血满草RAPD-PCR反应体系的建立与DNA指纹图谱研究

目的:获得稳定性、重复性好的RAPD-PCR反应体系,并构建血满草DNA指纹图谱和进行遗传多样性分析。方法:以血满草3个居群11个个体的幼叶为材料,CTAB法提取基因组DNA,从模板浓度、引物浓度、d NTPs浓度和Taq DNA聚合酶的用量,构建最佳的RAPD-PCR反应体系,通过扩增带型的差异构建其DNA指纹图谱,利用Popgen32、NTSYS2进行遗传多样性分析。结果:3个RAPD引物扩增血满草3个居群11个样品共获得27条可靠、清晰和重复性高的条带,其中17条是多态条带。引物SBSA5和SBSA11扩增条带组合可以构建11个样品的个体特异DNA指纹图谱。供试血满草居群间遗传距离在0.1493~0.2312之间;居群内的遗传多样性分别为0.1102、0.0153、0.2294。遗传距离和相似性聚类分析表明,样品间的遗传距离与居群的地理分布关系不明显。结论:RAPD分子标记在构建血满草DNA指纹图谱是可行的,由其构建的指纹图谱可以将供试个体相互区分鉴别出来。无论是居群间还是居群内,供试血满草的遗传多样性均较低,居群间的遗传分化较小,可能还在属于同一个大的居群。     

虎杖种质资源的分子标记研究

本文应用RAPD、ISSR和SRAP标记对26份虎杖种质资源遗传多样性进行检测.在22个引物中有17个引物(77.3%)扩增产物具多态性,多态性水平相对较高.22个引物共得到98条扩增DNA片段,其中90.8%具有多态性.每个多态性引物平均可扩增出5.24个多态性片段.聚类分析表明,利用BAPD、ISSR和SRAP技术相结合可将全部供试材料区分开,26份材料在Gs值0.54水平上全部聚为一类,以所有材料间的平均遗传相似遗传系数0.71为阈值,将其分为11类.虎杖种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异,RAPD、ISSR和SRAP标记可作为构建虎杖DNA指纹图谱的有效工具.     

锥栗种质资源遗传多样性的SRAP分析

应用SRAP分子标记法,采用筛选出的15个引物组合,对采自湖南、浙江、四川、贵州、福建5省的17个野生锥栗居群资源及23份锥栗栽培品种进行了遗传多样性分析,旨在为锥栗遗传背景分析和种质创新提供依据。17个野生锥栗居群共扩增出221个位点,平均多态性位点数为155.06,多态性位点百分率为70.16%。总遗传多样性指数(Ht)、居群内遗传多样性指数(Hs)、Nei's基因多样性指数、Shannon's信息指数分别为0.3636、0.2466、0.2460、0.3677,说明野生锥栗居群具有较高的遗传多样性和变异度。其中,衡山(HS)居群的多态性位点百分率最高,为85.07%,吉首小溪村(JS)居群次之,为83.26%,表明衡山、湘西一带为湖南省野生锥栗居群遗传多样性最丰富的区域。UPGMA聚类分析表明,浏阳溪江居群和衡山居群间的遗传相似性最大,亲缘关系最近;贵州黎平居群和岳阳月田镇居群间的遗传相似性最小,遗传差异较大。23个锥栗品种多态性位点百分率占比为89.14%,遗传相似性系数在0.66~0.85之间,且在遗传相似性系数0.66处,大尖嘴单独聚为一类,反映出它的遗传基础与其他品种具有较大的差异;在遗传相似性系数0.85处,华栗2号和铁锥被聚为一类,表明这2个品种亲缘关系最近,遗传差异最小。此外,还构建了Em1-Me2、Em2-Me1、Em2-Me2和Em2-Me3共4个引物组合的SRAP数字指纹图谱,为锥栗品种的快速鉴定提供了参考依据。     

新疆枸杞种质资源遗传多样性分析及DNA指纹图谱构建

利用SCoT分子标记对新疆枸杞种质资源进行遗传多样性分析和DNA指纹图谱构建,为杂交育种和种质鉴定提供理论依据。结果显示:9条SCoT引物扩增出条带256条,其中219条为多态性条带,多态性比率达85.62%,多态性信息含量(PIC)值变化范围在0.77~0.91之间,平均值为0.85,观测等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、Nei's基因多样性指数(H)和Shannon信息指数(I)的平均值分别为1.8562、1.4350、0.2611、0.3989,聚类分析表明,遗传相似系数变化范围在0.5938~0.8398之间,在遗传相似系数为0.66和0.71处,可将30份材料分别分为2大类和4个亚类,主坐标分析结果和聚类结果基本一致,同时利用5条多态性SCoT引物构建了30份材料的DNA指纹图谱。新疆枸杞种质资源遗传多样性水平较高,且SCoT分子标记适于新疆枸杞种质资源遗传多样性分析和DNA指纹图谱构建,该研究结果为新疆枸杞种质资源评价、鉴定和新品种选育奠定了基础。     

湖北星斗山台湾杉居群的遗传多样性研究

采用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法对孑遗植物台湾杉分布于湖北星斗山的野生和栽培居群共42个个体进行了遗传多样性分析。从60个随机引物中筛选出13个引物,共扩增出155条清晰谱带,多态位点百分率为72.9%。野生居群和栽培居群的多态位点百分率分别为65.81%和59.35%;Nei’s基因多样性分别为0.2001和0.1911;Shannon’s信息指数分别为0.3120和0.2946。野生居群的遗传多样性高于栽培居群,表明这些原生古树的后代出现了一定程度的遗传衰退。用UPGMA方法对42个单株聚类可知,来自野生群体的个体和来自栽培群体的个体明显地各聚为一类。尽管孑遗物种台湾杉在湖北仅有一个野生群体,且为零星分布,总个体数40多株,但仍保持较高的遗传多样性水平,这说明遗传多样性不是导致其种群濒危的主要原因,导致台湾杉种群濒危的原因可能与台湾杉自然种群及群落所处生境的直接破坏及其本身生物学和生态学特性所导致的自然更新不良有着密切的联系。     

橡胶树种质资源遗传多样性研究I.速生种质遗传多样性RAPD分析

应用RAPD技术对8份野生种质和12份栽培种质进行遗传多样性分析,筛选到18个具有多态性扩增的引物,共扩增出128条带.据Nei-Li相似系数将20份材料分别聚为野生种质和栽培种质两大类.5个野生种质聚为野生种质类群,12个栽培种质和3个野生种质聚为栽培种质类群.研究结果表明,RAPD技术用于橡胶树种质资源研究,能够为野生种质优良特性导入栽培种质提供分子水平的参考依据.     

陆地棉×比克氏棉育成种质系的同工酶和RAPD分析

为了从分子水平上检验野生棉遗传特性向陆地棉转育的结果以及育成种质之间的遗传差异,通过等电聚焦电泳和RAPD技术,对来自科遗181陆地棉品系与野生比克氏棉杂交后代的6个遗传稳定的不同种质系及其亲本的过氧化物酶同工酶图谱和DNA指纹图谱进行了分析。结果如下（1）6个种质系的基本酶谱特征均倾向于陆地棉亲本,但在其中2个种质系的过氧化物酶图谱中,观察到各具有1条等电点值（PI）为4.85的野生亲本的特征带;（2）DNA指纹图谱的分析表明,不同种质系之间在基因组水平上具有高度的异质性。并且在OPO10和OPO112个引物的扩增图谱中观察到4个育成种质系具有野生比克氏棉亲本的特征带。     

三叶青种质资源遗传多样性的SRAP分析

对我国三叶青种质资源64个样本的遗传多样性进行SRAP分析。结果表明,从30条引物中筛选出10条条带清晰、重复性好的引物对64份供试材料的基因组DNA进行扩增.扩增出了57个多态位点,多态百分数为66. 67%~100%(均值为90. 38%),每条引物扩增得到的多态位点为4~10(均值为5. 7);平均检测等位基因数(Na)、平均有效等位基因数(Ne)、平均Nei's基因多样性指数(H)、平均Shannon多样性指数(I)分别为1. 9038、1. 5150、0. 3009和0. 45259;遗传相似系数的变异范围为0. 4603~0. 9206。通过UPGMA法聚类,在遗传相似性系数为0. 7256处,64份供试材料可分为9组;在江西三叶青种质中,既可与湖北、湖南、福建、广西等地三叶青种质聚为一类,也可与浙江三叶青种质聚为一类。此外,根据引物EM3ME3、EM13ME13和EM14ME14构建了64个基因型的指纹图谱。这些数据可为我国三叶青种质资源的评价、鉴定和新品种选育提供参考。     

广西部分地区野生茶树遗传关系EST-SSR标记分析

为了明确广西野生茶树种质资源的遗传背景,该研究从广西的宁明县、金秀县、苍梧县收集到14份地方野生茶树种质资源,以17个国家级茶树良种作为参照,采用EST-SSR分子标记技术,探讨了广西这三个地方野生茶树与国家级茶树良种间的亲缘关系以及广西地方茶树自身的遗传多样性。结果表明:15对EST-SSR引物共检测到68个等位基因,平均每个引物可扩增出4.53个,其中多态性位点为60个,多态性比率达88.2%。平均观测杂合度、平均期望杂合度、平均Shannon信息指数分别为0.42、0.55和0.97。PIC值在0.23~0.74之间,平均为0.52,多态性较好。遗传相似系数在0.53~0.9之间,平均值为0.71,31份供试材料在遗传相似系数为0.71分为5组群,76%参照品种聚在A组群,而广西本地的野生茶树资源则主要分布在B、C、D、E组群。利用该研究中的4对核心引物即可将31份供试材料全部区分开,挑选其中10个多态性较好的等位位点进行编码,构建31份供试种质的DNA分子指纹图谱。这表明广西野生茶树资源与国家级茶树良种间遗传差异较大、亲缘关系较远、遗传基础宽、多样性非常丰富,可作为茶树育种的亲本或开展茶树功能基因研究的材料。     

利用RAPD分子标记快速鉴定3个奇楠种质

利用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)分子标记技术,分析3个奇楠种质(ChiNan germplasm)亲缘关系,并快速鉴定。通过提取基因组DNA,筛选适用于奇楠种质分析的RAPD引物,PCR扩增获得扩增条带,分析奇楠种质的遗传多样性,并利用人工绘制品种鉴别示意图方法(manual cultivar identification diagram,MCID)将奇楠种质区分开来。从120条RAPD分子标记引物中筛选到10条适合于奇楠种质分析的引物,利用这10条引物发现奇楠种质在物种水平上遗传多样性高,3个奇楠种质不同居群间的遗传一致性高、遗传距离小,在聚类图上各自聚为一支;根据引物S63、S18和S100扩增的多态性谱带构建奇楠种质的MCID,很好地区分了3个奇楠种质。3个奇楠种质均具有特异性强、一致性好、稳定性高的特点,RAPD分子标记技术的MCID可以有效快速地鉴定区分3个奇楠种质。     

Determination of stoichiometry of radioiodination of proteins

A sensitive method for the detection of small quantities of hydrophobic antioxidant free radical scavengers such as butylatedhydroxytoluene (BHT) and butylatedhydroxyanisole (BHA) in aqueous samples is described. The procedure involves extraction of the hydrophobic free radical scavenger into an organic solvent phase, followed by the subsequent reaction of an aliquot of this extract with the stable cation radical tris(p-bromophenyl)amminium hexachloroantimonate (TBACA). In experiments with BHT and BHA, the loss of TBACA absorbance at 730 nm was found to be linearly proportional to the amount of antioxidant added, with quantities of BHT as small as 200 pmol being easily detectable. In aqueous suspensions of dimyristoylphosphatidylcholine vesicles, assays of the aqueous BHT concentration showed that BHT partitioned strongly into the membrane phase, achieving very high BHT/phospholipid ratios. For a given concentration of BHT, partitioning into the membrane phase was greater in large, multilamellar liposomes than in either small, single-walled vesicles or in purified rat brain synaptic vesicle membranes. Direct assay of BHT and BHA in phospholipid membranes, however, was complicated by a nonspecific interaction between TBACA and the phospholipid.