用ISSR分子标记鉴别东北地区黑木耳生产菌株的研究

利用ISSR分子标记对东北地区黑木耳生产菌株进行了分子鉴别,结果表明在选用的20个UBC-ISSR引物中,有10个引物能对供试的27个黑木耳菌株基因组DNA进行扩增,获得的指纹图谱清晰稳定、多态性强。用NTSYS软件进行聚类分析,相似水平在0.75时,可将27个供试黑木耳菌株分为3个组群。研究结果说明ISSR分子标记,可以有效地用于黑木耳生产菌株快速准确鉴别,是黑木耳指纹图谱分析的理想手段。     

用ISSR分子标记鉴别东北地区黑木耳生产菌株的研究

利用ISSR分子标记对东北地区黑木耳生产菌株进行了分子鉴别,结果表明在选用的20个UBC-ISSR引物中,有10个引物能对供试的27个黑木耳菌株基因组DNA进行扩增,获得的指纹图谱清晰稳定、多态性强。用NTSYS软件进行聚类分析,相似水平在0.75时,可将27个供试黑木耳菌株分为3个组群。研究结果说明ISSR分子标记,可以有效地用于黑木耳生产菌株快速准确鉴别,是黑木耳指纹图谱分析的理想手段。     

用ISSR分子标记鉴别东北地区黑木耳生产菌株的研究

利用ISSR分子标记对东北地区黑木耳生产菌株进行了分子鉴别,结果表明在选用的20个UBC-ISSR引物中,有10个引物能对供试的27个黑木耳菌株基因组DNA进行扩增,获得的指纹图谱清晰稳定、多态性强。用NTSYS软件进行聚类分析,相似水平在0.75时,可将27个供试黑木耳菌株分为3个组群。研究结果说明ISSR分子标记,可以有效地用于黑木耳生产菌株快速准确鉴别,是黑木耳指纹图谱分析的理想手段。     

香菇菌株分子鉴别技术的分辨率比较

本研究运用酯酶同工酶、RAPD、IGS1和IGS24种方法鉴别2个野生香菇菌株和19个栽培香菇菌株,并比较这4种鉴别方法的分辨率,结果表明:16条酯酶同工酶带中有15条具有多态性,将21个供试菌株分成11个类型,分辨率为0.92;10个随机扩增引物共扩增出86个DNA片段,其中95.3%具有多态性,将21个供试菌株分成16个类型,分辨率为0.97;IGS1将21个供试菌株分成7个类型,分辨率为0.81;IGS2将21个供试菌株分成7个类型,分辨率为0.73。这4种鉴别方法中RAPD的分辨率最高,与这4种鉴别方法的综合分析结果相同,因此RAPD可以作为香菇菌株鉴别的可靠依据。     

两种PCR方法对木耳属菌株的遗传多样性评价

应用ERIC和RAPD两种PCR方法对木耳属3种29个菌株进行遗传鉴别,其中ERIC方法是首次运用于食用菌的研究领域。在相似系数75％的水平上,ERIC和RAPD分别将供试菌株分为9组和6组。由ERIC所得的聚类图可将黑木耳和毛木耳两个种区分开,而RAPD则不能完全区分两个种,但两种方法得到了一个相似的结果,即琥珀木耳与黑木耳的亲缘关系极其相近。Southern杂交实验进一步证明了ERIC所得到的29个菌株的同源性关系。分析表明,RAPD方法主要在种的水平上进行鉴别,而ERIC则可以在菌株水平上进行鉴别,结果与菌株栽培性状更为一致。研究结果表明ERIC-PCR是一种比RAPD更快捷可靠的分子标记方法,可以替代RAPD应用于木耳属的遗传多样性及遗传分类的研究。     

用RAPD和ISSR检测的橡胶树野生种质和栽培品种的遗传多样性

用19个RAPD引物和12个ISSR引物对14份野牛橡胶树种质和我国的37份栽培品种进行了遗传多样性分析。RAPD引物共产生132条带,多态性带占88．6％,相似系数变化范围在0．432—0．947。ISSR引物其产生101条带,多态性带占87．1％,相似系数为0．505—0．941。平均基因杂合度分析表明野生种质比栽培品种具有较高的遗传多样性。根据UPGMA法对51份材料进行聚类分析,结果表明,ISSR分析中所有材料可分为2类：第一类为野生种质,第二类为栽培品种：而RAPD分析中野牛种质和栽培品种不能被分为明显的两人类。虽然ISSR和RAPD的聚类分析结果存在差异,但对两种方法进行的相关分析表明,他们之间仍存在极显著相关性,相关系数为0．574。品种PR107、热研217等一些栽培品种可以通过特异带在51份供试材料中被区分开。这些结果可以对橡胶树的育种上作起到一定的指导作用,同时RAPD和ISSR技术也是进行橡胶树品种鉴定和遗传多样性研究的有效手段。     

分子标记对草原野生食用菌蒙古口蘑的鉴别分析

对采自内蒙古锡林郭勒草原的野生食用菌蒙古口蘑(Tricholoma mongolicum Imai.)等10个菌种进行了ITS和ISSR分子标记的鉴定,其中蒙古口蘑共计4个不同来源菌种,其它6个菌种为子实体与蒙古口蘑形态相近的常见草原菇类或市售食用菌,鉴定结果用RAPD进行辅助分析验证。从12条ISSR引物中筛选出2条可用引物,扩增总条带数为246条,多态性标记为215个,多态性频率为87.4%。经过NT-SYS软件聚类分析,发现在ISSR分析中结合ITS方法可以有效地将蒙古口蘑与其它菌种区分开,这与RAPD法的分析结果相一致,获得了可靠的野生食用菌分子标记方法。研究表明ISSR分子标记是蒙古口蘑等野生食用菌鉴定的理想手段之一。     

微卫星(TATG)n基序在香菇菌种中的验证

以（TATG）4重复序列为引物对香菇属的3个种13个菌株的微卫星区DNA进行PCR扩增,15%的琼脂糖凝胶电泳,获得了25个条带,并且在供试菌株上表现出多态性,可以实现遗传分类研究。为了验证微卫星分子标记实验准确性,又用RAPD技术对13个供试菌株进行了实验。7个引物在13个菌株上共获得了102条多态性条带。通过聚类分析,RAPD获得的分类结果与微卫星分子标记获得的结果一致。此外,为了证明微卫星分子标记获得的条带不是假阳性,在实验中回收了No.10菌株的PCR扩增产物,进行克隆测序。测序结果显示有（TATG）n基序存在,并且达到了微卫星基序重复数量的最低限度。通过本实验可知,香菇中是存在微卫星（TATG）n基序的, 且基序的多态性可以用于香菇的遗传分类研究。     

应用RAPD技术鉴别微生态菌种

目的：建立应用RAPD技术鉴别微生态菌种的方法,提高菌种鉴别水平。方法：应用RAPD（随机扩增多态性）方法,选用5条随机引物,利用PCR方法,对3株长双歧杆菌,3株嗜酸乳杆菌,3株粪肠球菌进行基因组DNA指纹图谱分析。结果：发现不同菌株扩增的DNA片段的大小、数量是有差异的。结论：此方法具有可重复性,方便、快速和准确的优势,可用于微生态制剂生产用菌株的鉴别。     

红皮云杉与嫩江云杉RAPD和ISSR分子标记反应体系优化和特异性检测

以红皮云杉和嫩江云杉为材料,采用现代分子标记技术-RAPD和ISSR标记研究红皮云杉与嫩江云杉间在基因组水平上的遗传差异。通过正交试验设计筛选RAPD和ISSR反应程序和反应体系。从近100个引物中筛选出3个RAPD引物和一个ISSR引物用来区分红皮云杉和嫩江云杉,它们分别是OPN07、OPA17、S25和ISSR67。用这4个引物扩增两种云杉基因组DNA,分别在1 000,950,1 500,2 000 bp处嫩江云杉有特异性谱带而红皮云杉没有。研究表明,采用RAPD和ISSR分子标记可以将红皮云杉和嫩江云杉在分子水平上加以区分,为今后进一步阐明云杉的系统进化,物种鉴定和种间杂交育种提供了理论依据。     

Use of intersimple sequence repeats markers to develop strain-specific SCAR markers for Lentinula edodes

Although Lentinula edodes is the second most important cultivated mushroom worldwide, most industrially cultivated strains have been identified only through traditional phenotypic analysis. Here, we report for the first time the use of sequence characterized amplified region (SCAR) markers for strain differentiation. SCAR markers were created by first generating and sequencing single intersimple sequence repeats fragments, and then designing primers based on these sequences to amplify strain-specific fragments of a certain size. One SCAR primer pair, ISL450F/R7 (amplifying a band of c. 450 bp), was designed to identify one strain of L. edodes (strain No. 7). The SCAR primer pair was then used to correctly amplify the single unique fragment from DNA samples taken from a total of 85 strains representing three separate species. Our data provide the foundation for a precise and rapid PCR-based strain-diagnostic system for L. edodes.     

Strain-typing of Lentinula edodes in China with inter simple sequence repeat markers

To validate strain typing by inter simple sequence repeat (ISSR) analysis in Lentinula edodes cultivars, 17 Chinese L. edodes strains including 15 cultivated strains cultivated on a large scale and two wild strains were analyzed with the ISSR technique. With the use of two ISSR primers, a total of 32 DNA products were detected, of which, 31 DNA products (96.9% of the detected products) were polymorphic between two or more strains. The profiles of those two primers could be employed to differentiate all of the tested strains. A cluster analysis based on ISSR data revealed that the 17 strains could be classified into two distinct groups. One group consisted of eight strains in which the cultivated strains were H (high-temperature)-type or B (broad-temperature)-type, and the other group comprised cultivated strains that were of the L (low-temperature)-type or M (medium-temperature)-type. In contrast to the two wild strains, the genetic diversity of 15 cultivated strains was very rich based on a similarity coefficient analysis.     

安徽野生香菇遗传多样性及杂种优势的ISSR分析

采用简单序列重复区间扩增多态性(Inter–simplesequencerepeat,ISSR)技术,利用13个引物对26个安徽野生香菇Lentinulaedodes菌株和6个香菇栽培品种进行了遗传多样性分析,构建了遗传相关聚类图,并根据ISSR分析选择遗传距离远近不同的亲本进行组合杂交,评价了其杂种优势。在78个ISSR标记中,多态性标记为61个,占78.2%。聚类分析显示,当以相异距离0.23为阈值,32个菌株被划为5个ISSR遗传组,多数菌株之间遗传相似性较低。这表明供试菌株在DNA水平上存在比较显著的遗传变异,具有较丰富的遗传多样性。杂种优势的检测表明亲本间遗传距离较大的组合其杂种优势也较强。     

SCAR分子标记技术在香菇菌株鉴定上的应用研究

为了建立一套基于DNA分子标记技术快速鉴定香菇菌株的有效方法,本研究首先通过对生产上常用的14个香菇菌株进行RAPD多态性分析,从香菇菌株162中扩增获得了一个片段长为1166bp的特异RAPD标记XG1166,随之利用分子克隆技术将该特异RAPD标记成功转化为稳定的SCAR标记。用同样的方法,本研究又从另一香菇菌株申香10号中获得了一段长度为347bp的特异SCAR标记SX347。试验结果表明,利用本研究获得的香菇菌株162和申香10号的特异SCAR标记,能在一天时间内准确鉴定出香菇菌株162或申香10号菌株的真伪。由此可见,SCAR分子标记是一种快速、稳定、准确鉴定香菇菌株的新方法, 可应用于食用菌种质资源保护利用、品种分类与鉴定和假种辨别。     

香菇品种遗传多样性RAPD分子标记的研究

对32个中国栽培香菇品种和2个野生子实体的遗传多样性进行了RAPD标记研究,9个引物共扩增出113条DNA带,83.19%具有多态性。结果显示,34个香菇菌株间均有遗传上的差异,但遗传相关性极高,表明中国栽培菌株间的遗传背景单一。     

Selection of strains of Lentinula edodes and Lentinula boryana adapted for efficient mycelial growth on wheat straw

Mycelial growth rates are presented for 11 strains of Lentinula edodes and six strains of Lentinula boryana cultivated on solid media: derived from malt extract (MEA); malt yeast extract (YMEA); and, YMEA plus soluble lignin derivatives (YMEA+WSLD). The results were compared with data for mycelial growth rates, of the same strains cultivated on substrates derived from wheat straw treated at different temperatures (50, 65, 75 and autoclaving at 121 degrees C). In general, the addition of WSLD significantly reduced mycelial growth rates in both species. The greatest mycelial growth rate was obtained on sterilized straw at 121 degrees C for the majority of strains. However, this growth was not significantly different from that obtained at 75 degrees C. L. edodes showed greater growth rates than L. boryana. The feasibility of using estimates of mycelial growth rate on YMEA and YMEA+WSLD are discussed as possible indicators of a strain's potential for mycelial growth on substrates derived from wheat straw.     

香菇杂交菌株辽香1号的初步鉴定

以申香4号、L26菌株为亲本,利用原生质体单核体杂交技术筛选获得1株高产、高抗、短柄的新菌株—辽香1号(Liao1)。形态学鉴定、拮抗实验、酯酶同工酶实验、ITS序列分析等是较常见且简单实用的菌株鉴定方法。采用上述方法对香菇菌株Liao1进行鉴定,以求得到科学结论,达到进一步推广的目的。结果表明,Liao1属于Lentinus edodes,但有别于其亲本申香4号、L26及其他供试菌株,可以初步认定为新菌株。     

翘鳞香菇信息素受体编码基因的克隆及其进化分析

翘鳞香菇是一种新近开发的具有很大市场潜力的食用茵新品种,但是对翘鳞香菇的分类地位还存在有一定的不确定性。本研究结合简并PCR和染色体步行技术克隆获得了翘鳞香菇B交配型位点中的信息素受体编码基因,然后对翘鳞香菇以及其它15种担子菌的信息素受体的氨基酸序列进行了系统分类学分析,结果显示,翘鳞香菇与香菇具有很近的亲缘关系。这个结果与运用ITS序列对包括翘鳞香菇在内的16种担子菌进行的系统分类学分析结果基本一致。本研究从系统分类学角度为判断翘鳞香菇的分类地位提供了丰富的实验证据。