绵羊肌肉H-FABP和PPARγ基因表达的发育性变化及其对肌内脂肪含量的影响

选取不同日龄的雄性哈萨克羊和新疆细毛羊,屠宰后取背最长肌,用索氏抽提法检测肌内脂肪（Intamuscular fat,IMF）含量,用荧光实时定量PCR法检测心脏脂肪酸结合蛋白（heart fatty acid-binding protein,H-FABP）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ）基因表达的发育性变化极其对IMF含量的影响.结果表明：（1）随着日龄的增加,IMF含量在雄性哈萨克羊中持续上升,且在各生长期间的差异显著（P＜0.05）,而在新疆细毛羊的各生长期间无显著差异（P＞0.05）.雄性哈萨克羊的IMF含量在30～90日龄间极显著高于新疆细毛羊（P＜0.01）;（2）雄性哈萨克羊肌肉H-FABP基因的表达量在2日龄时最高,30日龄时降到最低,然后持续上升,各日龄间差异显著（P＜0.05）.新疆细毛羊中的表达量在2日龄时也最高,然后持续下降,到90日龄时降到了最低点,然后上升,各日龄间差异也显著（P＜0.05）;（3）雄性哈萨克羊肌肉PPARγ基因的表达量随着日龄的增加而呈下降趋势,各日龄间差异显著（P＜0.05）;新疆细毛羊中的表达量在2～60日龄期间持续上升且各日龄间差异显著（P＜0.05）,但在90日龄时降到最低点,然后上升;（4）在哈萨克羊中,H-FABP基因在30～90日龄间的表达量与IMF含量的相关系数为0.737（P＜0.01）,而PPARγ基因在2-90日龄间的表达量与之的相关系数为-0.835（P＜0.01）.     

绵羊ghrelin基因表达的组织分布和发育性变化

选取2、30、60、90和120日龄的雄性哈萨克羊和新疆细毛羊各6只（无120日龄的哈萨克羊）,测体重后屠宰,采下丘脑、垂体、心脏、肝脏、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃、十二指肠、背最长肌,用RT-PCR和荧光实时定量PCR法检测ghrelin基因表达的组织分布,及其在皱胃中的发育性变化。研究结果表明：（1）品种内各生长时期的体重差异显著（P〈0．05）。雄性哈萨克羊和新疆细毛羊的体重在2日龄时无显著差异（P〉0．05）,30～90日龄间,前者的体重极显著高于后者（P〈0．01）;（2）所检测的各组织中都有ghrelin mRNA分布,但主要在皱胃中表达,其表达量远高于其他组织（P＜0．05）;（3）两品种绵羊皱胃ghrelin基因表达的发育性变化模式基本相似,都随着日龄的增加而呈上升趋势,其中雄性哈萨克羊的表达量在2～60日龄间持续上升,60日龄后趋于水平;雄性新疆细毛羊的表达量在2～90日龄间持续上升,90日龄后趋于水平。研究还发现雄性哈萨克羊皱胃胂relin基因的表达量在2～90日龄间极显著高于新疆细毛羊（P＜0．01）。     

猪Musclin基因的组织表达特征及其与生脂基因的相关性分析

根据人、大鼠、小鼠Musclin基因序列设计引物,从大白猪肌肉组织提取总mRNA, R T-PCR扩增猪Musclin cDNA;利用半定量(Semi Quantitative, SQ) RT-PCR检测猪Musclin mRNA在不同组织、以及不同生长阶段和不同品种猪脂肪与肌肉组织中的表达量,研究不同品种猪皮下脂肪组织Musclin基因与脂肪酸合成酶(FAS)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ (PP ARγ)、甘油三酯水解酶(TGH)基因mRNA表达量的相关性.结果表明:猪Musclin基因片段与其他物种的同源性达59%以上, 该基因在内脏脂肪和皮下脂肪表达丰度最高,脾脏表达量最低(P<0.05);随月龄增长猪肌肉和皮下脂肪组织中Musclin mRNA表达量呈显著下降( P<0.05) ;瘦肉型猪肌肉和皮下组织Musclin mRNA表达显著高于脂肪型猪(P<0.05);皮下脂肪组织中该基因mRNA表达与FAS、PPARγ分别呈显著负相关和正相关(P<0.05),与TGH相关性不显著 (P>0.05).因此,猪Musclin基因除在肌肉中表达外,在脂肪等其他组织也能表达 ;该基因的表达与猪生长阶段、品种有关,且与生脂基因FAS、PPARγ密切相关.推测该基因可能在脂代谢中起到一定的作用 [动物学报 54(3):453-459,2008].     

绵羊皮肤中GHR、IGF-1和IGF-1R基因表达的发育性变化及品种特点

采用相对定量反转录多聚酶链式反应 (RT-PCR)方法, 以18S rRNA作内标, 研究了罗米丽(Romilly Hillys)×中国美利奴(新疆军垦型)杂交一代优质细毛羊和哈萨克粗毛羊皮肤中生长激素受体(GHR)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)和胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R) mRNA发育性变化并进行了品种间比较。分别于30、60、90、135、180和255日龄称重、采毛样, 并于30、90、135和255日龄采皮样。结果表明: 粗毛羊和细毛羊体重、羊毛生长的发育模式没有明显的差异, 30~135日龄体重迅速增加, 135~255日龄增重十分缓慢; 30~135日龄羊毛日增长逐渐增加, 135~180日龄羊毛生长十分缓慢, 而180~255日龄又上升到较高水平。粗毛羊皮肤中GHR mRNA在30~90日龄显著增加 (P<0.05), 90日龄达到高峰, 此后显著下降(P<0.05); 细毛羊在135日龄时GHR mRNA极显著地升高(P<0.01), 此后又极显著地下降。粗毛羊皮肤中IGF-1、IGF-1R mRNA 30~90日龄上升, 90日龄之后极显著下降(P<0.01); 细毛羊皮肤中IGF-1、IGF-1R mRNA出生时较高, 然后逐渐下降。品种之间比较, 细毛羊GHR mRNA出现高峰晚于粗毛羊, 135日龄高峰时显著地高于粗毛羊; 粗毛羊IGF-1、IGF-1R mRNA在90日龄出现高峰, 并极显著或显著地高于细毛羊; 粗毛羊90日龄前GHR、IGF-1和IGF-1R mRNA高于细毛羊, 之后低于细毛羊。结果提示: 绵羊皮肤中GHR、IGF-1和IGF-1R基因表达有特定的发育模式, 并存在品种差异。     

虾红素对小鼠肌肉组织和骨骼肌细胞中能量代谢相关基因mRNA表达的影响

本试验用高、低浓度虾红素日粮饲喂昆白系小鼠和处理原代培养小鼠骨骼肌细胞,提取总RNA,检测各时段UCP3、LXRα基因mRNA表达量,探讨虾红素对小鼠个体发育、肌肉能量代谢相关基因表达变化规律的影响。结果表明:高浓度组与对照组相比,小鼠体重增长明显减慢,肌肉组织第10天、30天以及骨骼肌细胞作用24h时UCP3mRNA表达量均显著下降(P<0.05),LXRα基因mRNA表达量均显著上升(P<0.05),72h达到极显著水平(P<0.01)。低浓度组与对照组相比,肌肉组织中UCP3、LXRα基因mRNA表达差异均不显著(P>0.05);虾红素作用骨骼肌细胞24hUCP3基因mRNA表达量显著下降(P<0.05),LXRα基因mRNA表达量显著上升(P<0.05)。结果提示虾红素对小鼠肌肉的能量利用有一定的调控作用。     

雌性藏猪不同生长发育阶段肌肉生长和脂肪沉积相关基因的表达模式

本研究利用包含140个与猪肌肉生长和脂肪沉积密切相关基因的Oligo功能分类基因芯片检测了藏猪在2、4、6和8月龄间背最长肌中这些基因的表达量变化,并在2月龄时与脂肪型的太湖猪和瘦肉型的长白猪进行比较.ANOVA分析结果表明:2-8月龄间藏猪分别有10和 7个基因的表达差异达极显著(P<0.01)和显著水平(P<0.05);2月龄时藏猪体重极显著低于长白猪(P<0.01)和显著低于太湖猪(P<0.05),而藏猪肌纤维面积却为最大,但品种间差异未达显著水平(P>0.05);2月龄时3个品种间分别有15和13个基因的表达差异达极显著 (P<0.01)和显著水平(P<0.05).STEM聚类分析结果表明:直线下降和上升是藏猪在2 -8月龄间最具代表性的基因表达模式(P<0.01).另外,5个差异表达基因的荧光定量RT -PC R验证结果与基因芯片结果的Person相关系数平均高达0.856±0.109.提示:藏猪在2-8月龄间骨骼肌生长发育强度较肌内脂肪合成沉积占优势,2月龄时藏猪脂肪酸合成相关基因的表达水平较其他两品种低,而脂肪酸β氧化和肌纤维生长相关基因的表达水平较高,与其在高原独特的自然生态环境和全放牧散养的饲喂方式下长期形成的品种特性相符 [动物学报 54(3):442-452,2008].     

红鳍东方鲀转录因子GATA4基因的表达

利用荧光实时定量PCR(q RT-PCR)技术对红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)成鱼的肾脏、肌肉、脑、脾脏、肝脏、精巢和卵巢等组织进行了GATA4基因的表达分析,并对幼鱼不同发育时间的个体水平上的GATA4基因的表达进行分析。结果显示,红鳍东方鲀成鱼的肌肉、脾脏、肾脏和脑等4个组织中的GATA4的表达量差异不显著,精巢、卵巢和肝脏的GATA4的表达量显著高于其他组织(P0.05),GATA4在精巢、肝脏中的表达量显著高于卵巢中(P0.05)。在雄性幼鱼5个发育时期中(23、30、40、60和80日龄),GATA4的表达量从23日龄到30日龄逐渐升高,30日龄最高且明显高于同时期雌鱼GATA4的表达量(P0.01),随后到40日龄之间表达量逐渐降低,从60日龄到80日龄又有上升的趋势。在雌性幼鱼5个发育时期中,GATA4表达量从23日龄到40日龄逐渐升高,40日龄最高且明显高于同时期雄鱼GATA4的表达量(P0.01),到60日龄期间表达量降低,从80日龄后又有上升趋势。各时期雌雄幼鱼,除40日龄外,其他各个时期在雄性中GATA4的表达量均高于在雌性中的表达量。     

藏鸡IRX3基因表达与肌内脂肪的沉积关系

旨在构建藏鸡IRX3基因的组织及时序表达谱,确定该基因与肌内脂肪的沉积关系。利用荧光定量PCR技术检测IRX3基因在不同组织和不同发育阶段肌肉组织中的表达水平,同时采用单因素方差分析方法分析肌内脂肪含量,并分析其时序表达与肌内脂肪含量的相关性。结果表明,IRX3基因在藏鸡各个组织中均有表达,在藏鸡肺组织中相对表达水平较高,极显著高于其他各个组织(P0.01)。IRX3 mRNA在210日龄公藏鸡腿肌和胸肌中相对表达水平均极显著高于其他日龄的表达水平(P0.01),而在1日龄母藏鸡胸肌中相对表达水平极显著高于其他日龄(P0.01)。藏鸡不同发育阶段肌肉组织中IRX3 mRNA表达水平与其IMF含量的相关性分析显示,公藏鸡腿肌IRX3 mRNA表达量与肌内脂肪含量呈正相关(P0.01),而在母藏鸡胸肌IRX3 mRNA表达量与肌内脂肪含量呈负相关(P0.01)。IRX3基因表达与藏鸡肌内脂肪含量存在相关性,推测IRX3可能对肌内脂肪的沉积具有调控作用。     

猪脂肪组织中IGF2和IGFBP3基因表达的发育性变化及其品种差异

采用荧光定量PCR技术分析长白猪和太湖猪背部皮下脂肪组织中胰岛素样生长因子2和胰岛素样生长因子结合蛋白3基因在30、60、90、120和150日龄时表达水平的发育性变化。结果表明: (1)品种内日龄间比较, 长白猪IGF2 mRNA 在30日龄时的表达量极显著高于其他日龄(P<0.01), 之后逐渐下降, 至120日龄降到最低, 150日龄时又明显上升; 太湖猪IGF2 mRNA在30~60日龄的表达量较高, 90日龄降至最低, 120日龄迅速回升, 之后又有所下降。两品种IGFBP3 mRNA表达的发育性变化模式基本相同, 30日龄时表达量最高, 60日龄显著下降(P<0.05), 之后趋于平缓但略有波动。(2)品种间同日龄比较, 120日龄时太湖猪IGF2 mRNA的表达量极显著高于长白猪(P<0.01), 150日龄时太湖猪IGFBP3的表达量极显著低于长白猪(P<0.01), 其余日龄间两品种差异均不显著(P>0.05)。研究结果提示: 猪脂肪组织IGF2和IGFBP3基因表达存在明显的发育性变化和品种差异; IGF2基因表达水平的降低可能与脂肪细胞的增殖有关。     

猪PID1基因CDS区的克隆及其mRNA表达与肌内脂肪沉积关系

为了探索PID1(Phosphotyrosine interaction domain containing1)基因的表达与脂肪沉积的关系,文章利用兼并引物进行RT-PCR从猪脂肪和肌肉组织中克隆PID1基因CDS(Coding region)区全序列,并采用荧光定量PCR方法对大白猪、鲁莱黑猪、莱芜猪3个猪品种的肝脏、脂肪和肌肉组织PID1基因mRNA表达进行了相对定量分析。结果表明:经克隆、测序,得到了猪PID1基因654bp全编码区序列,通过Blast比对,与人、大鼠、牛有93.88%、66.94%、88.07%的同源性。PID1基因在同一个品种猪中mRNA表达水平总体表现为:肝脏脂肪肌肉。在不同品种3种组织中PID1基因mRNA表达水平总体表现为:莱芜猪鲁莱黑猪大白猪,其中肝脏中差异显著(P0.05),但是在脂肪和肌肉组织中莱芜猪与鲁莱黑猪差异不显著(P0.05)。对于高肌内脂肪(LWH)、中等肌内脂肪(LWI)和低肌内脂肪(LWL)沉积的3组莱芜猪,PID1基因在肝脏组织中的表达水平是LWH显著高于LWL(P0.05),在肌肉组织中则是LWH显著高于LWI和LWL(P0.05)。PID1基因在莱芜猪品种内3个组织中mRNA表达量与IMF含量相关均不显著,而在品种间3个组织中mRNA表达量与IMF含量呈显著正相关(P0.05)。结果提示:PID1的表达可能与脂肪沉积性状存在一定的关系。     

The Developmental Changes and Effect on IMF Content of H-FABP and PPARγ mRNA Expression in Sheep Muscle

Male Kazak sheep and Xinjiang fine wool sheep of different ages were selected to investigate the developmental changes and effect on intramuscular fat (IMF) content of heart fatty acid-binding protein (H-FABP) and peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) mRNA expression in muscle. Longissimus dorsal muscle was sampled to measure IMF content; and total RNA was extracted to determine H-FABP and PPARγ mRNA expression levels by real-time PCR. The results showed that: (1) The IMF content increased continuously with growing and showed significant differences (P<0.05) between ages in male Kazak sheep, but no such differences (P>0.05) existed in Xinjiang fine wool sheep. Furthermore, the IMF content in Kazak sheep was very much higher (P<0.01) than that of the other breed from day 30 to 90; (2) H-FABP mRNA expression level was the highest on day 2 and showed significant differences (P<0.05) between ages in male Kazak sheep as well as in Xinjiang fine wool sheep. In the former breed, the expression reached the lowest point at day 30, and then rose continuously. But in the latter breed, it declined continuously from day 2 to 90, and then increased; (3) Significant differences (P<0.05) of PPARγ mRNA expression between ages occurred in both breeds. In male Kazak sheep, PPARγ mRNA expression declined from day 2 to 90, while in the other breed it increased continuously from day 2 to 60, but reached the lowest level at day 90, then increased; (4) In male Kazak sheep, the mRNA expression level of H-FABP was highly positively correlated (r=0.737, P<0.01) with IMF content from day 30 to 90, but that of PPARγ was highly negatively correlated (r=−0.835, P<0.01) with IMF content from day 2 to 90.     

The Tissue Distribution and Developmental Changes of ghrelin mRNA Expression in Sheep

Male Kazak sheep and Xinjiang fine wool sheep, six for each different age group (days 2, 30, 60, 90 and 120), were used in the present study to investigate the tissue distribution and developmental changes of ghrelin mRNA expression in abomasum; however, there was no 120-day-old Kazak sheep. After measurement of body weight, the tissues such as hypothalamus, pituitary, heart, liver, rumen, reticulum, omasum, abomasum, duodenum, and longissimus dorsi muscle were sampled. And the total RNA of different tissues was extracted to determine the abundance of ghrelin mRNA by RT-PCR and real-time PCR. The results showed that (1) for both breeds, body weight among different ages was significantly different (P<0.05). And from day 30 to 90, the body weight of Kazak was significantly higher than that of Xinjiang (P<0.01); (2) Ghrelin mRNA existed in all the above tissues and was significantly higher in the abomasum than in other tissues (P<0.05); (3) the temporal patterns of abomasum ghrelin mRNA expression in Kazak and Xinjiang were similar. From day 2 to 60 in Kazak and 2 to 90 in Xinjiang, there was a steady increase in the ghrelin mRNA level. By day 60 in Kazak and day 90 in Xinjiang, the level reached a plateau and remained steady. These results also demonstrated that from birth to day 90, ghrelin mRNA level was significantly higher in Kazak than in Xinjiang (P<0.01).     

Liver dominant expression of fatty acid synthase (FAS) gene in two chicken breeds during intramuscular-fat development

Fatty acid synthase (FAS) is a key enzyme of lipogenesis. In this study, the FAS mRNA expression patterns were examined in three fat related tissues (liver, breast and thigh) at different developmental stages in two chicken breeds (Beijing-You, BJY and Arbor Acres broiler, AA). Results of the Real time-qPCR showed that the expression of FAS mRNA level in liver was significantly higher (P < 0.01) than that in breast and thigh in both two chicken breeds. Significant differences of FAS mRNA expression in liver were found between BJY and AA chickens during different developmental stages. After the contents of intramuscular-fat (IMF) and the liver fat were measured, the correlation analysis was performed. In liver, the FAS mRNA level was highly correlated with hepatic fat content (r = 0.891, P < 0.01 for BJY; r = 0.901, P < 0.01 for AA). On the contrary, the FAS expression level in both breast and thigh tissues were relatively low, stable and there was no correlation between the FAS mRNA level and IMF content in breast and thigh tissues of each breed. The results here can contribute to the knowledge on the developmental expression pattern of FAS mRNA and facilitate the further research on the molecular mechanism underlying IMF deposition in chicken.     

绵羊18号染色体微卫星多态性与后臀发育关系的研究

根据绵羊18号染色体遗传连锁图谱及相关报道, 选择了可能与Callipyge基因连锁和有关的10个高度多态微卫星基因座(ILSTS54、TGLA337、 HH47、TGLA122、BP33、OB2、BM3413、MCM38、MCMA26和CSSM18), 分别对Dorset和Suffolk两个肉羊群体的遗传特性进行了分析。研究发现, 同一微卫星基因座在Suffolk与Dorset群体间的群体遗传参数以及对同一性状的影响情况明显不同。Dorset群体中, 等位基因个数为8~16个, 杂合度为0.8370~0.9252, 多态信息含量为0.8221~0.9167; 而在Suffolk群体中相应参数分别为5~10, 0.7603~0.8913与0.7176~0.8809。对10个微卫星基因座进行臀宽的最小二乘分析, 结果表明: 在Dorset群体中, 微卫星基因座BM3413、MCMA26和CSSM18对臀宽有显著影响(P<0.05), 其余7个微卫星对后臀宽度的影响均未达到显著水平(P>0.05); Suffolk群体中微卫星基因座TGLA122、BM3413、MCM38和CSSM18对绵羊臀宽存在显著或极显著影响(P<0.05或0.01), 其余6个微卫星基因座对臀宽的影响均未达到显著水平(P>0.05)。研究表明, 导致新疆肉羊群体后臀肌过度发育可能是其他基因或QTL的作用。