水体病毒浓缩条件的优化

病毒浓缩条件的优化是水环境病毒污染监测及灭活去除效率评价的基础,本文开发了在待浓缩水样中预先加入钠化蒙脱石吸附病毒以增加其沉降性能,并在优化絮凝条件下用聚合氯化铝絮凝沉淀蒙脱石钠的水体病毒浓缩方法.该方法对人为污染的脊髓灰质炎病毒(Poliovirus 1, PV1)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)、大肠杆菌噬菌体(Phage of Ecoli, E.cp)在闽江水、生活污水、自来水中分别有高于84.3%的浓缩回收率,说明该浓缩方法具有较广泛的适用性和应用前景,可为水体病毒污染监测及灭活去除评价提供一个简便、回收率高、成本低的浓缩方法.     

水体病毒钙离子絮凝浓缩新方法研究

研究建立了一种从水体中浓缩病毒的新方法,即钙离子絮凝-柠檬酸缓冲液洗溶法,该方法的要点是先用一定量的钙离子溶液和钙离子絮凝剂絮凝水体中的病毒,再用pH5.0的0.3mol/L的柠檬酸缓冲液洗溶,然后再进一步超滤浓缩。此法可方便地将水体中的病毒浓缩10000倍以上。应用该法分别对人工播种于饮用水中的f2噬菌体和脊髓灰质炎疫苗病毒(PV1)进行了浓缩,结果发现f2噬菌体的平均回收率达96%,而PV1的回收率为100%,均显著高于阳电膜过滤法(P<0.05)。该方法快速、简便、有效。     

水体病毒浓缩方法的建立和优化研究

采用氯化钙(CaC l2)、聚乙二醇(PEG,pH7.0)、聚乙二醇(PEG,pH11.5)、三氯化铝(A lC l3)沉淀、Am icon Utcra超滤离心装置和硝酸纤维素吸附膜6种浓缩方法,浓缩人工添加于水体的1型脊髓灰质炎疫苗病毒(PV1),并对浓缩实验条件进行选择和优化。结果表明,CaC l2和聚乙二醇(pH7.0)沉淀法适用于浓缩大容量水体中的病毒,而超滤离心管浓缩法适用于小容量水体,这3种浓缩方法的病毒回收率均达到100%。     

三氯化铝沉淀法浓缩水体中的病毒

近年来, 水源性病毒疾病的爆发在世界范围内被大量报道, 大量研究证实^[1], 外环境水体及淤泥是病毒存活循环的主要场所, 并因此频频引发传染病的流行。但在生活环境的各种水体中, 除生活污水外, 其所含有的病毒浓度往往很低, 以目前现有的检测方法, 仍然达不到不经浓缩而直接从水中检测病毒的目的。同时,食源性病毒的感染剂量非常低, 10?100 个病毒粒子即可引发感染。病毒在离体条件下存活力很强, 对各种理化因子有较强的抵抗力, 耐乙醚和弱酸, 用氯仿、反复冻融、超声波处理都不能使其失活。因此, 水环境中微量存在的病毒仍然对人类的健康带来很大的威胁。在我国, 虽然已经建立起了以PCR 为主导的病毒快速检测方法, 但是对于水样本的前处理技术至今没有找到十分理想的病毒浓缩方法, 无法有效去除样本中的抑制物, 这些因素都严重制约了针对水中食源性病毒的检测和预防。要掌握各种水体中病毒污染的基本状况, 样品中病毒的浓缩是能否得以成功检测的关键。另外, 目前世界上绝大多数国家所执行的标准中, 对病毒的检测标准及其指示生物都没有做出明确说明,归根结底的原因是由于至今没有建立起有效的方法。有鉴于此, 针对水中病毒研究的热点和存在问题, 本刊2009 年第1 期发表了寇晓霞、吴清平等^[2]针对自来水和污水两种不同水体中病毒的浓缩方法。在现有的检测和浓缩方法的基础上, 通过不断创新, 解决现有方法中存在的主要问题, 摸索制约水体中病毒浓缩方法的关键点, 评价不同方法的优劣和实用性。三氯化铝沉淀法最大的优点是可适用于绝大多数具有不同水质特性的水样, 特别是可以克服膜过滤法因易堵塞而对水体悬浮物浓度有严格限制的缺陷。另外, 就检测条件而言, 该方法无需过滤装置等, 也省去进口的阳电滤膜, 从应用推广的角度更为方便, 费用成本低, 对于系统研究我国水中常见食源性病毒检测和监测有一定的应用价值。目前, 该课题组对水体中病毒浓缩方法进行了多方面的应用。对广州河涌水的病毒污染情况进行了调研,初步了解和掌握了病毒的污染状况。广州市河涌水中食源性病毒污染的总阳性率为37.8％。其中有7 个点呈诺如病毒阳性, 8 个点呈轮状病毒阳性。文献[3?4]报道此类病毒的流行月份、季节性与环境水中调查的病毒污染情况基本吻合, 说明了临床发病与环境中此类病毒的污染有一定的相关性。另外还有些点呈甲肝病毒阳性和星状病毒阳性。调研结果表明三氯化铝沉淀法浓缩水体中病毒的方法具有实用性。     

水标本中脊髓灰质炎病毒三种浓缩方法的比较及改进方法的建立

本文用三种浓缩方法对人工污染标本进行了病毒回收率的比较试验,三种方法结果基本相同(47—49％)。在被检脊髓灰质炎Ⅰ型病毒蒸馏水标本中加1％NaCl可提高滤膜法对水中病毒的回收率;在含脊髓灰质炎病毒的河水、污水标本中加1％NaCl及AlCl_3(河水为0.0005mol/L、污水为0.001mol/L),离心沉淀过程中,我们惊奇地发现病毒全在沉渣中,结果表明用该方法病毒回收率竟提高了一倍(92—99％)。     

环境水体中GⅡ型诺如病毒浓缩研究

自行设计一种适合野外现场采样的病毒采集浓缩仪,采用一种新型阳离子膜NanoCeram,进行环境水体中GⅡ型诺如病毒浓缩研究。通过预实验,考察了预处理膜、不同的二次浓缩方法、不同洗脱液对病毒回收率的影响,随后优化整个浓缩过程并确定最佳的病毒浓缩方法。结果显示,预处理膜对病毒回收影响较大,PEG-NaCl沉淀、硅藻土吸附这两种二次浓缩方法的效果相当,选择0.15mol/L Na2HPO4作为硅藻土洗脱液。确定了NanoCeram阳离子膜的病毒回收率为3.02%。最后对北京市丰台区洋桥生活污水进行现场采样,成功检测到GⅡ型诺如病毒,证明该方法有效可行,适合于环境水体中诺如病毒的浓缩分离和检测。     

水体中病毒浓缩方法及其条件优化

本研究探讨了在自来水和污水两种不同的水体环境中, 三氯化铝沉淀法和正电荷滤膜法浓缩回收病毒的效率, 并比较应用不同的浓缩条件、洗脱物质时的病毒回收率, 从而建立有效的环境样本中病毒的浓缩方法。结果表明, 三氯化铝沉淀法在两种水体中的回收率均较高, 最高回收率分别达到96.0%和92.0%, 但正电荷滤膜法在两种水体中的回收率差别较大。在自来水中, 正电荷滤膜法的最高回收率为93.9%, 在污水中的最高回收率仅为69.9%, 这说明正电荷滤膜法适用于病毒含量较高且悬浮物等杂质较少的样本。在应用于自来水样时, 两种方法均可起到有效的病毒浓缩作用, 但在悬浮物等杂质较多的污水中, 三氯化铝法具有较好的回收效率。     

AT-2灭活HIV-1病毒及纯化回收鉴定

目的制备具备完整空间构型且纯度在90%以上的灭活HIV-1病毒,用于HIV疫苗研究。方法应用化学制剂2,2’-dithiodipyridine（aldrithiol-2;AT-2）灭活HIV-1病毒,对灭活的病毒超速离心浓缩并洗涤去除灭活用的化学制剂AT-2。采用分子筛技术去除灭活病毒中残存的杂质蛋白质。结果 250μmol/L AT-2与HIV-137℃作用1 h可以彻底灭活病毒的感染性,同时保留病毒的免疫原性。灭活的病毒纯化后检测不到AT-2的残留,检测牛血清蛋白残余量低于50 ng/mL。结论灭活的HIV-1病毒经过纯化后纯度达到95.6%,可以满足作为HIV疫苗研究的免疫刺激剂的使用要求。     

注射用胸腺肽灭活/去除可能的污染病毒的工艺

目的制备注射用胸腺肽,并评价其病毒灭活/去除工艺的可行性和可信度。方法将麻疹病毒(MV)、水痘带状疱疹病毒(VZV)和甲肝病毒(HAV)作为指示病毒,分别在pH值3.2±0.3于-20℃冻存21 d、80℃加热5min灭活病毒、在进压0.15 MPa、回流压0.05 MPa下先后用截留相对分子质量10kD的中空纤维柱和膜包滤器循环超滤去除病毒,并于病毒灭活/去除前后分别取样感染宿主细胞,做病毒滴定,以病毒是否灭活/去除或病毒量下降是否大于4.0 Log作为病毒是否有效灭活/去除的标准。结果经过酸沉灭活后,3种指示病毒的滴度均有所降低;经过加热灭活后,MV和VZV均未检出,滴度下降大于4.0 Log;经超滤去除病毒后,3种指示病毒均未检出,滴度下降均大于4.0Log,且经盲传复壮后均未检出病毒。结论注射用胸腺肽生产工艺中的低pH孵放法、加热法、超滤法的联合运用可以有效地灭活/去除病毒。     

水体环境的植物病毒及其生态效应

人和动物病毒污染水体的研究已有多年 ,并取得了可喜的成果 ,其研究已从单纯的环境监测和卫生评价向机制和规律等纵深方向发展。分子生物学方法已深入到水病毒学领域 ,利用基因探针和扩增技术检测水体病毒已成为重要的研究方法[1] 。然而针对水体植物病毒污染及其环境效应的研究就显得很薄弱。事实上水体中也有众多的植物病毒 ,并有可能导致严重的植物病毒病流行 ,如 1 994年福建省三明地区因“5 .2”大洪水 ,水中带有大量的烟草病毒 ,导致烟草花叶病大爆发 ,仅宁化县就损失烟叶 1 0多万担。本文将讨论水体植物病毒的浓缩、检测及可能来源 ,…     

广东省烟草花叶病病原病毒的鉴定

烟草花叶病是广东省产烟区的主要病害之一。我们在南雄等八个县进行调查,1983年至1984年的一般发病率为2～20％。根据血清学反应、病毒粒体形态、鉴别寄主反应及寄主范围、媒介昆虫种类、物理性质、交互保护反应等各项检验结果,鉴定广东省烟草花叶病病原是:三个黄瓜花叶病毒可能株系(普通株系CMV-C,烟草坏死株系CMV-TN,烟草黄色坏死株系(CMV-TYN),烟草花叶病毒(TMV),马铃薯病毒Y(PVY),烟草脉带花叶病毒(TVBMV)和烟草褪绿斑驳病毒(TCMV)(暂定)。     

Influenza Hemagglutinin and Neuraminidase Membrane Glycoproteins

Considerable progress has been made toward understanding the structural basis of the interaction of the two major surface glycoproteins of influenza A virus with their common ligand/substrate: carbohydrate chains terminating in sialic acid. The specificity of virus attachment to target cells is mediated by hemagglutinin, which acquires characteristic changes in its receptor-binding site to switch its host from avian species to humans. Anti-influenza drugs mimic the natural sialic acid substrate of the virus neuraminidase enzyme but utilize the much tighter binding of the drugs for efficacy. Resistance to one of the two main antiviral drugs is differentially acquired by the two distinct subsets of neuraminidase as a consequence of structural differences in the enzyme active site between the two phylogenetic groups.     

Construction of an infectious cDNA clone of Tembusu virus isolated from breeder Peking ducks

正Dear Editor,Since April 2010,an outbreak of a new disease has elicited symptoms of high fever,loss of appetite,and reduction in egg production in layer ducks in eastern China;this phenomenon has now spread throughout China(Cao et al.,2011;Su et al.,2011).The causative agent of the disease was identified as Tembusu virus(TMUV),which was classified into the genus Flavivirus,     

Towards a coherent nomenclature of plant viruses

正The International Committee on Taxonomy of Viruses(ICTV)has the decree to set the rules for the classification and naming of viruses.The species is the lowest level considered in the taxonomic hierarchy.In general,virus species are named according to the structure"isolation hostsymptomsand the word‘virus’".A typical example is Tobacco mosaic virus[Genus:To-     

芝麻病毒病病原研究——Ⅰ.芝麻矮化坏死病害的鉴定

在湖北武昌芝麻上分离到的矮化坏死分离物(DNe-I)侵染芝麻引起严重矮化,叶片皱缩坏死。它能够摩擦接种侵染7科14种植物。在苋色藜、千日红上引起局部坏死斑,侵染油菜和百日菊引起系统花叶和黄化。DNe-I能够被桃蚜、花生蚜以非持久性方式进行传播。病毒体外稳定性状:存活期4天,钝化温度60～65℃,稀释限点4×10~(-4)。提纯病毒为线状粒体,长度为770nm。病毒外壳蛋自为单一亚基组成,分子量为30,700±600D。制备抗血清微量沉淀法测定其效价为1:256。在油菜病组织中,观察到风轮状及长直片层叠聚体类型的胞质内含体。在血清学性质上,该分离物与芜菁花叶病毒密切相关,与花生轻斑驳病毒和花生斑驳病毒弱相关,与大豆花叶病毒和西瓜花叶病毒不相关。基于上述性质,DNe-I被鉴定为芜菁花叶病毒。这是国内芜菁花叶病毒自然侵染芝麻的首次报道。     

Epidemiologic interference of virus populations

Summary There are a few simulation studies for interference models in the literature but the present paper discusses an analytical model for the competition of two interfering virus populations in a community. The mathematical model consist of eight coupled differential equations which have up to four equilibrium points. Criteria for local stability are given.This paper has been read at the workshop on Nonlinear Models in Biology and Medicine, 23rd Biometric Colloquium, German Region of the Biometric Society, Nuremberg, March 1977     

Occurrence and distribution of viruses infecting potato in Russia

Potato viral disease has been a major problem in potato production worldwide including Russia. Here, we detected Potato Virus M (PVM), P (PVP), S (PVS), Y (PVY), and X (PVX) and Potato Leaf Roll Virus (PLRV) by RT-PCR on potato leaves and tubers from the Northwestern (NW), Volga (VF), and Far Eastern (FE) federal districts of Russia. Each sample was co-infected with up to five viruses. RT-PCR disclosed all six viruses in NW, three in VF, and five in FE. Phylogenetic analyses of PVM and PVS strains resolved all PVM isolates in Group O (ordinary) and all PVS isolates in Group O. Seven PVY strains were detected, and they included only recombinants. PVY recombinants were thus the dominant potato virus strains in Russia, although they widely varied among the regions. Our research provides insights into the geographical distribution and genetic variability of potato viruses in Russia.     

小麦土传病毒在感病小麦细胞中的分布及小麦梭条斑花叶病毒RNA组分

四川雅安、陕西长安的土传小麦病毒病由小麦梭条斑花叶病毒(WSSMV)引起,而浙江安吉、新昌、江苏宜兴的病害则由WSSMV和土传小麦花叶病毒(SBWMV)所致。WSSMV和SBWMV可以同时复合侵染同一株小麦,但在病细胞中二者彼此独立分布。我国WSSMV RNA有2个基因组,分子量分别为2.6×10~6和1.5×10~6,与日本小麦黄花叶病毒(WYMV)一致。