水杨酸对干旱胁迫下西洋参不定根生化指标及药用成分含量的影响

为探讨西洋参不定根对干旱胁迫的应答机制及外源水杨酸(SA)对西洋参不定根抗旱性的影响，本研究使用质量分数为10%的PEG-6000模拟干旱胁迫预处理，然后添加不同浓度(0,10,40,80μmol/L)的外源SA,分别在处理2、4、6、8 d时检测西洋参不定根中抗氧化酶活性、渗透调节物质含量以及药用成分总黄酮、总皂苷、单体皂苷Rb1和Re的积累量，并检测人参皂苷生物合成途径中相关合成和调控基因的表达量。结果显示：(1)西洋参不定根中过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性以及游离脯氨酸含量均在80μmol/L SA处理4 d时出现峰值，而丙二醛(MDA)含量在40μmol/L SA处理4 d时达到峰值。(2)西洋参不定根中总黄酮的含量在80μmol/L SA处理6 d时达到最大值，总皂苷和单体皂苷Re含量在40μmol/L SA处理8 d时达到最大值，单体皂苷Rb1含量在40μmol/L的SA处理6 d时达到最大值。(3)Pq-HMGR和Pq-DS基因表达量在40μmol/L SA处理2 d时提高了3倍以上，Pq-CYP6H、Pq-D12H、Pq-3-O-UGT1和Pq-bHLH...     

三七.人参和西洋参细胞悬浮培养的比较研究

用薄层层析对三七、人参和西洋参愈伤组织进行的初步鉴定表明,三种愈伤组织都含有皂甙和主要皂甙成分Rb_1、Rg_1,三七愈伤组织还含有一种抗癌皂甙Rh_1。对愈伤组织的生长,三七低于人参高于西洋参;对愈伤组织中总皂甙含量,三七均高于人参和西洋参。三种植物细胞悬浮培养结果类似于他们的愈伤组织培养,但生长又进一步提高。三七细胞悬浮培养中皂甙产生的时间进程几乎与生长平行,合适的收获期为培养30天。寡糖素不仅增强三七培养细胞的皂甙形成而且促进细胞生长,较合适的浓度为1.25 ppm。通过以上研究,使三七悬浮培养细胞的生长(干重增加178毫克)为最初培养愈伤组织的4倍以上,总皂甙产率高达20.6毫克,为最初培养愈伤组织的8.5倍。     

水杨酸诱导下人参培养物差异表达基因片段的克隆

本研究以人参愈伤悬浮细胞为材料,在其生长的第28天添加1x10-3 mg/L水杨酸,测定水杨酸添加后,过氧化物酶、多酚氧化酶和苯丙氨酸解氨酶等3种酶在72 h内的变化及皂苷含量,结果表明:水杨酸添加后对过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶的活力影响最大,分别在24 h和48 h达到最大峰值,在18 h开始影响多酚氧化酶的活力,培养物生长的第28天添加水杨酸可以明显提高人参愈伤组织中皂苷的合成.确定添加水杨酸后24 h提取总RNA,进行cDNA-RDA分析,筛选差异片段.确定差异基因并在GenBank中注册,注册号为FE900130.为探讨水杨酸作为诱导子对人参次生代谢的影响奠定基础.     

西洋参发根的诱导及不同外源物质对发根生长和皂苷含量的影响

利用发根农杆菌A4菌株在西洋参根外植体上直接诱导产生发根,并分析不同浓度的植物激素6-BA、NAA,前体物醋酸镁(Mg(Ac)2)、L-亮氨酸和诱导子茉莉酸甲酯(MJA)、水杨酸(SA)对西洋参(Panax quinquefolium L.)发根生长和皂苷含量的影响。同时,研究MJA与SA组合作用对皂苷含量的影响。采用高效液相色谱法测定发根中单体皂苷Rb1的含量。结果显示,适宜浓度的外源物质均可促进皂苷含量的增加,MJA尤其明显。     

寡糖素对西洋参和人参愈伤组织培养的影响

红花、人参和黑节草寡糖素(简称CO、GO和DO)分别加入到培养基中,均能影响西洋参和人参愈伤组织生长和皂甙的合成。CO、GO和DO促进西洋参愈伤组织皂甙合成的最适浓度分别为5ppm、15ppm和10ppm,皂甙产率分别为14.89mg/flask、11.24mg/flask和14.53mg/flask,均明显高于对照(8.22mg/flash).CO、GO和DO促进人参愈伤组织皂甙合成的最适浓度分别为5ppm、20ppm和5ppm,皂甙产率分别为11.79mg/flask、11.20mg/flask和10.48mg/flask,均明显高于对照(6.65mg/flask),它们在适度浓度下对人参愈伤组织的生长均有促进作用。     

茉莉酸甲酯与水杨酸对肉苁蓉悬浮细胞中苯乙醇甙合成的影响

向肉苁蓉悬浮细胞培养系中添加茉莉酸甲酯(MJ)和水杨酸(SA) ,分别考察了这两种诱导子的添加浓度及添加时间对肉苁蓉悬浮细胞系中苯乙醇甙含量的影响。研究结果表明:MJ和SA能够促进肉苁蓉悬浮细胞系中苯乙醇甙(PeG)和松果菊甙(Echinacoside)的合成,但两者的适用的浓度范围和最佳添加时间存在差异。与未经诱导子处理的细胞培养结果相比,MJ在对数生长初期(培养14d) ,添加浓度为5 μmol L条件下,可使肉苁蓉悬浮细胞系中PeG含量提高2 5 9倍,Echin含量提高3 82倍;而SA在对数生长后期(培养2 8d) ,添加浓度为5 0 μmol L条件下,可使PeG含量提高2 71倍,Echin含量提高3 16倍。     

不同培养基及其元素组成对西洋参愈伤组织悬浮培养物生长和皂苷含量的影响

对MS、67-V和FOX 3种基本基质对西洋参(Panax quinquefolium Linn.)愈伤组织悬浮培养物生长和皂苷含量的影响进行了比较。在3种基本基质中,培养物的鲜重和干重增加量差异不大,而皂苷含量和产量差异较大,其中MS较高,FOX次之,67-V最低。探讨了MS基质中,KNO3、CaCl2和MgO4对培养物生长和皂苷含量的影响。KNO3浓度在237．5mg/L时有利于培养物生长,而浓度在1900mg/L时有利于皂苷合成;CaO2浓度在55．35mg/L时有利于培养物生长,而浓度在332．1mg/L时有利于皂苷合成;MgSO4浓度为92．50mg/L时培养物生长最好,皂苷产量也最高。     

药用植物人参愈伤组织的诱导培养与悬浮细胞体系建立

人参(Panax ginseng C.A Meyer)是五加科人参属植物,其主要药效活性成分为人参皂苷,具有广泛的药理作用。为建立人参愈伤组织诱导培养体系,以探索实现工程化细胞大规模生产人参皂苷的有效途径。本研究以人参根切片作为外植体,成功诱导出质地松疏、生长迅速、易于分散、启动较早的淡黄色透明状的愈伤组织,建立了适合于长期继代培养的人参细胞系,为深入开展人参干细胞分化及人参皂苷生物合成分子调控研究提供了理想的模型与基础。     

外源MeJA胁迫对盐生杜氏藻生理生化特性的影响

研究外源茉莉酸甲酯(MeJA)对盐生杜氏藻细胞β-胡萝卜素含量、叶绿素含量、过氧化物酶(POD)活性和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。结果表明,当外源MeJA浓度为0～100μmol/L时,随着MeJA浓度的升高,β-胡萝卜素和叶绿素含量呈上升趋势,当MeJA浓度为100μmol/L时,盐生杜氏藻β-胡萝卜素和叶绿素含量最高,当MeJA处理浓度大于100μmol/L时,盐生杜氏藻β-胡萝卜素和叶绿素含量逐渐降低。生理生化结果分析表明,外源MeJA处理可提高盐生杜氏藻POD酶和SOD酶活性,随着MeJA浓度的增加,SOD酶活性呈逐渐上升的趋势,POD酶活性呈先上升后下降的趋势,与β-胡萝卜素含量、叶绿素含量的变化趋势基本一致,说明外源MeJA处理可诱导盐生杜氏藻β-胡萝卜素积累可能与叶绿素含量、过氧化物酶(POD)活性和超氧化物歧化酶(SOD)活性有关。     

三七组织培养的建立

三七的根、块根、根茎、茎、叶柄、叶和花蕾等各部位诱导出愈伤组织。当这些愈伤组织无性系继代培养到第5代后进行了药用成分皂苷薄层层析的初步鉴定。结果表明三七愈伤组织中含有皂苷的主要成分Rg₁ Rb₁和Rh₁。粗总皂昔含量比原植物高,为干重的5．37％(原植物为干重的4．25％),粗皂苷元含量也高于原植物。愈伤组织的生长速率是54．0mg干重／L／day。各部位愈伤组织中以茎愈伤组织较好,无论干重增加、生长速率、粗总皂苷含量和产率、粗皂苷元含量还是皂甙组成上均比其他部位愈伤组织优越。对于茎愈伤组织的生长,基本培养基以Ms培养基较好,最适pH值为5．8,最适温度为26℃。光照对生长稍有促进但不显著。     

模拟微重力环境因子对人参细胞生长和人参皂苷含量的影响

与在正常重力条件培养下的对照相比,经回转器水平回转处理的人参细胞鲜重和干重均增加,人参皂苷含量提高10％左右。在去Ca2 培养基上生长的人参愈伤组织细胞,经回转器水平回转3周后,人参皂苷含量约为正常重力条件下培养细胞的2倍。另外,在试验范围内,如果培养基中起始钙离子浓度越高,则其培养的人参细胞中人参皂苷含量越低。     

诱导子对藏红花悬浮培养细胞生产藏红花色素的影响

考察壳聚糖（chitosan）、壳寡糖（chitosanoligosaccharides,COS）、茉莉酸甲酯（methyljasmonate,MJ）、水杨酸（salicylicacid,SA）和Cu2＋等诱导子对藏红花悬浮培养细胞生长和藏红花色素合成的影响。结果表明：在实验考察浓度范围内,壳寡糖（1～500mg／L）和较低浓度壳聚糖（≤10mrdL）、MJ（≤10μmol／L）、SA（≤10μμmol／L）和Cu2＋（≤1μmoL／L）对细胞生长无显著影响;较高浓度壳聚糖（≥100mg／L）、MJ（≥100μmol／L）、SA（≥100μmoL／L）和cu“（≥10μmoL／L）显著抑制细胞生长。5种诱导子对藏红花色素合成的诱导效果不同,并且与诱导子作用浓度和添加时间有关。MJ诱导效果最好,在细胞培养第0天添加终浓度100仙moL／LMJ,藏红花色素含量（以1克干细胞计）达到28．57mg,比对照提高177．9％。其次是cu“,在细胞培养第4天添加终浓度500μmoL／LCu2＋,色素含量达到19．82mg,比对照提高108．2％。再次是壳聚糖和壳寡糖,在细胞培养第14天分别添加终质量浓度100mg／L壳聚糖和壳寡糖,色素含量分别达到18．33和17．39mg,比对照提高69．1％和69．0％。最后是SA,在细胞培养第14天添加终浓度10μmoL／LSA,色素含量达到14．65mg,比对照提高45．4％。     

发根农杆菌LBA9402 Bin19转化红豆草及再生转基因植株

用含pBin19和pRi1855的发根农杆菌菌株对红豆草下胚轴切段进行遗传转化,种苗年龄和下胚轴切段的预培养时间明显影响转化频率.纸电泳分析表明70%的发状根培养系能够合成农杆碱.发现发状根诱导愈伤组织比发状根具有更强的再生力;发状根切段在含0-9.05μmol/L2,4-D和0-2.22μmol/L6-BA的MS培养基上诱导产生愈伤组织,然后在不含植物激素和卡那霉素的MS培养基上进行再生试验.愈伤组织诱导培养基中的植物激素组成和浓度显著影响愈伤组织后期的再生植株能力.再生频率和每块愈伤组织的芽点发生数随愈伤组织诱导培养基中2,4-D浓度的增加(4.52-9.05μmol/L)而下降,随6-BA浓度增加(0-2.22μmol/L)而上升.在附加4.52μmol/L2,4-D和2.22μmol/L6-BA的MS培养基上,愈伤组织的诱导频率只有14.2%,但愈伤组织在MS0培养基上的再生频率高达58.1%,每块愈伤组织的芽点发生数平均为37.2.对来自8个发状根系的32株再生植株进行Southern分子杂交分析,25株整合有不同拷贝的nptⅡ基因.     

鸡血藤愈伤组织培养过程中内源激素变化研究

旨在建立密花豆组织培养再生体系并测定其再生过程中内源激素的动态变化。利用酶联免疫吸附法(ELISA)对密花豆嫩叶愈伤组织诱导与不定芽分化过程中的4种内源激素:生长素(IAA)、脱落酸(ABA)、玉米素(ZT)和赤霉素(GA_3)的含量进行测定和分析。结果表明,在愈伤组织的诱导过程中,IAA的含量始终处于较高水平,并在愈伤组织生长最旺时达最大,而ABA、ZT和GA_3的含量一直保持在较低水平;IAA/ABA对愈伤组织的诱导与生长有着重要的调节作用。在愈伤组织的分化过程中,IAA的含量呈先降后升,并在分化成芽期达到最高,且高于愈伤组织诱导期,介于1.15-1.87μg/g之间;ZT和ABA的含量均呈先升后降趋势,而GA_3则一直呈上升趋势;IAA/ABA呈先降后升趋势,对芽的分化与生长有着重要的促进作用;GA_3/ABA和ZT/ABA呈先降后升趋势,协同促进鸡血藤愈伤组织成功分化出不定芽。内源激素对愈伤组织的诱导和分化成芽有着重要的影响,合适的浓度和比例能有效的促进外植体的脱分化与再分化,并协同促进细胞的分裂、分化和生长。     

三七叶、人参叶和西洋参叶皂苷类成分的研究(英文)

三七叶、人参叶和西洋参叶其皂苷类成分相近,但专属性成分各异,皂苷类成分的分布比例也各不相同。本文建立了HPLC-UV法测定上述皂苷成分的方法,经过方法学考察,各种皂苷成分精密度好、加样回收率高,方法可靠。11种皂苷成分总含量顺序为:西洋参叶>人参叶>三七叶;二醇组皂苷成分含量:西洋参叶>三七叶>人参叶;三醇组皂苷成分含量:人参叶>西洋参叶>三七叶。西洋参叶中二醇组皂苷和人参叶中三醇组皂苷含量明显高于其他。西洋参叶中人参皂苷Rb3和Rd的含量之和占11种皂苷成分的60%以上。鉴于其中人参皂苷的高含量,三七叶、人参叶和西洋参叶应该作为皂苷来源得到充分利用;不同的皂苷成分有不同的药理活性,应基于它们的皂苷组成和比例选择性进行研究和开发。     

模拟微重力环境因子对人参细胞生长和人参皂苷含量的影响

与在正常重力条件培养下的对照相比,经回转器水平回转处理的人参细胞鲜重和干重均增加,人参皂苷含量提高１０％左右。在去Ｃａ６２＋培养基上生长的人参愈伤组织细胞,经回转器水平回转３周后,人参皂苷含量约为正常重力条件下培养细胞的倍。另外,在试验范围内,如果培养基中直始钙离子浓度越高,则其培养的人参细胞中人参皂苷含量越低。     

AgNO3对网纹甜瓜试管苗再生和玻璃苗产生的影响

以网纹甜瓜品种‘中蜜1号’为试材,在其不同培养阶段添加不同浓度AgNO3,检测不定芽的诱导率和增殖率、玻璃苗发生率和生根情况的结果表明,添加AgNO3后,子叶的愈伤组织诱导率下降,添加70μmol·L^-1AgNO3可促进不定芽的诱导,50～60μmol·L^-1AgNO3明显促进不定芽增殖,并完全抑制玻璃苗的产生,添加50μmol·L^-1AgNO3的生根最好。     

离体条件下外源茉莉酸甲酯对人参锈腐病菌的影响

人参(Panax ginseng)是我国传统的名贵药材,由毁灭柱孢(Cylindrocarpon destructans)引起的人参锈腐病是严重影响人参产量和品质的重要根部病害之一,在人参生产中会造成严重的经济损失.茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)是一类新型的生长调节物质,既可以参与植物对病原菌及其他逆境胁迫做出的应答并进行信号传递,又可用来诱导植物的抗病反应.为了明确MeJA对人参锈腐病菌的影响并解析MeJA与病原菌致病因子之间的相互关系,该文研究了外源MeJA在不同浓度下对C.destructans的直接影响,包括对菌落生长、孢子萌发、菌丝生长量、病菌分泌水解酶的影响.结果表明:MeJA能够强烈抑制病原菌的生长和孢子萌发,而对病原菌致病酶的活性则表现出促进作用;人参锈腐病菌在PDA平板上的菌落直径从(8.23±0.15) cm(对照)减少到(0.71±0.00) cm(800 μg·mL-l MeJA),在MeJA浓度达到最高时,菌落生长几乎完全被抑制;MeJA的浓度大于400 μg·mL-1时,病原菌的生物量减少了65.3％～ 100％,孢子萌发率和芽管长度减少了100％;MeJA在浓度大于200 μg·mL-1时,果胶酶、纤维素酶和淀粉酶活性升高而蛋白酶的活性却没有变化.综上表明,MeJA对病原菌产生抑制作用的临界浓度为200 μg·mL-1.该研究结果为后续使用MeJA处理人参植株进行诱导抗病性的研究奠定了基础,同时也有助于进一步了解人参锈腐病的致病机理,并为病害防控提供了理论参考.     

三七的组织和细胞培养（简报）

在以6,7V为基本培养基,对云南产三七植株各部位进行愈伤组织诱导,其中以6,7V 2,4—D0.8mgL_(-1)为最佳培养基,愈伤组织再行继代培养后,筛出3个较优的无性系,首次获得粗根无性系,这个无性系经继代培养后其愈伤组织的生长速率和皂苷含量都高。     

从西洋参中提取分离纯化人参皂苷R_(b1)和人参皂苷R_e的研究

用大孔吸附树脂从西洋参提取物中富集西洋参总皂苷,再利用丙酮沉淀及重结晶方法获得高纯度的人参皂苷Rb1和Re.可以得到含量大于95%的人参皂苷Rb1(收率2.6%)和92%的人参皂苷Re(收率0.5%),以及纯度为98.5%的人参皂苷Rb1(收率2.0%)和97.8%的人参皂苷Re(收率0.25%).该方法简便、实用,适用于工业大生产,为进一步开发成新药奠定了基础.