| NDPK-A C4/109/145 S突变体降低磷酸转移酶活性但增加DNase活性 |
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| 引用本文： | 高雪,张志红,吕芬,钱垂文,王一飞,熊盛.NDPK-A C4/109/145 S突变体降低磷酸转移酶活性但增加DNase活性[J].中国生物化学与分子生物学报,2011,27(3):260-265. |
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| 作者姓名： | 高雪 张志红 吕芬 钱垂文 王一飞 熊盛 |
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| 作者单位： | 暨南大学生命科学技术学院生物医药研究开发基地; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(No.30873082); 暨南大学科研教育与创新基金(No.21610709,No.21610506)资助~~ |
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| 摘 要： | 核苷二磷酸激酶A( nucleoside diphosphate kinase A, NDPK-A）有广泛的生物学活性,在肿瘤转移和调控中起重要作用.单独抑制NDPK-A中任何1个Cys所形成的二硫键,不会降低NDPK-A的磷酸转移酶活性和DNase活性.本实验通过构建C4/109/145S突变体并研究其生物学效应,为NDPK A结构与功能的研究提供参考.用定点突变法将NDPK-A 的4位、109位和145位Cys突变为Ser,构建pBV220-NDPK-A C4/109/145S和pEGFP-NDPK-A C4/109/145S两种重组质粒.在大肠杆菌中高效表达NDPK-A C4/109/145S突变体,纯化后可获得均一的重组NDPK-A C4/109/145S突变体蛋白.HPLC法和DNA消化法测定发现,C4/109/145S突变体磷酸转移酶活性低于野生型NDPK-A,而DNase活性高于野生型NDPK-A.以A549细胞作为模式细胞的流式细胞仪周期检测表明,C4/109/145S突变体与野生型NDPK-A一致,均可将细胞周期延滞在S期和G2/M期.这些结果证实,NDPK A结构异构与其磷酸转移酶活性密切相关,其酶活性至少需要1个Cys残基存在,NDPK-A结构中的二硫键也可能是其DNase活性的负调控机制之一,胞内NDPK-A的氧化还原异构可能对细胞周期无显著影响.
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| 关 键 词： | 核苷二磷酸激酶A 定点突变 磷酸转移酶活性 DNA酶活性 细胞周期 |
| 收稿时间： | 2010-11-08 |
NDPK-A C4/109/145S Mutant Shows Lower Phosphotransferase Activity but Higher DNase Activity |
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| GAO Xue,ZHANG Zhi-Hong,LV Fen,QIAN Chui-Wen,WANG Yi-Fei,XIONG Sheng.NDPK-A C4/109/145S Mutant Shows Lower Phosphotransferase Activity but Higher DNase Activity[J].Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology,2011,27(3):260-265. |
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| Authors: | GAO Xue ZHANG Zhi-Hong LV Fen QIAN Chui-Wen WANG Yi-Fei XIONG Sheng |
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| Institution: | GAO Xue,ZHANG Zhi-Hong,LV Fen,QIAN Chui-Wen,WANG Yi-Fei,XIONG Sheng(Biomedical Research and Development Center,College of Life Science and Technology,Jinan University,Guangzhou 510632,China) |
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| Abstract: | Nucleoside diphosphate kinase A(NDPK-A) is bi-functional with both phosphotransferase activity and DNase activity and plays an important role in tumor migration and regulation.The breakage of any single disulfide bond of NDPK-A will not change its phosphotransferase or DNase activities.We created a NDPK-A C4/109/145S mutant by site-directed mutagenesis,sequencing confirmed,and |
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| Keywords: | nucleoside diphosphate kinase A site-directed mutagenesis phosphotransferase activity DNase activity cell cycle |
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