕小鼠子宫内膜的表达规律.结果显示妊娠子宫内膜组织mTOR的表达较未妊娠的子宫内膜组织显著增加(P＜0.05);着床窗期表达最高(d4,d5),且与其他妊娠各期比较差异有统计学意义(P＜0.05);原位杂交和免疫组化分析显示mTOR mRNA和蛋白质表达主要在子宫内膜基质细胞,与上皮细胞各组比较差异有统计学意义(P＜0.05).研究表明mTOR在子宫内膜基质细胞的规律性表达所调控的细胞生长、增殖和分化可能是胚胎正常着床的分子机制之一.     

Rictor对小鼠基质细胞蜕膜化的影响及其在人自然流产子宫蜕膜组织中的表达

该研究探讨Rictor及SGK1对小鼠基质细胞蜕膜化的影响及其在人自然流产子宫蜕膜组织中的表达。分离和培养小鼠基质细胞,siRNA沉默小鼠基质细胞Rictor基因并人工诱导蜕膜化,检测Rictor和SGK1的蛋白及mRNA表达情况,并检测蜕膜化标志物Dtprp mRNA的水平;此外,过表达SGK1,检测Dtprp mRNA的水平。选取妊娠8～10周无菌新鲜自然流产及正常人工流产的蜕膜组织标本作为实验研究组(自然流产组,n=17)及正常对照组(正常妊娠组,n=34);分别用Western blot、免疫组织化学、Real-time PCR检测Rictor及SGK1的蛋白和mRNA表达水平。结果表明,沉默Rictor基因后,Rictor及SGK1的蛋白和mRNA表达水平均显著降低,同时蜕膜化指标Dtprp mRNA也显著降低,而过表达SGK1后,蜕膜化指标Dtprp mRNA较前升高且差异有统计学意义。与正常妊娠组相比,Rictor和SGK1的蛋白及mRNA表达水平在自然流产组明显降低。该研究得出,Rictor可通过影响SGK1的表达来抑制基质细胞蜕膜化;Rictor和SGK1在自然流产组的表达均显著低于正常组,从而可能成为流产发生的原因之一。