Aβ1-15疫苗预防Tg2576小鼠脑病理变化和认知退化的研究

探讨Aβ亚单位疫苗接种后对Tg2576小鼠脑病理变化和认知退化的预防作用．32只5月龄Tg2576小鼠随机分成4组：对照组（只接种佐剂）,Aβ42组（接种Aβ42疫苗）,Aβ1-15小组（接种Aβ1-15疫苗）和Aβ36-42组（接种Aβ36-42疫苗）,每组8只,3组接种疫苗小鼠的血清抗Aβ42抗体滴度比对照组显著增高;脑组织匀浆内也可检测到少量抗体．Morris水迷宫实验结果显示Aβ42组、Aβ1-15小组和Aβ36-42组与对照组小鼠的行为学有明显改善．取各组2只小鼠的脾细胞培养,经Con A或各自抗原刺激后,3组疫苗免疫后小鼠脾细胞增殖显著高于对照组;Aβ42组,IL-4和IL-10相对较高,而IL-2和INF-γ相对较低;Aβ1-15小组中IL-4和IL-10较高;Aβ36-42组IL-2和INF-γ较高．免疫组织化学法显示对照组小鼠脑皮质与海马部位有大量老年斑,而Aβ42组和Aβ1-15组脑内无老年斑出现,Aβ36-42组小鼠脑内有少量老年斑．实验证明Aβ1-15亚单位疫苗可防止Tg2576小鼠认知行为的退化,阻止Tg2576小鼠脑内Aβ沉积和老年斑的形成．     

缺血诱导体外培养海马神经元损伤机理的探讨

缺血性神经元损伤的机理是神经科学领域极为关注的问题。本实验用体外培养海马神经元建立缺血模型,通过检测神经元死亡率以及观察由缺血引起的神经细胞内生化代谢改变所致的神经元功能障碍,探讨缺血性神经元损伤的机理。结果发现缺血组、缺葡萄糖组神经元死亡率最高,且通过检测细胞膜表面磷脂酰丝氨酸的变化证实此二组神经元凋亡率也最高,进一步研究还发现缺血可引起神经元细胞骨架结构改变,使神经元功能遭到破坏,最终导致神经元不可逆损伤。     

大鼠脑缺血区细胞间粘附分子ICAM-1表达和LFA-1阳性细胞浸润的研究

研究粘附分子和白细胞与脑缺血／再灌流损伤的病理联系,运用原位杂交和免疫组化技术对36只SD大鼠脑缺血区细胞间粘附分子（ICAM－1）表达和淋巴细胞机能相关抗原（LFA－1）阳性细胞浸润进行了观察。结果显示,脑缺血区的毛细胞血管内皮细胞表达ICAM－1 mRNA发生于脑缺血1h,在脑缺血1h／再灌流8h达到高峰。而脑缺血区毛细血管ICAM－1蛋白质的表达则发生于脑缺血1h／再灌流2h,高峰出现于脑缺血1h／再灌流16h,LFA－1阳性细胞在脑缺血区的聚集发生在脑缺血1h,并随再灌流时间延长,其聚集数量逐渐增加。结果提示,脑缺血／再灌流能诱导缺血区的血管内皮细胞表达ICAM－1 mRNA和蛋白质,进而导致白细胞在脑缺血区的浸润,此可能是脑缺血／再灌流损伤的病理机制之一。     

老年学习记忆减退大鼠脑突触体膜流动性改变

选用Morris水迷宫将老年大鼠分为学习记忆正常和学习记忆减退两部分,采用荧光偏振技术,对青年、老年记忆正常和老年记忆减退鼠脑分离实触体膜流动性进行测定,并检测神经节苷脂GM1对膜流动性的影响．结果表明老年记忆减退鼠新皮质、海马结构突触体膜荧光各向异性明显增加,即膜流动性显著降低,GM1对膜流动性有明显改善作用．相关分析表明新皮质、海马结构实触膜流动性与老年学习记忆减退密切相关,GM1的积极作用为临床治疗提供实验依据．     

4Aβ_(15)基因在毕赤氏酵母中的分泌表达及初步纯化

以pQE4Aβ15为模板,PCR扩增4Aβ15基因,并克隆到pMD18T载体中.以之进一步构建了酵母表达载体pPICZα4Aβ15.通过电转化,重组质粒pPICZα4Aβ15被整合到毕赤氏酵母GS115基因组中.甲醇诱导GS115/pPICZα4Aβ15表达,得到重组蛋白.SDS-PAGE显示重组蛋白的分子质量为18 kD,而4Aβ15的分子质量理论值为8 kD,经Western blot和质谱分析证实重组蛋白为4Aβ15.毕赤氏酵母GS115/pPICZα4Aβ15工程菌发酵上清经60%饱和硫酸铵沉淀初步纯化,获得纯度为80%的重组4Aβ15.     

天然抗氧化剂TA9901对Aβ1～40肽自由基形成的抑制作用

老年性痴呆脑中β 淀粉样蛋白 (Aβ)聚集和毒性作用与自由基的产生关系密切 ,TA990 1具有极强的抗氧化和清除自由基的作用。本研究重点探讨TA990 1对在Aβ聚集过程中肽自由基形成的影响。用 0 1%Aβ1～ 40 单独或分别与相同百分浓度的TA990 1、维生素E(VE)乳化液和TA990 1加VE在 37℃恒温箱中共同孵育 ,在孵育液中加入 5 0mM的自由基捕捉剂本叔丁基氮酮 (PBN) ,分别在孵育后的第 1d、2d、3d、6d利用BrukerRCS10 6电子顺磁共振仪 (EPR)检测 ,分析自由基的性质和药物对自由基的清除率。结果证实 ,在不同条件下 ,Aβ在老化过程中产生曲线强度和分裂不同的EPR曲线 ;以第 3dEPR谱第二峰的线宽代表各组自由基的强度 ,计算TA990 1、VE和TA990 1加VE对自由基的清除率分别为5 0 4 6 %、31 2 8%和 36 77%。上述结果提示 ,TA990 1抑制Aβ的毒性作用和纤维形成与其强烈的清除自由基的作用有关。