高同型半胱氨酸对大鼠神经元的损伤作用及其相关机制的研究

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)对体外培养神经元的损伤作用及其相关机制。方法:用Hcy处理体外培养的海马和皮层神经元,观察神经元的凋亡情况,以及神经元内游离钙浓度改变、DNA损伤和氧化损伤。结果:用250μmol/LHcy作用4h可使神经元凋亡率显著升高,并呈时间依赖性。甲基供体S-腺苷蛋氨酸(SAM)可显著抑制Hcy引起的神经元凋亡。Hcy(250μmol/L)可使神经元内游离钙浓度显著升高;导致神经元的彗星率明显增高;使神经元内MDA的产生增多,但并不影响神经元的总抗氧化能力(T-AOC)。结论:高浓度Hcy可通过神经兴奋作用、DNA损伤和氧化损伤等多方面机制对神经元造成损伤作用,从而诱导神经元发生凋亡。DNA损伤在Hcy导致神经元凋亡的作用中起着关键作用。     

热损伤对大鼠纹状体神经元凋亡的影响

目的:探讨热损伤对原代培养的大鼠纹状体神经元凋亡的影响.方法:对原代培养的大鼠纹状体神经元进行43℃热损伤40 min后,用共聚焦激光扫描显微镜(LSCM)观察神经元细胞内Ca2 浓度的变化、神经元线粒体膜电位的变化,TUNEL法检测热损伤前后纹状体神经元凋亡的变化.结果:热损伤使纹状体神经元内Ca2 浓度明显升高,线粒体膜电位明显降低(P＜0.01);热损伤后纹状体神经元凋亡增多.结论:热损伤可能通过增加细胞内钙离子浓度、降低细胞线粒体膜电位而诱发大鼠纹状体原代培养神经元凋亡.     

高压氧对脑 因再灌注海马CA1区神经元调亡作用的研究

目的和方法：应用TUNEL检测技术,对沙土鼠前脑缺血20min后再灌注3d模型,用HBO治疗连续3d。观察HBO作用下海马CA1区神经元凋亡变化,研讨HBO对脑缺血再灌注损伤的疗效及其机理,为临床应用HBO治疗疾病提供理论依据。结果：沙土鼠脑缺血再灌注3d后海马CA1区大量神经元凋亡,HBO治疗组凋亡细胞数明显减少（P＜0.01）,并以0.25MPa HBO治疗组为佳。结论：HBO治疗对海巴神经元损伤有保护作用,减少神经元凋亡,为高压氧治疗缺血性损伤有疗效机理之一。     

鼠尾草酸对Aβ损伤海马神经元的保护作用研究

采用Aβ诱导建立海马神经元损伤模型,CCK-8检测神经元的活性,RT-PCR检测神经元凋亡相关基因Caspase-3 mRNA的表达,探讨了鼠尾草酸对Aβ所致海马神经元损伤的保护作用及其机制。结果显示,浓度在5~10μmol/L时,鼠尾草酸预处理能显著下调Aβ损伤导致的Caspase-3 mRNA表达的升高,增强神经元活力。表明鼠尾草酸预处理可以保护Aβ所致小鼠海马神经元的损伤,其机制可能与鼠尾草酸调控神经元凋亡相关基因caspase-3 mRNA的表达有关。     

高压氧对脑缺血再灌注海马CA_1区神经元凋亡作用的研究

目的和方法 :应用TUNEL检测技术 ,对沙土鼠前脑缺血 2 0min后再灌注 3d模型 ,用HBO治疗连续 3d。观察HBO作用下海马CA1区神经元凋亡变化 ,研讨HBO对脑缺血再灌注损伤的疗效及其机理 ,为临床应用HBO治疗疾病提供理论依据。结果 :沙土鼠脑缺血再灌注 3d后海马CA1区大量神经元凋亡 ,HBO治疗组凋亡细胞数明显减少 (P <0 .0 1) ,并以 0 .2 5MPaHBO治疗组为佳。结论 :HBO治疗对海马神经元损伤有保护作用 ,减少神经元凋亡 ,为高压氧治疗缺血性损伤的疗效机理之一     

补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡的影响

目的:研究补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠神经元凋亡的影响。方法:利用末端标记法,泱l定补阳还五汤干预后,脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中神经元的凋亡情况。结果:补阳还五汤能明显降低神经元凋亡百分率,减轻病理损害。结论:补阳还五汤可显著抑制由缺血再灌注诱导的脑神经元凋亡,从而起到一定程度的神经保护作用。     

川芎嗪对Aβ25-35诱导体外大鼠海马神经元细胞凋亡的影响

本文通过Aβ25-35诱导体外原代培养的SD乳大鼠海马神经元,建立Aβ毒性损伤细胞模型,结合AnnexinV-FITC/PI荧光双染法流式细胞术、MTT比色法、实时荧光定量PCR及Western blot方法检测川芎嗪(tetrameth-ylpyrazine,TMP)对原代培养的海马神经元细胞活性、早期凋亡率和Bax、Bcl-2基因表达的影响。结果显示川芎嗪高、中剂量可明显增强细胞活性,增加神经元细胞的存活率(P<0.01),可显著抑制海马神经元细胞早期凋亡(P<0.01),抑制凋亡蛋白Bax的表达(P<0.01),增强抗凋亡蛋白bcl-2的表达(P<0.01)。川芎嗪可通过调节Bax/Bcl-2平衡抵抗Aβ25-35诱导的海马神经元凋亡,降低Aβ的神经元毒性,对海马神经元损伤有明显的保护作用。     

瘦素对小鼠脑缺血/再灌注损伤神经元凋亡的影响

目的：研究Leptin在脑缺血性损伤神经元凋亡中的作用及其机制。方法：将75只雄性昆明小鼠完全随机分成3组,即假手术组、缺血/再灌注模型组、Leptin干预组;通过大脑中动脉栓塞（MCAO）复制小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,Leptin干预组在缺血0 min腹腔注射Leptin（1μg/g体重）,TUNEL染色检测神经元凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因bcl-2和caspase-3 mRNA表达,免疫组化凋亡相关基因bcl-2和caspase-3蛋白水平的表达。结果：模型组脑缺血中心区神经元以坏死为主,与假手术组相比,其半影区神经元凋亡数量显著增多、促凋亡基因cas-pase-3和抑凋亡基因bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）;与模型组比较,Leptin干预组半影区凋亡神经元数量显著减少、caspase-3 mRNA和蛋白表达水平显著降低（P<0.01）,抑凋亡基因bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。结论：Leptin能够通过上调抑凋亡基因bcl-2表达,下调促凋亡基因caspase-3表达抑制神经元凋亡,在脑缺血性损伤中发挥神经保护作用。     

神经元凋亡的离体模型及其检测技术

近年来,随着细胞凋亡研究的深入,神经元凋亡与神经退变病的关系愈发引人注目,已建立多种神经元凋亡的离体模型.多种因素如营养剥夺、自由基、谷氨酸、低钙及β-淀粉样蛋白等均可诱发神经元凋亡.凋亡的检测,可先从酶或蛋白质的变化判断神经元的损伤情况,再结合形态学观察,最后通过DNA电泳等确证.     

PKC对原代培养神经元NF-кB表达的影响

用蛋白激酶C（PKC）刺激剂佛波醇酯（PMA）和PKC抑制剂Rottlerin处理培养神经元,RT—PCR法检测神经元NF—xBp65 mRNA的表达;用PMA和NF—κB抑制剂TPCK处理培养神经元,流式细胞术AnnexinV／PI法检测细胞早期凋亡率。观察PKC对原代培养神经元核转录因子kappaB（NF～KB）表达的影响,探讨PKC参与缺血性神经元损伤的可能机制。结果显示PKC可促进NF—κB的表达;NF—κB可诱导培养神经元的早期凋亡。由此可以得出PKC激活参与神经元的损伤可能是通过引起神经元内NF—κB的表达而实现的.     

Che-1通过抑制自噬减轻氧糖剥夺所致神经元损伤的研究

目的:研究Che-1蛋白对氧糖剥夺(Oxygen glucose deprivation, OGD)所致神经元损伤的保护作用及机制。方法:OGD处理神经元后,采用免疫荧光染色和免疫印迹法检测Che-1蛋白的表达;慢病毒转染神经元实现Che-1过表达,检测乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH)释放量和流式细胞术检测神经元凋亡反映OGD所致神经元损伤程度,采用免疫荧光染色和免疫印迹法检测神经元自噬;使用自噬激动剂雷帕霉素(Rapamycin)处理神经元,并通过检测LDH释放量和流式细胞术研究自噬在Che-1保护作用中的作用。结果:免疫荧光结果显示,OGD后神经元Che-1蛋白表达明显增高;免疫印迹结果显示,OGD后6至48 h神经元Che-1蛋白表达明显增高;慢病毒转染过表达Che-1蛋白后,OGD所致神经元LDH释放量明显减低,且OGD所致神经元凋亡明显减少;过表达Che-1蛋白可显著减少OGD所致神经元Beclin1和LC3II的表达;自噬激动剂Rapamycin可逆转Che-1对OGD所致神经元损伤的保护作用。结论:过表达Che-1蛋白可通过抑制神经元自噬对OGD所致神经元损伤发挥保护作用。     

脑益康药物血清对谷氨酸诱导海马神经元损伤的保护作用

目的:探讨脑益康药物血清对谷氨酸(Glu)诱导的海马神经元损伤的保护作用。方法:大鼠海马神经元培养后,采用形态学观察、MTT法及DAPI染色法检测脑益康药物血清对Glu损伤细胞活力的影响,采用RT-PCR和免疫组化方法检测脑益康药物血清对Glu损伤细胞PTEN表达的影响。结果:脑益康药物血清可明显提高Glu损伤的海马神经元的细胞活力,减少PTEN的表达。结论:脑益康药物血清对Glu诱导的海马神经元损伤有保护作用,其机制可能与减少PTEN表达,抑制神经元凋亡有关。     

缺糖缺氧对体外培养海马神经元的影响

目的：观察缺糖缺氧诱导的培养海马神经元损伤。方法：取培养12d的海马神经元,在缺糖缺氧条件下分别培养0．5～4h后取出,换原神经元培养液在常氧条件下继续培养24h。用0．4％台盼蓝染色,检测神经元坏死,并用TUNEL法检测神经元凋亡,计算存活、坏死和凋亡神经元所占百分率。同时用图像分析仪测定存活、坏死和凋亡神经元的胞体面积、周长和等园直径。结果：培养的海马神经元急性缺糖缺氧后0．5～4h,随缺糖缺氧时间的延长,坏死神经元逐渐增多,缺糖缺氧后0．5～2h再恢复糖和氧供应后24h,凋亡神经元明显增多。图像分析的结果表明,坏死神经元的胞体面积、周长和等园直径均明显大于凋亡神经元。结论：缺糖缺氧可引起海马神经元严重损伤,在急性缺糖缺氧后0．5～4h引起的神经元死亡以坏死为多见,但在缺糖缺氧后0．5～2h再恢复糖和氧供应后24,神经元死亡则以凋亡为多见。     

肝细胞生长因子对氧糖剥夺/再灌注神经元的保护作用

本文旨在探讨肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）对神经元氧糖剥夺/再灌注损伤的影响。取原代培养12d的Sprague-Dawley大鼠大脑皮层神经元,无糖、无氧（95%N2＋5%CO2）孵育2h后,换含25mmol/L葡萄糖的培养液、常氧培养0-24h,以MTT比色法检测细胞活力、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）漏出率作为细胞损伤指标,建立体外氧糖剥夺/再灌注损伤细胞模型;用流式细胞仪和Hoechst33258染色分析细胞凋亡率;用RT-PCR和Western blot分别检测大鼠脑皮层神经元HGF受体c-Met mRNA和蛋白的表达。于氧糖剥夺2h/再灌注24h处理前2h,加入不同终浓度（5-120ng/mL）的HGF,观察HGF对皮层神经元的影响。结果显示,c-Met表达于皮层神经元,氧糖剥夺2h/再灌注24h后,c-Met mRNA和蛋白表达均显著上调,神经元细胞活力明显降低,LDH漏出率和细胞凋亡率显著增高。HGF预处理明显促进氧糖剥夺/再灌注损伤神经元的存活,降低LDH漏出率,最大效应剂量为80ng/mL。流式细胞术和Hoechst33258染色结果均显示,HGF（80ng/mL）显著降低氧糖剥夺/再灌注神经元的细胞凋亡率。此外,c-Met抑制剂SU11274（5μmol/L）完全阻断HGF的神经保护作用。结果表明,HGF对皮层神经元氧糖剥夺/再灌注损伤具有直接的保护作用,呈一定的剂量依赖关系,并能有效对抗神经元凋亡。     

锌离子调节皮质酮对原代培养大鼠海马神经元的损伤

探讨皮质酮对原代培养大鼠海马神经元的损伤效应及锌的调节作用。用原位染色和RT-PCR方法,分别检测神经元的损伤情况及NMDA受体三种亚基(NRl、NR2A、NR2B)mRNA的表达。皮质酮(5μmol／L)作用2,4h可明显降低海马神经元的存活率,导致神经元凋亡,并随着作用时间的延长而加重;锌离子明显影响皮质酮对海马神经元的损伤效应：同时加入皮质酮和低、中浓度Zn^2 (10、100μmol／L),可明显降低神经元凋亡率,而加入高浓度Zn^2 (250μmol／L)则加重神经元损伤。皮质酮作用24h后,海马神经元NRl、NR2BmRNA的表达水平增高,而同时加入低、中浓度Zn^2 (10、100μmol／L)的海马神经元NRl、NR2BmRNA表达水平与对照组接近;NR2AmRNA表达无明显变化。这些结果表明,锌对皮质酮所致应激损伤的调节具有双向性;NMDA受体亚基水平的变化可能是其中重要环节之一。     

Che-1通过mTOR通路调控自噬在谷氨酸所致神经元损伤中的作用研究

目的:观察谷氨酸(glutamate, Glu)对神经元Che-1蛋白表达的影响,研究过表达Che-1对Glu所致神经元氧化应激性损伤的作用,并以mTOR调控的细胞自噬通路为靶点,探讨Che-1在Glu所致神经元损伤中发挥作用的分子机制。方法:用Glu损伤神经元后,采用免疫学及分子生物学等方法检测Che-1蛋白的表达;用慢病毒转染神经元增加Che-1表达,用乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH)释放量和流式细胞术等方法检测神经元凋亡程度,采用免疫荧光染色和免疫印迹法检测神经元自噬关键蛋白表达水平;使用mTOR特异性抑制剂雷帕霉素(Rapamycin)提高神经元自噬水平,并通过检测LDH释放量和流式细胞术研究自噬在神经元转归中的作用。结果:Glu可显著增加神经元Che-1蛋白表达;过表达Che-1可减轻Glu所致神经元损伤,并减轻Glu所致神经元自噬;通过Rapamycin激活自噬可逆转Che-1对Glu所致神经元损伤的保护作用。结论:过表达Che-1蛋白可通过抑制神经元自噬对Glu所致神经元损伤发挥保护作用。     

SOD2在姜黄素减轻氧糖剥夺所致神经元损伤中的作用

目的:探讨二型超氧化物歧化酶(Mn-SOD,SOD2)是否介导了姜黄素(Curcumin,Cur)对氧糖剥夺模型(Oxygen-Glucose Deprivation,OGD)损伤神经元的保护作用。方法:本研究采用HT22神经元细胞暴露于OGD环境中3 h模拟神经元缺血缺氧损伤,SOD2-si RNA抑制神经元SOD2蛋白表达后,通过噻唑蓝法(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)检测细胞活力,比色法测量培养基乳酸脱氢酶(Lactic Dehydrogenase LDH)水平,流式细胞仪计算细胞凋亡率,Western blot测定凋亡蛋白Cleaved Caspase-3表达,并观察细胞形态和线粒体功能。结果:与正常培养的Control组相比,OGD组细胞活力显著降低,LDH释放明显增加,细胞凋亡率和Cleaved Caspase-3表达显著上升,细胞形态破坏并降低线粒体膜电位(MMP)和线粒体复合物1(Mitochondrial Complex 1 Activity)的活力(P0.05),100 ng/ml的Cur可显著减轻OGD诱导的神经元细胞的上述损伤性改变(P0.05)。而SOD2-si RNA显著逆转Cur对OGD诱导的神经元细胞损伤的保护作用(P0.05),SC-si RNA则未对Cur产生的神经保护作用造成显著干扰(P0.05)。结论:Cur可能通过上调SOD2的表达,减轻OGD对神经元细胞的损伤。     

缺血诱导体外培养海马神经元损伤机理的探讨

缺血性神经元损伤的机理是神经科学领域极为关注的问题。本实验用体外培养海马神经元建立缺血模型,通过检测神经元死亡率以及观察由缺血引起的神经细胞内生化代谢改变所致的神经元功能障碍,探讨缺血性神经元损伤的机理。结果发现缺血组、缺葡萄糖组神经元死亡率最高,且通过检测细胞膜表面磷脂酰丝氨酸的变化证实此二组神经元凋亡率也最高,进一步研究还发现缺血可引起神经元细胞骨架结构改变,使神经元功能遭到破坏,最终导致神经元不可逆损伤。     

选择性代谢性谷氨酸受体5激动剂CHPG对创伤性神经元损伤的保护作用研究

目的：研究选择性代谢性谷氨酸受体5激动剂2-氯-4羟苯基甘氨酸（CHPG）对创伤性神经元损伤的保护作用,并初步探讨其保护机制。方法：大鼠皮层神经元原代培养10天后,采用机械划伤的方法建立损伤模型,采用乳酸脱氢酶（LDH）测定和Hoechst 33342染色观察CHPG对神经元的保护作用。结果：①CHPG显著降低损伤后LDH的释放和神经元凋亡。②与对照组相比,CHPG增加了ERK与Akt的磷酸化水平。③使用ERK抑制剂PD98059或者Akt抑制剂LY294002都可以部分逆转CHPG的保护作用。结论：CHPG可以减轻创伤性神经元损伤,这种保护作用可能是由ERK和Akt信号通路介导的。     

亚低温抑制脑缺血再灌注大鼠细胞凋亡机制的研究进展

脑缺血再灌注损伤的主要机制是多种因素诱导的神经元凋亡。而神经元凋亡在一定程度上是可以调控和逆转的。亚低温以其对条件的要求不高实施方便等特点,奠定了其可以大范围推广的基础。作为能够辅助治疗脑缺血再灌注损伤的措施之一,亚低温的作用已经越来越多的得到了大家的重视,其脑缺血保护机制的相关研究也逐年增加。现阶段研究者对亚低温脑保护作用的研究重点放在了抑制细胞凋亡的机制上,也证实了亚低温的脑保护作用的机制和其抑制细胞凋亡密不可分。本文针对这一点,对近几年有关亚低温抑制大鼠脑缺血再灌注诱导的细胞凋亡机制的研究进展作一综述,为亚低温治疗脑缺血性疾病的临床应用提供理论支持。