钩端螺旋体抗原研究进展

<正> 现已知致病性钩端螺旋体(以下简称钩体)有大约19个血清群共180个血清型。如此众多的血清型很难从形态、生化及培养特性上区分开来,但它们具有不同的抗原性,这对钩体的分类,钩体病的血清学诊断及钩体疫苗的研制均有重要意义(1)。本文仅就近年来国外有关钩体抗原研究的部分文献作一复习。     

钩端螺旋体在复方明胶培养基中长期传代培养的抗原性分析

本文报道了钩端螺旋体(简称钩体)在复方明胶培养基中经过三年的传代培养,用显微镜凝集试验、对流免疫电泳及SDS-聚丙烯酰胺凝肢电泳(PAGE)分析,同Korthof培养基的钩体抗原比较。结果证明:(1)钩体抗原的组成是非常复杂的,SDS-PAGE可显示20多条抗原带;(2)两种培养基所培养的钩体,未发现抗原性变异。说明钩体在复方明肢培养基中长期传代培养过程中,其抗原组成是相对稳定的。这对进一步探讨钩体长期在综合培养基中培养以后的抗原稳定性,具有一定的理论及实际意义。     

间接FLISA法检测钩端螺旋体特异性IgM方法的探讨

为研制钩端螺旋体（钩体）特异性IgM检测试剂,并用于早期诊断钩体病,以钩体外膜蛋白为抗原,探索间接ELISA法检测钩体特异性IgM的各项实验条件,并对钩体病患者血清标本进行检测,结果,１０５份健康人血ＩgM阴性,钩体IgM阳性血清可被特异性阻断,２－巯基乙醇破坏试验阳性,试剂存放４℃和３７℃4天的检测结果基本一致,检测临床钩体病人112份血清,IgM阳性83份,阳性率74．11％,与常规TAT法基本一致,0－7病日的阳性率明显高于MAT法,说明该法检测钩体病IgM具有特异,敏感,快速,稳定,简便等优点,对钩体病早期诊断有一定的价值。     

问号钩端螺旋体属特异性OmpL1s抗原膜定位及其自然抗体应答

为了确定问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性OmpL1s抗原膜定位及其自然抗体应答情况和抗体类型,为OmpL1s用于研制通用性钩体基因工程疫苗及检测试剂盒抗原提供依据。采用显微镜凝集试验(MAT)检测四川地区156份钩体病人血清标本。用PCR和核苷酸序列分析,了解中国流行的钩体主要血清群ompL1基因型。采用常规基因工程技术构建ompL1/1和ompL1/2主要基因型原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组表达产物rOmpL1/1和rOmpL1/2。采用胶体金免疫电镜技术,对OmpL1s进行膜定位。建立了基于rOmpL1s的ELISAs,检测钩体病人血清中特异性抗体水平及其类型。试验结果表明,黄疸出血群钩体仍然是四川地区最主要的优势钩体血清群。中国流行的钩体主要血清群ompL1基因可有ompL1/1和ompL1/2两个基因型,两者核苷酸和氨基酸序列相似性之间有较明显的差异。OmpL1s是位于钩体外膜表面的蛋白分子。不同稀释度的156例钩体病人血清标本中,rOmpL1/1和rOmpL1/2特异性IgM阳性率分别为67.9%～79.5%和75.0%～75.6%,特异性IgG阳性率分别为71.8%～79.5%和75.0%～76.9%。上述试验结果提示,OmpL1s是位于钩体表面属特异性蛋白抗原。自然感染钩体时,rOmpL1/1和rOmpL1/2均可诱导机体体液免疫应答并产生IgM和IgG两类血清抗体,且两者之间有广泛的抗原交叉反应。rOmpL1/1和rOmpL1/2可作为研制通用性钩体基因工程疫苗和检测试剂盒的候选抗原。     

改良幽门螺杆菌抗原检测试剂盒 检测粪便幽门螺杆菌抗原的临床评价

目的评估改良幽门螺杆菌抗原检测试剂盒检测粪便幽门螺杆菌抗原(Helicobacter pylori stool antigen,HpSA)的准确性以及临床应用价值。方法采用随机、双盲、双验证和与~(13) C呼气试验(~(13) C-UBT)对比的方法,对门诊175例接受~(13) C-UBT检测的患者,采用最新研制出的一种改良幽门螺杆菌抗原检测试剂盒(胶体金法)检测粪便幽门螺杆菌抗原,以~(13) C-UBT检测结果为诊断H.pylori感染的"金标准",并将两者进行对比研究,所有检测结果均拍照存档,采用随机、双盲和双验证法,以期客观真实地评价改良幽门螺杆菌抗原检测试剂盒检测粪便幽门螺杆菌的效果。结果改良幽门螺杆菌抗原检测试剂盒检测HpSA敏感度为90.48%,特异度为90.00%,Youden指数为80.48%,Kappa值为0.799;HpSA检测ROC曲线下面积为0.902±0.027,与完全无诊断价值的机会线下面积0.50相比,差异有统计学意义(P=0.000);Spearman相关系数r=0.800,P=0.000。结论改良幽门螺杆菌抗原检测试剂盒能准确检测H.pylori感染,其操作简便,可作为非侵入性诊断H.pylori感染筛查以及流行病调查的一种方法,将来有望成为患者家庭自查幽门螺杆菌的一种方法。     

粘膜耐受在预防和治疗自身免疫病中的作用

粘膜应用自身抗原诱导外周免疫耐受状态 ,依赖应用抗原剂量 ,诱导产生两种粘膜耐受机制 :高剂量偏向产生T细胞克隆无能 /排除 ,低剂量偏向产生分泌抑制性细胞因子(TGF β ,IL 4,IL 10 )的T细胞克隆扩增。大量研究表明鼻内或口服应用抗原诱导粘膜耐受可有效预防几种实验性自身免疫病 (EAE ,EAMG ,EAN ,EAU ,IDDM和CIA) ,在同等剂量鼻内应用比口服诱导粘膜耐受更有效。基于动物实验结果 ,对人类自身免疫病MS、RA和葡萄膜炎的临床试验正在进行。耐受原与CTB偶联可拓宽粘膜耐受的有效性 ,加强对临床疾病的抑制。然而 ,粘膜免疫与抗原应用途径、种类和疾病发病时间有关 ,可能表现为双重作用 ,尤其在发展中的自身免疫病 ,粘膜应用抗原可能加重病情。     

Toll样受体4在实验性自身免疫性葡萄膜炎发病中的作用

目的:研究常见感染菌菌壁成份脂多糖(LPS)在自身免疫性眼病-葡萄膜炎的致病作用.方法:用视网膜抗原IRBP和福氏完全佐剂免疫B10.RⅢ小鼠,诱发实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU),在免疫动物同时添加LPS.免疫19天后检查迟发型变态反应(DTH);21天处死小鼠,收集腹股沟淋巴结和髂动脉淋巴结细胞,检测抗原特异性T淋巴细胞增殖和炎症细胞因子的分泌.结果:LPS加重B10.RⅢ小鼠EAU的发病;增强DTH反应;增加抗原特异性T淋巴细胞增殖和IL-17、IFN-γ的分泌.结论:LPS能够促进EAU发病,从而证明病原微生物感染可能参与如葡萄膜炎等自身免疫性疾病的发生.     

表达钩端螺旋体嵌合蛋白的重组BCG菌株可保护仓鼠免受钩端螺旋体病的侵袭

<正>钩端螺旋体病是一种人畜共患病,钩端螺旋体每年可导致100万人患病。融合多种免疫原性抗原是一种很有希望的提供有效的抗钩端螺旋体病疫苗的方法。牛分枝杆菌(BCG)具有良好的佐剂特性和安全性,是一种潜在的疫苗载体。以LigANI、LigBrep、LipL32和LemA基因序列为基础的两个嵌合基因被分别克隆到5个具有不同启动子(pAN、hsp60、18kDa、ag85b和ag85b+信号序列)的BioBrick载体中,用于在BCG中表达抗原。     

采用小白鼠分纯钩端螺旋体菌株

近年来,随着钩端螺旋体病的调查研究工作的广泛开展,在实验诊断方面,除进行大量血清学试验外,对钩端螺旋体菌株(以下简称钩体菌株)进行培养,作好菌群鉴定,对生物制品和制订防治措施提供参考。但往往由于在采集标本及实验操作过程中无菌操作不严格,而使分离出的钩体菌株发生污染。用常规方法     

布鲁氏菌病荧光偏振抗体检测方法的建立

【目的】布鲁氏菌病(Brucellosis)简称布病,是由布鲁氏菌引起的以感染家畜为主的人畜共患传染病,造成严重的公共卫生问题。目前全世界范围内消除该病的主要方法是扑杀与免疫相结合,所以建立快速准确的诊断方法对防治和清除布病非常必要。本文建立布鲁氏菌病荧光偏振(FPA)抗体检测方法,为布鲁氏菌病(布病)的快速高效诊断提供技术手段。【方法】提纯猪种布鲁氏菌S2株脂多糖O链(OPS),经异硫氰酸荧光素(FITC)标记后作为诊断抗原。通过对样品稀释液、抗原稀释度、反应时间等条件的优化,初步建立了布鲁氏菌荧光偏振诊断方法。用该方法对148份布病阳性血清(其中牛血清70份,羊血清78份)和155份布病阴性血清(其中牛血清82份,羊血清73份)进行检测,确定其敏感性和特异性。按确定的技术参数,制备3批布鲁氏菌FPA抗体检测试剂盒,使用质控阴、阳性血清分别评价试剂盒的批内和批间重复性。用400份临床样本比较本研究开发试剂盒与商品化进口FPA试剂盒的符合率。【结果】使用0.5%蔗糖磷酸缓冲液作为血清样品稀释液;标记抗原的使用浓度为90μg/m L;最佳反应时间为3-5 min。本检测方法的判定标准为:δm P值20时为阴性,δm P值≥20时为阳性。按上述条件建立的FPA检测148份布病阳性血清和155份布病阴性血清,结果敏感性为98.6%,特异性为98.7%。对400份临床样本的比对检测显示,研究建立的FPA方法与进口商品化试剂盒的总符合率为94.0%。【结论】研究建立的布鲁氏菌PFA抗体检测方法具有良好的特异性和敏感性,可作为一种重要的布病诊断快速诊断方法。     

重组钩端螺旋体外膜蛋白酶联免疫吸附(ELISA)检测方法的建立

目的建立以重组外膜蛋白为基础的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法。方法以基因重组技术获取重组钩端螺旋体外膜蛋白LipL32,以该蛋白为抗原,特异的钩体抗血清进行ELISA方阵滴定、交叉性试验、阻断试验,并对北京地区的70份犬血清使用建立的ELISA方法以及德国Virion公司的全菌体钩端螺旋体ELISA试剂盒进行相互验证。结果方阵滴定试验确立以100ng/孔为抗原包被浓度,1∶160为血清稀释度。交叉性试验具有广泛性、阻断试验标明该方法特异性强、灵敏度高。两种方法数据经χ2检验,两者检出率之间差异不显著。结论重组LipL32蛋白具有结合活性。初步建立了以重组LipL32蛋白为抗原的钩端螺旋体抗体间接ELISA检测方法。     

TLR/MyD88信号通路与自身免疫性疾病

Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是近年来发现的一类模式识别受体,通过识别病原相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern,PAMP),激活天然免疫.TLR信号还通过上调抗原提呈细胞(antigen presenting cells,APC)表面共刺激分子及APC分泌的炎症细胞因子调节获得性免疫.TLR/MyD88信号在自身免疫性疾病的发病过程中起重要作用.本文介绍了TLR/MYD88信号通路及其在自身免疫病如实验性自身免疫脑脊髓膜炎、类风湿性关节炎、实验性自身免疫性葡萄膜炎、实验性自身免疫性心肌炎和自身免疫性肾小球肾炎等发生发展中的作用.     

布鲁氏菌LS蛋白(BLS)研究进展

LS蛋白(2,4-二氧四氢蝶啶合成酶)广泛存在于动物、植物和微生物中,是催化核黄素生物合成的重要合成酶之一。该酶最显著的特征之一是其在不同物种中具有空间结构差异。布鲁氏菌LS蛋白(BLS)是布鲁氏菌的一种优势抗原,是由两个五聚体组成的结构稳定的十聚体。BLS是光滑型和粗糙型布鲁氏菌所共有的抗原,用于布鲁氏菌病的诊断可提高其敏感性;BLS可以激发抗原特异性细胞应答产生IFN-γ,从而对宿主产生保护力,是一种理想的布鲁氏菌病亚单位疫苗的候选蛋白。本文综述了BLS的结构特性及应用研究进展,旨在为BLS的深入研究和开发应用提供参考。     

国内外钩端螺旋体活菌苗研究动态

钩端螺旋体(以下简称钩体)死菌苗,已广泛用于预防人类和各种动物的钩体病,并已取得肯定的效果。然而,在用于动物时,不少学者相继发现,死菌苗虽可防止钩体病临床症状的出现,但尚不足以制止免疫动物肾脏带菌或尿中排菌。White等认为,制备死菌苗时,由于使用了福尔马林(以下简称福尔马林菌苗)或其它杀     

犬用钩端螺旋体抗体ELISA检测实验研究

通过对犬用钩端螺旋体病(钩体)ELISA检测方法的研究,建立了犬用ELISA钩体抗体检测方法。实验的最佳方案:包被抗原蛋白质含量为20μg/mL,酶结合物稀释度为1∶10 000,检测血清稀释度为1∶160。经10份犬免疫血清验证,均为阳性。此研究为犬用钩体抗体检测提供了一种简便快速的方法,具有重要的实用价值。     

网状内皮系统吞噬功能在钩端螺旋体病中的作用

用小白鼠和豚鼠对动物的实验性钩端螺旋体(简称钩体)感染的研究结果表明,网状内皮系统吞噬功能起着重大的作用。用墨汁封闭网状内皮系统(RES),可使小白鼠出现以全身广泛出血为特点的典型钩体病变,并致死亡,对豚鼠则可大大加重感染严重程度。以卡介苗激活RES吞噬功能,则可明显提高动物对钩体的抵抗力,延迟死亡时间,减轻病变程度,降低,E亡率。上述结果提示激活RES功能有可能在防治人类钩体病及其肺大出血上具有一定的意义。本文墨汁封闭RES小白鼠的实验性钩体感染还可作为一个较好的钩体病实验模型而用于药物防治的研究。     

钩端螺旋体的几种检测方法

钩端螺旋体的几种检测方法万成松张文炳曹虹（第一军医大学微生物学教研室,广州５１０５１５）钩端螺旋体（简称钩体,Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ）是一类细长、弯曲、两端呈钩状的螺旋体,钩体种类很多,分类学上归细菌范畴,可分致病性和非致病性两大类。钩体病是由致病性钩...     

钩端螺旋体感染早期出现的免疫细胞粘着现象

本文报道家兔皮下接种钩端螺旋体后的免疫细胞粘着现象(Immunoeytoadherence ICA)。感染钩端螺旋体的家兔血液淋巴细胞用波摩那型抗原包被的绵羊红细胞进行ICA检测,发现结合抗原的细胞的增加先于特异性抗体的出现,并伴随着最初的抗体反应。大肠杆菌和鼠疫杆菌感染的家兔淋巴细胞并不出现钩端螺旋体免疫细胞粘着现象,而不同血清型钓端螺旋体间存在交叉反应,说明此现象具有属的特异性,因此ICA试验可望作为观察本病早期免疫反应和早期诊断的一种方法。     

SIV抗体简便快速免疫测定法

SIV(simian immunodeficiency virus)抗体测定法已在很多研究课题中被证明是有用的。但是在野外条件或设备条件差的实验室里很难开展常规免疫测定法。现已发展了一种价廉、简便、快速的免疫测定法,即用灭活SIV抗原和F-C试剂盒(美国加州E.Y药厂出品)检测SIV抗体。F-C试剂盒是一种薄膜滤纸装置,利用金标记A-蛋白测定抗体或抗原。这种低费用     

诊断草皮草真菌病害的新方法

美国DNA Plant Technology公司和Koppers 公司联营的Agri-Diagnostics Associa-tes公司已开始出售用于草皮草(turf grass)真菌病害的诊断试剂盒。该公司说,这是第一个诊断植物真菌病的单克隆抗体检测技术。试剂盒可在病症出现之前同时检查腐霉枯萎病、钱斑病(dollar spot)和褐区病(brown patch)。开始买这种试剂盒的是纽约和芝加哥郊区的900个高尔夫球场。公司计划晚些时候把诊断试剂盒推广到美国东北部、中西部和南方地区。还计划为专门的草坪管理商行和在零售草坪和花园商店中的诊断中心实施一项试验