RNA促进小鼠重组染色质白蛋白基因DNaseⅠ消化敏感性

同样的基因在不同的分化细胞中表达不同,基因的选择性表达问题涉及分化和衰老的本质。转录基因对DNaseⅠ(DNA酶Ⅰ)消化敏感,本文研究了RNA对小鼠重组染色质白蛋白基因DNaseⅠ消化敏感性的影响。分离BALB/c小鼠脑细胞核,加入终浓度为2mol/L的NaCl破坏核小体结构,加入不同量、不同来源的RNA,装透析袋,逐渐降低离子强度进行染色质重组。重组染色质中加入DNaseⅠ消化DNA,PCR扩增白蛋白基因的外显子1到外显子2约1200bp区段,PAGE电泳后,用银染色观察不同来源RNA促进DNaseⅠ对白蛋白基因的消化作用。不同组织来源（肝、肺、肾、脑）RNA对小鼠重组染色质中白蛋白基因DNaseⅠ消化敏感性均有促进作用,其中肝和肺RNA促进消化作用较强;酵母tRNA无显著促进消化作用;消化促进作用与RNA剂量有关。RNA能增加DNaseⅠ对白蛋白基因的消化敏感性且有组织（细胞）来源特异性。又委托丹麦Chemical R D 实验室合成2条与白蛋白基因互补的各23核苷酸的RNA,用其进行重组试验。结果表明,重组混合物中含有低至0.2μg/mL的RNA,即可以发挥显著的DNase I消化促进作用。     

凡纳滨对虾DNaseⅠ基因的克隆及原核表达

利用RT-PCR和RACE技术,从凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺中克隆了DNaseⅠ基因的全长cDNA序列。该序列全长1614bp,包含1209bp的开放阅读框,编码一个含403个氨基酸的蛋白;5′非翻译区为116bp,3′非翻译区为289bp。实时定量PCR分析结果表明,DNaseⅠ基因在肝胰腺的表达量是其他器官表达量的16～162倍,表明凡纳滨对虾DNaseⅠ基因属于胰腺型表达。本研究还利用酶切重组构建原核表达载体,并在大肠杆菌(Escherichia coli)中成功表达出了有活性的重组DNaseⅠ蛋白。     

重组旋毛虫plancitoxin-1-like活性位点突变体蛋白的核酸酶活性

旋毛虫plancitoxin-1-like(Ts-Pt)是旋毛虫125种DNaseⅡ家族蛋白中唯一具有典型DNaseⅡ活性区域HKD基序的核酸酶,且普遍认为,组氨酸位点是DNaseⅡ的活性氨基酸位点。为研究Ts-Pt活性位点突变体蛋白的核酸酶活性,利用重叠PCR方法获得Ts-Pt活性位点突变体片段,以p ET-28a(+)为载体构建重组表达质粒并在大肠杆菌中诱导表达。重组Ts-Pt突变体蛋白经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE分析。利用琼脂糖凝胶电泳法和核酸酶酶谱分析重组Ts-Pt突变体蛋白的核酸酶活性。成功构建含Ts-Pt突变体重组质粒的基因工程菌,SDS-PAGE和亲和层析纯化结果显示,重组Ts-Pt突变体蛋白呈包涵体表达。重组蛋白经复性后并没有表现出核酸酶活性,但核酸酶酶谱分析结果显示,包涵体表达的重组Ts-Pt突变体蛋白表现出降解DNA的能力。同时,N端和C端活性位点H及HCK和DHSK突变并不影响Ts-Pt的核酸酶活性,研究结果为进一步研究庞大的DNaseⅡ家族蛋白在旋毛虫发育和感染方面的作用提供一定的参考。     

用PCR法检查饮用水中的微生物

美国路易斯维尔大学生物学教授Ronald M.Atlas利用聚合酶链反应(PCR)法用野外水确认了检查饮料水中病原菌的方法的有效性,检测迅速而灵敏度高,而且没有污染等问题,定量性良好.Atlas在大阪召开的国际微生物学会的讨论会上(病原性微生物和基因重组微生物在排水和环境中的检查问题)发表了这项成果,在重组微生物的释放跟踪中强调了这种方法是有效的.这项研究是美国Perkin Elmer公司支持进行的.与该公司一起推行     

63例良性孤立肺结节的临床分析

目的:探讨直径≤30mm的外周型良性孤立肺结节的临床诊断和治疗.方法:分析总结63例外周型良性孤立肺结节的临床资料及手术方式.结果:63例良性孤立肺结节病理分布依次为:结核球,炎性假瘤,错构瘤,硬化性血管瘤,肺隐球菌病,纤维瘤,肉芽肿性炎,曲菌病,肺动静脉畸形,平滑肌瘤.63例患者均行手术治疗,其中肺叶切除10例,肺楔形切除53例,均痊愈出院.结论:在孤立肺结节中,良性疾病只占少数,在不能明确诊断的情况下,可在短期抗炎排除肺炎的可能性后积极手术探查.     

肺恶性孤立性纤维瘤一例报告

目的探讨肺恶性孤立性纤维瘤的临床病理特征、诊断及鉴别诊断。方法应用HE染色及免疫组织化学分析一例肺恶性孤立性纤维瘤的临床病理特点。结果患者男性,54岁,因咳嗽1月余,发现肺占位一周入院。病理学检测示:瘤细胞形态单一,梭形或卵圆形,片状弥漫排列;富于细胞区和细胞稀疏区交替排列,有血管外皮瘤样区域及致密的胶原样瘢痕沉积;灶性间质粘液变,局部区域富于血管并伴脉管扩张,细胞无明显异型。免疫组织化学观察发现肿瘤细胞vimetin、CD34、CD99和BCL2阳性,p53、SMA、Des、HMB45、MC、calretinin和D2-40阴性。结论肺恶性孤立性纤维瘤的发生率较低,应该加深对其临床病理特点的理解,结合临床与病理免疫组织化学确诊,避免误诊。     

开始艾滋病基因疗法临床试验

美国Immunex公司子公司美国Targeted Genetics公司和美国Fred Hurtchinson癌研中心前不久从美国国立卫生研究所的重组DNA顾问委员会获得能治疗HIV感染患者的治疗法的人基因疗法试验的许可。这种治疗法采用因患有艾滋病相关AIDS性淋巴瘤而接受骨髓移植的患者作实验。美国食品与药物管理局(FDA)很早以前就认可了这种实验。用这种方法从患者身上分离出特异地杀伤HIV感染细胞的T细胞。用组织培养进行增殖,返回患者,     

先天性支气管囊肿的影像学诊断

先天性支气管囊肿又称先天性肺囊肿,先天性支气管肺囊肿。本病多发生在肺内,称肺内支气管囊肿;少数发生在纵隔内,称纵隔支气管囊肿。在先天性支气管囊肿诊断中,影像学检查是不可缺少的,其影像学表现也是多种多样的。     

同尾酶技术在构建疟疾多价重组DNA疫苗中的应用

同尾酶是一类识别不同核苷酸序列但能酶切产生相同粘性末端的限制性内切酶,依靠同尾酶的这种特性,可以根据需要将不同的ＤＮＡ 片段进行灵活组合,获得各种排列顺序的多价表位重组疫苗．将这种方法用于疟疾多价重组ＤＮＡ 疫苗的研制;ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠免疫实验对所得重组疫苗ＰＵ２８６的免疫原性进行了测定．     

伊曲康唑序贯治疗肺曲霉球感染1例

肺曲霉感染分为侵袭性曲霉病、半侵袭性曲霉病(包括过敏性支气管肺曲霉病和过敏性肺炎)、过敏性曲霉病和曲霉球等4型[1]。肺曲霉球是寄生型的肺曲霉感染,大多寄生在肺结核、支气管扩张、肺囊肿、慢性肺脓肿、肺癌等的空洞或空腔内。1资料与方法1.1临床资料患者,女,53岁。患者20余年前因全身关节疼痛就诊,外院诊断为“系统性红斑狼疮”,长期服用激素治疗,最多时服用泼尼松40mg。此后患者逐渐出现双手手指、左肘关节、双膝关节肿胀畸形,又诊断为“系统性红斑狼疮合并类风湿关节炎”,予泼尼松 硫唑嘌呤 氯喹治疗。本次又因“双手关节疼痛伴恶心…     

在加拿大开始销售畸形性关节炎治疗药

美国 Biomatrix 公司(新泽西州 Ridgefield)在加拿大开始销售畸形性关节炎治疗药透明质酸钠衍生物。相同关节疾病有2种,一种是,慢性关节炎,另一种是畸形性关节炎。慢性关节炎是自身免疫疾病,但是畸形性关节炎是由于老化和外伤或关节的驱使使关节的骨骼变形的病。因老化等在关节软骨处发生退化变形,由于关节液的粘性下降而发生。透明质酸钠是这种关节液的主要成分。含于活体内几乎所有结合组织中。关节液防止关节磨损,即起到润滑油的作用。Biomatrix 公司在加拿大及欧洲以重度膝关节变形患者为对象实施临床试验。使用透明质酸钠的小组确认对膝关节的疼痛及可动性有显著效果。据说这种效     

伊曲康唑注射剂治疗伴有肺结核史的侵袭性真菌感染2例

目的报道2例伴有肺结核史的侵袭性真菌感染经伊曲康唑注射剂治疗经过,探讨伴有肺结核史患者的抗真菌治疗经验。方法例1为49岁＂支气管肺囊肿合并感染,陈旧性肺结核＂男性患者,诊断为侵袭性肺曲霉感染确诊病例。例2为51岁＂右侧自发性气胸,慢性阻塞性肺病,陈旧性肺结核＂男性患者,诊断为侵袭性肺念珠菌感染拟诊病例。均予伊曲康唑注射剂治疗2周结合抗细菌治疗,并作临床和真菌学疗效监测。结果治疗两周后两患者临床症状和体征均得到明显改善,标本真菌镜检转阴,培养仍为阳性。结论在有肺结核病史存在的侵袭性真菌感染抗真菌治疗时间可能需要延长。合理应用抗生素、激素,严格掌握用药指针、时机、剂量与疗程是控制真菌感染的重要因素。     

12例中国胸膜肺母细胞瘤患儿的DICER1基因突变

本研究旨在探索中国胸膜肺母细胞瘤(PPB)患者的DICER1基因突变携带率和家族史.连续纳入12例PPB患者(病理分型, 6例为Ⅱ型, 6例Ⅲ型),采集患者及其一级亲属的血液样本以及患者肿瘤组织样本;患者的家族史由专人收集.对血液样本进行DICER1基因突变检测;对12例病例中的1个双胞胎家系的血液样本和患者肿瘤组织样本进行全基因组测序.血液样本的DICER1基因突变检测结果显示, 12例患者中, 7例患者携带致病性DICER1突变,其中6例患者携带的突变为导致蛋白截短的移码突变或无义突变;另一个患者携带影响剪接位点的DICER1突变.双生子家系的全基因组测序结果显示,该患者的肿瘤组织携带TDG基因的无义突变和DICER1基因RNaseⅢ结构域内的错义突变. 12例患者中2例突变阳性病例在PPB确诊前曾被诊断患有肺囊肿.此外, 1例患者具有甲状腺疾病家族史.结果提示,我国PPB患者的种系DICER1基因突变携带率与其他已有报道的国家(美国、日本和英国)所报道的突变携带率相似.因此,建议对PPB患者进行DICER1基因突变的检测,并询问其家族史.通过患者的遗传学特征为患者及其亲属提供相应的遗传咨询,且患者的家族史与突变状态也能帮助临床医生鉴别PPBⅠ型与肺囊肿.     

中性粒细胞胞外诱捕网在矽肺中的作用研究

目的:通过构建二氧化硅诱导动物矽肺模型,探讨中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil nxtracellular traps,NETs)在矽肺中可能的作用。方法:将C57BL/6J雄性小鼠完全随机分为磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)组、脱氧核糖核酸酶Ⅰ(deoxyribonuclease Ⅰ, DNase Ⅰ)组、二氧化硅+PBS组、二氧化硅+DNase Ⅰ组。通过气管内滴注二氧化硅(0.2 g/kg)混悬液构建小鼠矽肺模型,PBS组与DNase Ⅰ组注入等体积的PBS。在二氧化硅(silicon dioxide,SiO_2)混悬液注入后的第0小时、10小时小鼠气管内注入DNase Ⅰ(5 mg/kg),以后DNase Ⅰ持续给药:5 mg/kg/day,直到SiO_2混悬液注入后的28天。二氧化硅(SiO_2)干预28天后,取各组小鼠肺组织与肺泡灌洗液,通过PicoGreen荧光染料检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中NETs水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测BALF中转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)与炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,HE染色和Masson染色观察肺组织的病理学变化,Western Blot检测肺组织中NETs特异性组分瓜氨酸化组蛋白3(citrullinated-histone3,Cit-H3)表达。结果:SiO_2干预28天后,与PBS组相比,二氧化硅+PBS组小鼠肺组织炎症损伤加重,BALF中促炎介质IL-1β、IL-6、TNF-α水平上升;肺组织发生纤维化,大量硅结节形成;肺组织中Cit-H3蛋白表达量增加,BALF中NETs水平显著升高。予以NETs抑制剂DNase Ⅰ进行干预后,肺组织NETs水平显著下降,二氧化硅诱导的肺部炎症损伤、纤维化显著减轻。结论:NETs水平升高可能介导了二氧化硅诱导的小鼠矽肺模型肺部炎症损伤与纤维化。     

纵隔胸腺囊肿的诊断及外科治疗

目的:总结纵隔胸腺囊肿的诊断和外科治疗.方法:对我院纵隔胸腺囊肿患者的临床资料进行回顾性分析.结果:全组共25例患者,其中男性11例,女性14例,平均46.1岁.全组患者术前均行胸部正侧位片检查,其中20例患者行胸部CT检查,6例行MRI检查.所有患者均接受手术治疗,并均获得完整切除.其中常规手术17例,微创手术8例,微创手术患者较常规手术患者术后住院时间短.所有手术标本均经病理证实为胸腺囊肿.共发生手术相关并发症2例,随访2个月至7年,均朱见复发.结论:胸腺囊肿的临床诊断主要依据影像学检查,CT和MRI能明确肿块的囊性特征,大多数胸腺囊肿根据其囊性特征,术前即可作出正确诊断.纵隔胸腺囊肿一经诊断应该首选手术治疗,手术应根据肿物特点选择合理的手术方式,胸腔镜等微创技术适合于纵隔胸腺囊肿的治疗.     

蛋白酶3及其与疾病的关系研究进展

蛋白酶3(proteinase 3,PR3)是中性粒细胞分泌的主要丝氨酸蛋白酶之一,其生物学功能广泛,不仅能降解多种组织蛋白,还可通过加工细胞因子、受体等调控炎症反应,与慢性炎症性疾病如血管炎性肉芽肿病、慢性阻塞性肺疾病、肺囊肿性纤维症的发生发展密切相关,可能作为疾病防治靶点.本文主要综述了PR3的生物学功能及其在疾病中的可能作用机制,期望为相关疾病的防治提供新的思路.     

抗真菌病重组植物获得美国专利

美国DNA Plant Technology公司1990年7月就抗真菌病重组植物获得美国专利,专利号为US4751081.这项专利的内容是壳质酶,它能分解真菌的细胞壁,从而摧毁真菌.这种酶的基因是经基因操作整合入植物基因组中.从而提高重组植物的抗病力.用壳质酶切断的壳质分解产物是引发物质,刺激植物的免疫体系,增加对真菌病的抵抗力.因此该公司期望除在栽培期间显示耐病性外,还能防止在收获后保存时引起的真菌污染.现     

NDPK-A C4/109/145 S突变体降低磷酸转移酶活性但增加DNase活性

核苷二磷酸激酶A( nucleoside diphosphate kinase A, NDPK-A）有广泛的生物学活性,在肿瘤转移和调控中起重要作用.单独抑制NDPK-A中任何1个Cys所形成的二硫键,不会降低NDPK-A的磷酸转移酶活性和DNase活性.本实验通过构建C4/109/145S突变体并研究其生物学效应,为NDPK A结构与功能的研究提供参考.用定点突变法将NDPK-A 的4位、109位和145位Cys突变为Ser,构建pBV220-NDPK-A C4/109/145S和pEGFP-NDPK-A C4/109/145S两种重组质粒.在大肠杆菌中高效表达NDPK-A C4/109/145S突变体,纯化后可获得均一的重组NDPK-A C4/109/145S突变体蛋白.HPLC法和DNA消化法测定发现,C4/109/145S突变体磷酸转移酶活性低于野生型NDPK-A,而DNase活性高于野生型NDPK-A.以A549细胞作为模式细胞的流式细胞仪周期检测表明,C4/109/145S突变体与野生型NDPK-A一致,均可将细胞周期延滞在S期和G2/M期.这些结果证实,NDPK A结构异构与其磷酸转移酶活性密切相关,其酶活性至少需要1个Cys残基存在,NDPK-A结构中的二硫键也可能是其DNase活性的负调控机制之一,胞内NDPK-A的氧化还原异构可能对细胞周期无显著影响.     

毛竹笋体生长过程中脱氧核糖核酸酶活性的变化

细胞生长与代谢状况的变化密切有关,在细胞从分生期到成熟期的转变过程中,酶活性首先有很大的变化(Robison等1959)。DNase是参与核酸代谢的重要酶类之一,它在体内能降解DNA,但是它也可以参加 DNA的合成(Lehman 1967)。虽然在微生物和动物组织中已经证明 DNase的活性水平与DNA合成和生长速度之间具有正相关(Eley等1966,Shortman等1964),但是在高等植物中这方面的研究很少。竹笋生长极为迅速,而且在笋体生长过程中还会出现退败现象。关于竹笋生长和退败过程中DNase活性的变化尚无报道。为此,我们对竹笋DNase的活性与生长的关系进行了探讨,为阐明竹笋退败的生理原因和拟定防止措施提供参考。     

DNA酶缓解CF患者的呼吸困难

在治疗囊性纤维变性(CF)的Ⅰ期临床试验中,重组DNA酶能使肺功能提高10～20％,并显著改善16位受试患者中11位的呼吸状况。试验由国立心脏、肺和血液研究所(Belhesda,MD)的Ronald Crystal主持,将天然DNA剪切酶的Genentech Incis(S.San Francisco,CA)rDNA离体喷雾施于患者。 CF患者的肺易于感染,因为其中累积了厚厚的粘液。为抗感染,白细胞集结于肺部,其裂解后产生