保存方法和保存时间对竹子核DNA含量 （2C-值） 检测的影响

竹子核DNA含量（2C 值）的检测对竹资源的科学研究具有重要意义,而大部分野外采集的样本,通过不同方法保存后,均使用流式细胞仪技术进行核DNA含量检测。本文选取麻竹（Dendrocalamus latiflorus）、筇竹（Chimonobambusa tumidissinoda）和毛花酸竹（Acidosasa purpurea）三种竹子样本,使用硅胶保存法和Sample protector试剂保存法分别保存4d、8d、12d、16d后,采用流式细胞术检测样品2C 值。CV值可以用来反映数据检测结果质量,是对检测结果准确性以及精确性的评价标准,我们通过样品CV值的大小和2C 值的变异率来评价保存方法和保存时间对竹子2C 值检测的影响。方差分析显示,保存时间对CV值具有显著性影响（P < 0001）,随着保存时间增大,CV值增大;保存方法对2C 值变异率有显著性影响(P < 0001)。硅胶保存法保存后的样品,测量值比新鲜材料大;Sample protector试剂保存法保存后,测量值比新鲜材料小。因此,随着保存时间的增加,样品CV值增大,引起检测结果质量降低。研究发现,硅胶保存法和Sample protector试剂保存法会影响竹子样本2C 值大小,但2C 值大小的变化小于10%。     

两种粪便保存方法对肠道菌群结构研究的影响

目的比较2种粪便保存方法（室温法和Invitek公司的粪便稳定剂保存法）对菌群结构研究的影响。方法应用PCR-变性梯度凝胶电泳技术（PCR-DGGE）方法,对用2种方法保存的3位志愿者粪便样品进行菌群结构的分析。结果室温法保存粪便样品24h后,S1个体菌群结构与原始样品的菌群结构相似度为83％,S2和S3的菌群结构与其原始样品的相似度仅为77％。而使用粪便稳定剂保存1d,期间各时间点样品菌群结构与原始样品相比变化较小,相似度在80％-90％。结论粪便稳定剂具有一定的稳定样品菌群结构的作用,在新鲜粪佰样品不能寺刻讲行深冻的情况下,使用粪便稳定剂是一种较好的样品保存方法。     

鲜叶保存方法对茶树基因组DNA提取效果的影响

探讨一种简便有效的鲜叶保存方法,对克服茶树DNA研究中远距离采样的困难具有重要意义．为此,以槠叶齐品种的鲜梢为材料,分别采用-20℃、-70℃、硅胶脱水干燥3种方法保存样品,采用改进的CTAB法与SDS法分别对3种方法保存的样品及对照样(鲜叶)进行基因组DNA的提取与纯化,对所得DNA的质量进行多重检测的结果表明,硅胶脱水干燥法保存的样品与其他几种方法保存的样品一样,都提取获得了高质量的DNA,因此,硅胶脱水干燥法可作为远距离采样制备茶树DNA的一种较好的鲜叶保存方法,具有操作简单、经济实用、不受时空等条件限制的特点,该方法同样适用于其他植物．     

尿样在SELDI技术中的优化研究

目的：建立表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI．TOF／MS）技术检测尿液样本的方法。方法：采用SELDI技术及弱阳离子交换表面蛋白芯片（CM10）对糖尿病病例组和正常对照组的尿液样本进行分析,从尿液标本的采集、样品保存、上样浓度的控制、实验仪器的内外校准、实验结果重复性验证与分析等方面进行实验条件的优化。结果：反复冻融3次以上的样品经SELDI检测的出峰数量和峰强度情况较差;以1：1或1：2的浓度作倍比稀释后的样本经芯片检测得到的蛋白峰强度和蛋白数量最优;对两组样本重复检测3次,蛋白丰度的平均变异系数（CV值）分别为0．121和0．095;两组样本共检测到202个蛋白峰,其中差异表达蛋白29个,在肝纤维化组中表达上调13个,表达下调16个。结论：初步建立了SELDI技术检测尿液样本的方法,提高了SELDI技术检测尿液样本的质量。     

毛竹基因组大小测定

毛竹（Phyllostachys edulis）属禾本科（Poaceae）竹亚科（Bambusoideae）刚竹属（Phyllostachys）,是我国分布和栽培面积最大的经济竹种,有着广泛的开发前景。本实验以水稻（Oryza sativa）为内标,用流式细胞仪对水稻和竹子样品的PI发射荧光强度进行测定,通过比较水稻与毛竹样品峰值的倍数关系,计算出毛竹的基因组大小。对24组样品进行重复测试,测得毛竹基因组大小为2075.025±13.08Mb,即2C DNA含量为4.24pg（以1pg DNA=0.978×10^9bp计算）。毛竹基因组大小测定为毛竹基因组文库的建立及其基因组学研究奠定了重要基础。     

江西铅山红芽芋胚性愈伤组织的包埋干燥法超低温保存

对江西铅山红芽芋（Colocasia esculenta var．cormosus cv．Hongyayu）胚性愈伤组织包埋干燥法超低温保存进行了初步的研究。结果表明：江西铅山红芽芋胚性愈伤组织包埋干燥法超低温保存较佳的条件为：0．75mol·L-1蔗糖预培养3d;脱水方式为空气干燥7h或硅胶干燥11h;化冻温度为37℃（2min）;冻后培养条件为暗培养7d再转到光周期中培养。此方法超低温保存后的平均成活率约为45％。超低温保存时间以及是否去除包裹的褐藻酸钙对其成活率无显著性影响。形态学和细胞学检测表明红芽芋胚性愈伤组织冻后再生苗与母本材料相比没有发生变异。     

组织保护剂对病毒核酸与豚鼠皮肤组织样本RNA的保存效果探究

病毒核酸和生物组织样本RNA容易受到外部环境的影响,极易发生降解,造成实验结果产生严重偏差。以病毒核酸与豚鼠皮肤组织样本RNA为研究对象,探究组织保护剂保存它们在不同温度放置不同时间后,对病毒载量以及豚鼠皮肤组织样本中RNA的保护效果。结果发现,在4℃保存30 d,25℃保存7 d或37℃保存24 h后,与初始病毒核酸量相比较,组织保护剂中保存的病毒载量未发生明显变化（P>0.05）。在4℃保存30 d,25℃保存7 d或37℃保存24 h后,与液氮储存组相比较,组织保护剂组与市售RNA later组均可以保持豚鼠皮肤组织中样本RNA的提取量和纯度,差异无统计学意义（P>0.05）。结果表明,组织保护剂可作为科研或临床组织样本的储存保存液,在4℃、25℃以及37℃条件下放置一定时间,不影响病毒核酸的病毒载量以及豚鼠皮肤组织样本RNA的提取量和纯度,使样本保存更简便高效。     

川金丝猴尿液类固醇激素的保存时效性

尿液类固醇激素检测已经广泛运用于野生动物的生理机能、健康状况和繁殖状态的研究,由于分析条件以及样品采集时间限制,一般尿液样品需保存一段时间后才能在实验室分析,不同物种尿液类固醇在不同保存条件的保存时效有差异。本研究利用2只成年雄性和4只成年雌性的尿液样品共21份,确定川金丝猴尿液类固醇的保存时效和保存方法。结果表明:4℃时,雄性川金丝猴尿液睾酮、雌性尿液睾酮、孕酮的保存时效为7 d左右;雌性尿液雌二醇的保存时效在3 d以内。-20℃时,雄性川金丝猴尿液中睾酮的含量在60 d内保持稳定;雌性尿液中睾酮、孕酮和雌二醇的含量在60 d、45 d、60 d内保持稳定。-20℃保存川金丝猴尿液样品是一种有效、可靠的方法。     

11种灭活型样本保存液对病毒核酸保护效果的比较

收集11种不同厂家的灭活型样本保存液,将甲型流感病毒加入保存液和生理盐水中,在4℃、25℃和37℃条件下保存0 h、2 h、4 h、6 h和24 h后,分别提取各组的病毒核酸,并通过逆转录实时荧光PCR检测病毒载量变化,以探究不同样本保存液对病毒核酸保护效果是否存在差异。结果发现不同样本保存液中的病毒载量随保存时间和温度变化存在显著差异。据此可将11种灭活型样本保存液的保存效果分为四类：(1)优秀产品：在任一温度（4℃、25℃、37℃）条件下,即使保存24h时病毒核酸都未发生明显降解,占比27.2%(3/11);(2)良好产品：低温（4℃）和室温（25℃）情况下核酸未出现降解,但在高温（37℃）条件下6 h后保存效果明显下降,占比27.2%(3/11);(3)合格产品：低温（4℃）条件下对病毒核酸具有较好的保护效果,但在室温（25℃）和高温（37℃）情况下随保存时间延长其保护效果显著下降,占比18.1%(2/11);(4)不合格产品：任一保存条件下对病毒核酸的保护效果都较差,甚至加入病毒后立即导致病毒核酸发生快速降解,占比27.2%(3/11)。以上结果说明不同厂家样本保存液对病毒核酸...     

一种适用于植物居群遗传分析的组织干燥与保存方法

DNA的有效提取是分子生物研究工作的前提,野外采集时大多采用将新鲜叶片用变色硅胶快速干燥,防止细胞死亡过程中次生物质释放和DNA降解.我们在野外采样时,将新鲜材料压制成干标本,成功地应用于芨芨草居群的RAPD分析.这种植物组织干燥与保存的方法比硅胶快速干燥法更简单、方便,非常适用于采集地点多,相距远,野外采集时间长,所采样品的种类和数目又多的遗传多样性研究.     

不同温度及时间对保存血液有效期和质量的影响

目的 :研究不同温度对血液液状保存时保存损伤机制的影响 ,并探讨相应的防范措施。方法 :取 10名健康献血员静脉血 ,混合于CP2D A保存液中 ,均分为 2组 ,分别保存于 0℃和 4℃环境条件下 ,分别于设定的时间 (第2 1d和第 4 2d)以shafiq UR rehman法检测膜磷脂 ,同步法检测Na K ATP酶、纯化PDE法检测CaM、分光光度法检测LPO等指标。结果 :固定温度条件下随时间的延长血液过氧化反应增强 ,保存损伤作用增加 ;同一时期内保存损伤作用随温度的降低而减轻 ,以 4℃组血液老化明显。结论 :血液保存损伤作用随保存期的延长而增强 ,随保存温度的降低而改善 ,并指出血液液状保存所存在的问题与展望。     

两种不同方法对阴道感染的评价

目的探讨需氧菌阴道炎／细菌性阴道病五项联合测定试剂对阴道感染的临床应用价值。方法将380例就诊女性采用需氧菌阴道炎／细菌性阴道病五项联合测定试剂方法,同时采刖自带常规镜检＋PH值方法进行检测。结果380例阴道分泌物标本经五项联合测定试剂方法检出阴道微生态失衡345例（其中包括AV、BV、CV、VVT等感染）,阳性率为90．79％;采用白带常规镜检＋pH值方法检出阴道微生态失衡328例（其中包括AV、BV、CV、VVT等感染）,阳性率为86．32％,两种检查方法结果差异明显。结论需氧菌阴道炎／细菌性阴道病五项联合测定试剂法准确,快速,高效,能及时评价阴道微生态状况,提高临床合理用药程度,值得临床推广应用。     

五月季竹开花及复壮过程中DNA甲基化的MSAP分析

以五月季竹为材料,采用MSAP技术对其开花及花后无性复壮过程中的DNA甲基化状况进行检测,分析其开花前后的甲基化动态,以揭示竹子开花及复壮过程中的表观遗传变化规律。结果显示:（1）五月季竹开花时其叶片甲基化水平降低,而在无性复壮产生不再开花新竹的过程中其叶片甲基化水平又逐渐回升;（2）与未开花竹株相比,五月季竹开花时有29.09%的甲基化位点发生了变异,其中有17.88%的位点在开花植株中发生了完全的去甲基化,远高于发生甲基化位点的比率;（3）复壮竹株与未开花竹株之间发生变异的位点数和所占比率,尤其是发生去甲基化的位点数和比率,低于开花竹株;（4）开花五月季竹花器官的甲基化水平低于叶片,同时有28.58%的位点发生了甲基化状态的改变,且同样以去甲基化为主。     

中段尿在常温下保存时间对培养结果的影响研究

目的 探讨临床尿液标本不同放置时间对细菌培养结果的影响,明确尿液标本合理保存时间,加强对标本细菌培养前的保存时间控制.方法 随机选取114份患者尿液标本,比较其在新鲜尿液即刻培养结果和室温(22 ～25℃)的环境中各放置0.5、1、2、3、4和5h等不同时间点细菌培养结果的分离率差异,采用样本率与总体率(新鲜尿液培养的分离率)的差别检验(|u|和P)分析其是否具有统计学意义.结果 新鲜尿液即刻培养与放置0.5h培养结果分离率差异无统计学意义(38.6％);之后随放置时间延长分离率逐渐升高,2h接种标本分离率为43％,差异无统计意义(|u| =0.9489,P ＞0.05);放置3、4和5h后接种标本分离率分别为50.9％、55.3％和63.2％,呈显著增高(|u|值分别为2.627、3.586和5.446,P值均小于0.01).结论 在常温下不同的保存时间对培养结果有着重要影响,尤其在2h后影响更为显著.准确有价值的培养结果,与标本合理的存放时间有极大的关系,加强尿液培养前阶段的保存时间控制非常重要.     

菊花茎尖的玻璃化超低温保存研究

本文建立了适合中国菊花种质资源长期保存的玻璃化超低温保存技术体系.在4℃下,把1～2mm的菊花茎尖放在含0.4mol/L蔗糖的MS培养基上暗培养2～3d,用预处理液在25℃下处理30min,再用玻璃化试剂PVS2在冰浴条件下处理15min,换新鲜的PVS2试剂并迅速投入液氮.液氮保存24h后,40℃水浴解冻2min,用含蔗糖1.2mol/L的MS液体培养基洗涤20min,滤纸吸干后接种到恢复培养基中,在25℃条件下弱光培养1～3d转入正常光照培养条件下培养,2周后成活率可达86%以上,成活的茎尖均可再生.     

不同保存液和保存期限下肠道微生物组的变化

肠道菌群与人体健康的关系密切,通过检测肠道菌群可以获得有关健康的信息。新鲜粪便不易获得,很难做到快速低温冷冻,在进行标准化和大规模人群采样时,可用于常温条件下采集和保存样本的保存液可以弥补采集样本数量多、地域分布广、现场采样条件多样、工作量大、运输条件差等条件不足。本研究招募了5名健康志愿者,采集他们的粪便样本后,通过对比不同市售微生物样本采集常温保存液对新鲜粪便样本的影响,评估了各类保存液的保存效果。在室温下把粪便放置于5种保存液,在第0、1、3、7、15、30天提取元基因组DNA,进行16S rRNA V3–V4区高通量测序,来分析不同保存液,在不同时间段对肠道菌群组成的影响。结果显示,不同保存液对肠道菌群的影响存在差异,与对照组相比,不同保存液对样本中的OUT数量影响不大;保存液A、B和C在菌群构成上更接近对照组,保存液D会明显改变肠道菌群组成,使放线菌门 (Actinobacteria) 和厚壁菌门 (Firmicutes) 增加;随着时间延长,各类保存液都有降低菌群多样性趋势,保存液E降低菌群多样性更明显;第30天时,5种保存液都会改变肠道菌群构成;肠道菌群组成存在个体差异,是影响各样本相似性的主要因素,来自不同志愿者的粪便样本,无论何种保存液和保存时间,彼此之间更接近。不同保存液对革兰氏阳性杆菌、革兰氏阳性球菌和革兰氏阴性菌的含量存在不同影响,保存液C、E会降低双歧杆菌 (Bifidobacterium) 丰度,而保存液D则相对升高;除保存液E相对降低乳酸杆菌 (Lactobacillus) 丰度之外,保存液A、B、C、D与对照都相当。各类保存液对链球菌 (Streptococcus) 的影响,除保存液D差异较大之外,保存液C与对照组最接近;保存液D比对照组降低瘤胃球菌科UCG 003 (Ruminococcaceae UCG 003),其他各类保存液与对照组差异不大;不同保存液都比对照组增加大肠-志贺氏杆菌 (Escherichia-Shigella) 丰度,保存液A、B会增加克雷伯氏菌 (Klebsiella) 丰度,而保存液C、D和E与对照组相当。整体来看,保存液C在稳定肠道菌群的组成上表现较好。文中通过对比国内外常用保存液在不同时间点对肠道菌群的影响,为进行大规模微生物样本采集、保存提供了参考,也为标准化的微生物组项目提供了可参考的数据。后续的研究可在此基础上选择针对性的保存液和保存时间。     

毛竹基因组大小测定

毛竹(Phyllostachys edulis)属禾本科(Poaceae)竹亚科(Bambusoideae)刚竹属(Phyllostachys), 是我国分布和栽培面积最大的经济竹种, 有着广泛的开发前景。本实验以水稻(Oryza sativa)为内标, 用流式细胞仪对水稻和竹子样品的PI发射荧光强度进行测定, 通过比较水稻与毛竹样品峰值的倍数关系, 计算出毛竹的基因组大小。对24组样品进行重复测试, 测得毛竹基因组大小为 2 075.025±13.08 Mb, 即2 C DNA含量为4.24 pg(以1 pg DNA = 0.978×109 bp计算)。毛竹基因组大小测定为毛竹基因组文库的建立及其基因组学研究奠定了重要基础。     

半夏缓慢生长法保存及体细胞变异的ISSR检测

以添加了不同浓度的甘露醇、PP333和ABA的培养基对半夏试管苗进行缓慢生长法保存,并对保存材料再生后代的体细胞变异进行检测。结果显示,甘露醇、PP333和ABA均能有效抑制试管苗生长,且存活率高;最佳浓度分别为甘露醇2%～4%,PP3332.0mg·L-1,ABA 2.0～4.0mg·L-1。保存在添加了2%～4%甘露醇或2.0mg·L-1 PP333培养基上的植株未检测到变异,而保存在添加了2.0～4.0mg·L-1 ABA培养基上的植株检测到1条新增标记和1条缺失标记,位点变异率为1.7%,个体变异率为30%。研究表明,ABA不宜用于半夏试管苗的缓慢生长法保存,但有助于新突变体的产生,在种质创新上具有特殊意义。     

阿霉素对心肌肌醇依赖酶I-JNK通路的影响

目的探讨肌醇依赖酶1（IRE1）-JNK通路是否参与阿霉素致心力衰竭（HF）效应的作用。方法阿霉素（adriamycin,Adr）致HF大鼠作为Adr组（n=15）,同龄健康大鼠作为对照组（n=10）;将乳鼠心肌细胞随机分为对照组和Adr组（1umol／L）。心脏超声后,流式细胞仪和蛋白印迹等分别检测细胞凋亡率（AR）、IRE1、X盒结合蛋白1（XBP1）、TNF受体相关因子2（TRAF2）、c—Jun凋亡信号调节激酶（ASKl）和JNK等的表达。结果1．Adr在体成功构建HF模型,而体外干预显著增加心肌细胞AR（P％0．001）;2．不管在体内抑或在体外,Adr组IRE1α和pIRE1α水平均显著高于相应对照组（P〈0．001）;3．与相应对照组相比,Adr组XBP1蛋白均显著上调（P〈0．001）;4．体内和体外Adr组TRAF2蛋白的表达显著高于相应对照组（P〈0．001）;5．Adr组ASK1、p-ASK1和磷酸化水平（即p-ASK1与总ASK1比值）显著高于相应对照组（P〈0．001）;6．不管在体内抑或在体外,Adr组JNK1／2、p-JNKl／2蛋白和其磷酸化水平（p-JNK1／2与总JNK1／2比值）均显著高于相应对照组（P〈0．001）。结论Adr通过肌醇依赖酶1（IRE1）-ASK—JNK内质网通路介导其致心肌毒性并进而促发HF。     

普氏原羚粪便样品中皮质醇激素保存时效研究

由于采集粪便样品无需对目标动物进行捕捉、限制或影响其行为,检测粪便样品中类固醇激素的方法近几十年来在野生动物保护、行为生态学、生理生态学等诸多领域得到广泛应用。普氏原羚(Procapra przewalskii)由于其种群和行为等方面的特殊性,较难进行直接的生理监测,因此采用间接手段监测其粪便类固醇激素就显得很有必要。为探讨不同保存方法对普氏原羚粪便中皮质醇的影响,我们将采集到的新鲜粪便样品充分混合后分为30份,各取10份分别保存于﹣20℃、4℃和20℃,在保存2、5、7、10、15、20、25、30 d和50 d时,使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测样品中的皮质醇含量。单因素方差分析(One-way ANOVA)结果显示,保存于﹣20℃的粪便样品中皮质醇含量在保存50 d内没有显著变化,含量为(11.747±2.951)ng/g(平均值±标准差),(F=1.966,n=81,P0.05),而保存于4℃和20℃的样品则出现明显波动(4℃:F=23.643,P0.05;20℃:F=35.126,P0.05),含量分别为(15.951±6.766)ng/g和(11.042±6.094)ng/g。保存于4℃和20℃的样品中皮质醇含量在24 h内均有上升,在随后的几天逐渐下降。结果表明,﹣20℃冷冻可以简便有效地保存普氏原羚粪便样品中的皮质醇激素。同时,在野外暴露超过24 h的粪便样品会造成测定结果产生误差,在采集样品时要考虑到潜在的影响。