发酵白酒糟生产饲料蛋白的培养条件及产物分析

利用白地霉(Geotrichum candidium) Z-4、热带假丝酵母(Candida tropicalis) Z-14和木素木霉(Trichoderma lignorum) Z-20三株菌混合发酵白酒糟生产饲料蛋白的培养基成分为白酒糟90％、麦芽根粉10％、尿素2％,原料:水=1:0.8,pH6.0,接种量10％,培养温度28～30℃,培养周期3d。分析结果表明,发酵产物营养丰富,粗蛋白含量高达32.1％,氨基酸含量齐全,脂肪含量为5.6％,维生素B_1和B_2的含量分别为2.2mg/kg和52.6mg/kg。具有较高的纤维素酶、半纤维素酶及淀粉酶活性。     

利用固定化酵母细胞转化反式肉桂酸生产L-苯丙氨酸

研究了探红酵母(Rhodotorula rubra)的培养基成分、培养固定化及转化条件。实验表明最佳培养基成分(％)：葡萄糖0 5,胰蛋白胨0．5,酵母膏0．5,磷酸二氢钾0．05,L-Phe0．05,pH．0,30℃,20L发酵罐中培养15～17h.最佳固定化条件为：用2．5％卡拉胶包埋18％的湿菌体。最佳转化条件为：1．0％反式肉桂酸,4mol／L铵离子,pH10．5,30℃。用卡拉胶固定化的深红酵母(Rhodotorula rubra)可以将77．7％的反式肉桂酸转化为L-苯丙氪酸。     

清香型白酒发酵过程中酵母群落结构及其与尿素代谢的关系

【目的】探索清香型白酒发酵过程中酵母群落结构及演变,分析潜在的关键尿素代谢酵母及其环境调控因素,为降低发酵过程中氨基甲酸乙酯的含量提供理论依据。【方法】通过相关性分析明确发酵过程中氨基甲酸乙酯主要前体物质及其代谢微生物类群,利用高通量测序技术解析酵母群落结构组成,并结合偏最小二乘回归分析寻找潜在的关键尿素代谢酵母。采用冗余分析评价发酵过程中环境因素对酵母群落结构的影响。【结果】尿素是清香型白酒发酵过程中氨基甲酸乙酯的主要前体物质,酵母是尿素代谢的主要微生物。高通量测序结果显示,在97%的相似度下进行操作分类单元聚类后,共鉴定出22个酵母种。其中,嗜高压有孢汉生酵母(Hanseniaspora osmophila)、发酵毕赤酵母(Pichia fermentans)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)与尿素合成存在正相关性,库德毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)与尿素降解存在正相关性。酒醅含水量、p H、乙醇和精氨酸是影响发酵过程中酵母群落演替的重要环境因素。【结论】环境因素影响潜在的关键尿素代谢酵母,为降低发酵过程中尿素与氨基甲酸乙酯含量提供理论依据。     

北京红篓菌合成聚羟基烷酸的研究

报道从污水处理厂回流池废水中分离到的北京红篓菌 (Rcs.pekingensisstrain 3-p)合成PHAs的研究结果。实验结果表明 ,3 p菌株生长及积累PHAs的最佳培养条件为 :0 0 1 %酵母膏 ,0 0 1 %NH4 Cl,乙酸钠 5g L ;培养基最适pH值为 7 0～ 7 2。在此培养条件下 ,细胞内PHAs积累量达菌体干重的 60 %以上。酶活测定表明菌株 3 p含有与PHAs合成相关的β 酮硫解酶 ,乙酰乙酰CoA还原酶 ,PHA聚合酶 ,初步推断此菌株的代谢途径为     

制备13β-乙基-3-甲氧基-8，14-开链-1，3，5(10)，9(11)-雌四烯-17β-醇-14-酮的微生物学研究

调查了10属酵母共104株形成一种光学活性的13β-乙基-3-甲氧基-8,14-开链-1,3,5(10),9(11)一雌四烯-17β-醇-14-酮的能力。发现酵母属酵母具较强的活性。啤酒酵母AS2.346是一株最好的菌,它能使底物几乎全部转化成产物。用这株菌研究了酵母细胞的培养和转化条件。在发酵过程中,观察到了“假结晶发酵”现象。在最适条件下,[葡萄糖4—4.5％和玉米浆2—2.5％,微酸性条件下培养的幼龄酵母细胞,转化pH中性,31屯并通气,乙醇浓度不高于3％(体积／体积)。]产物收率达85—90％。     

液体石蜡发酵生产琥珀酸的研究Ⅱ．摇瓶发酵条件的研究

对产琥珀酸较优良菌株Cundida rugosa SB-7进行了摇瓶发酵条件的研究,产生琥珀酸的最适氮源是尿素,用量以0．1％为宜。在发酵过程中必须加入足够量的CaCO35以控制发酵液的pH,玉米浆也是影响发酵的重要因素。SB-7在适宜的条件下,琥珀酸的最高产量可达4.45％,对液蜡的转化率为74％,在发酵过程中还可积累少量的延胡素酸和a一酮戊二酸。     

产氨短杆菌B1-15-15分段合成法制造5’-肌苷酸及其它核苷酸类物质

产氨短杆菌(Brevibacterium ammoniagenes)B_1-15-15,为野生型,需生物素,对Mn++不敏感菌株,它具有“分段合成”核苷酸的能力,将外源核酸碱基转变为相应的核苷酸类物质。在30℃摇床培养3天后,加入0.3—0.5％的次黄嘌呤继续培养2天,可产生5'-IMP12一16克／升。发酵的适宜条件为：培养基分别灭菌前的pH,糖镁液为5．7(自然pH),磷氮液为7.0;发酵过程中补加尿素控制pH6.7—7.0,尿素总量0.7％左右;玉米浆用量3—4％;Mn++ 50一100微克／升。在30℃培养2天,补加0．4％尿素和0．4%次黄嘌呤,提高温度至37℃培养,可缩短发酵周期至2.5天,5'-IMP产量为9．54克／升。     

重组巴氏毕赤酵母高密度发酵表达rHSA

对基因工程菌Pichiapastoris的摇瓶发酵条件进行了试验 ,并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在摇瓶发酵时 ,甲醇诱导基因工程菌P .pastoris表达重组人血清白蛋白的发酵周期为 96h ;甲醇的最佳诱导浓度为 1 0g L ;发酵pH范围为 5 72～ 6 5 9;在摇瓶培养时 ,随着接种量的增加 ,虽然目的蛋白表达量缓慢增加 ,但单位细胞光密度的蛋白产率却明显下降 ,符合y =1 2 941x- 0 50 59方程 (线性相关系数r=0 9789) ,其限制性因子很可能为溶氧。在分批发酵 ,接种量为 1 0 %且种子细胞光密度 (OD60 0 )为 2 0左右时 ,细胞生长的延迟期为 2 1 1h左右 ,细胞生长光密度与培养时间的关系模型为 :y =0 7841e0 .2 3 19t(线性相关系数r=0 .993 6 ) ;在补料发酵时细胞干重浓度可达到 1 1 5g L— 1 6 0g L ,在 1 2 0h重组人血清白蛋白表达量最大达到 3 6g L。     

一株新的石油脱蜡酵母——脱蜡球拟酵母及其发酵性能

从新疆克拉玛依油田土壤中分离到一株C1酵母,经鉴定属于球拟酵母(Torulopsis),但不同于该属内所描述的各个种。它不同化纤维二糖和L-阿戊糖,对石油一些馏份脱蜡效果好,定名为脱蜡球拟酵母(Torulopsis deparaffina n. sp.)。该菌对300--400℃馏份油(正烷烃含量为5.60％)发酵50小时,油凝点由+4.5℃降至—53℃发酵70小时降至一60℃;每公斤原料油(正烷烃含量为8．87％)可收获精制千酵母5．4．2克。     

菊糖酶发酵生产条件的研究

脆壁克鲁维氏酵母（Kluyveromycesfragilis）在pH5．5的适当培养基中,28℃摇瓶培养30h后,进行分批发酵。结果表明：发酵初始pH为6．0～6．5,菊糖浓度为2％,接种量4％,控制前期发酵温度为28℃,33h后发酵温度为32～34℃。发酵周期为70h左右,最高产酶达240u／ml。在5L自控发酵罐中,产酶达到同样水平,发酵周期缩短约10h。     

耐高渗透压酵母生产甘油及阿拉伯糖醇的研究II．Hansenula arabitolgenes Fang产生阿拉伯糖醇的条件

研究了275号酵母(Hansenula arabitolgenvy Fang)产生多元醇的条件。在最适情况下,30％的葡萄糖发酵4日可产生10％左右的多元醇(发酵液中浓度),收率按加入糖计算为33％。其中主要是阿拉伯糖醇,发酵液中甘油浓度仅1％左右。通气量对发酵有很大影响,通气量增大时,多元醇产量增加,乙醇产量减少,残糖低,酵母重量增加。磷酸盐对发酵无显著影响。     

细菌产生的高分子材料——聚羟基丁酯

当Pseudomonas sp．生长在植物油或正烷烃中时能产生大量的聚羟基丁酯(简称PHB)。其合适的培养基为2％正烷烃、O．05％尿素和0．05％酵母膏。从对数生长期至稳定期该菌累积的PHB量可达干细胞重的30-40％。该菌中获得的PHB的红外光谱图的吸收峰与其他细菌中获得的PHB相同。     

肌苷产生菌枯草芽孢杆菌Bs菌株的选育和发酵条件

1．用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)腺嘌呤营养缺陷型(ade-)No 18经1次亚硝基胍(MNNG)。诱变处理及2次单菌落分离,获得了能利用酶法制造葡萄糖3次结晶母液,发酵生产肌苷的变异菌株B,。在适宜条件下,摇瓶肌苷产量在7.0克／升以上。 2．不同来源的酵母粉及其在培养基中的含量,对肌苷产量均有显著影响。在所试验的酵母粉中,以北京光华木材厂生产的圆酵母最好,在种子和发酵培养基中的逢合用量分别为1.0一1.4％和1.2一1.4％。 3．在发酵过程中,次黄嘌呤的积聚和肌苷积聚有着明显的消长关系。4．枯草芽孢杆菌B4菌株具有很强的分段合成肌苷的能力,当添加0．3％次黄嘌呤时,可获得高于对照93．3％的肌苷产量,但转化率以添加0．1％次黄嘌呤时为最高。     

酵母菌杂交育种IV．高产酒精酵母杂交育种

用显微操作技术进行 Saccharamyces cerevisisae 系 2.576 (mel-)与 S. carlsbergensis 2．500 (MEL+)以及 S．Cerevisisae Stole 系(mel-)与S. microelltpsoides 2.699—2—3(MEL+)种间杂交。获得的杂种能全发酵棉子糖,而亲株只系与Stolc系仅能发酵此糖1／3。两个不同杂交系的杂种H808与H824-14用孢子×孢子交配法进行杂交,所有的杂种酵母H868、H869,H875和H876发酵糖蜜醪比生产菌株日系及Stole系快。H875菌株生成酒精量比其亲株高3一10％。将H875菌株与生产菌株S. cerevisiae DT菌系杂交,获得H946和H948两株杂种,其中H948酒精发酵力比DT系高3％,比H875高2％,是一株酒精生产优良新品系。     

发酵条件对毕赤酵母表达重组人干扰素ω糖基化的影响

发酵条件是影响毕赤酵母 (P .pastoris)表达外源重组糖蛋白时糖基化的重要因素。通过菌体浓度、起始pH值、甲醇诱导浓度和周期、装液量等摇瓶发酵实验 ,研究不同发酵条件对毕赤酵母表达分泌型重组人干扰素ω(rhIFNω)过程中糖基化的影响 ;同时 ,在连续培养过程中考察pH值变化对rhIFNω糖基化的影响和分批发酵过程中rhIFNω糖基化的变化。结果表明 ,控制菌体密度 250g L(WCW)、起始pH值 6 0、装液量小于 30mL、甲醇诱导浓度 15g L、甲醇诱导 3次 (每 24h诱导一次 )等发酵条件 ,有利于摇瓶发酵过程中rhIFNω的糖基化 ;控制pH值 70～75可促进rhIFNω的糖基化 ;分批发酵过程中 ,糖基化与非糖基化rhIFNω的含量有同比变化趋势 ,但糖基化rhIFNω所占比例明显低于摇瓶发酵实验的结果 ,其原因有待进一步研究。     

红法夫酵母产特种胡萝卜素酮的研究

红法夫酵母(Phaffia rhodozyma)可产3-羟-3’,4-二脱氢-β,φ－胡萝卜素－4－酮(HDCO)．经多次诱变和HDCO生成条件研究．HDCO产率由原来的30μg,g(细胞干重)提高至510μg／g(细胞干重)．HDC0占P．Rhodozyma所产总类胡萝卜素含量由8%提高到45%。还对促进和抑制HDCO生成因子及可能的机理进行初步探讨。酵母产HDCO的研究在国内外尚属首次报道。     

尿素对热带假丝酵母(Candida tropicalis)合成长链二元酸途径的调节 Ⅰ.抑制和阻遏作用

尿素明显地影响热带假丝酵母的长链二元酸合成。当存在适量尿素(0.1％)时,长链二元酸大量合成,但当尿素量增加至0.2％以上时,长链二元酸基本上不积聚,但短链二元酸,主要是庚二酸有所增加。 尿素的利用呈S形曲线,说明尿素可能经酶的诱导利用。在发酵中当尿素量增至0.2％以上时,整个发酵过程均残留少量尿素,它对长链二元酸的合成起着调节作用。 发酵中加入和尿素含氮量相当的酒石酸铵或硫酸铵以代替尿素,或在适量尿素的发酵过程中,补加入和0.1％尿素含氮量相当的氨时,均不明显抑制长链二元酸的合成,但在不同时间补加入0.1％尿素时,则受强烈抑制。 适量尿素(0.1％)培养的休止菌体,在不同时间补加尿素都显著抑制长链二元酸的合成,表明尿素对已生成的酶系具有抑制作用。但过量尿素培养的休止菌体,不能转化烷烃生成长链二元酸,说明过量尿素所培养菌体的长链二元酸合成酶系受到显著的阻遏作用。 适量尿素培养的休止菌体,在不同时间加入氨,它的抑制作用远较尿素为低。用适量尿素含氮量相当的铵盐培养的休止菌体,亦具有类似现象,但过量氨培养的休止菌体转化时仍能生成多量长链二元酸。以上均说明尿素对长链二元酸合成的影响不是氨而是尿素分子本身起了抑制和阻遏作用。 尿素分子的化学结构类似物——硫脲和胍也具     

利用微生物混合培养技术生产聚羟基烷酸(PHA)研究

研究了圆褐固氮菌(Azotobacter chroococcum)突变株G3与巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)G6发酵生产聚羟基烷酸(PHA)的人工可配伍性,确定了它们混合培养的适宜条件,先将G3菌株发酵培养24～28 h后,再以15%(v/v)接种量接入G6菌株并同时补加05%(g/g)蛋白胨(FP)和0.5%(g/g)NH4NO3,继续混合培养42～46h,细胞干重达32 g/L,PHA含量为80%,再结合补料技术最终生物量可达53 g/L,PHA产生量达42.4 g/L。糖对PHA的转化率为0.32。人工混合培养成功地解决了固氮菌发酵生产PHA过程中,发酵液粘度过高,传质较差,补糖总量上不去等技术问题。     

耐高渗透压酵母生产甘油及阿拉伯糖醇的研究I．菌种的分离及筛选

1．由蜂蜜、花粉及蜜钱果脯等物质分离出耐高渗透压酵母630株,经过筛选拽出21株多元醇产量高的酵母,以275号最好,多元醇产量在10％以上(发酵液中浓度)。 2．将我所保藏的八百余株酵母进行了筛选,找出2．309(Zygosacharomyces chevalieriGuill．)及2．62(Candida sp．)等菌株,甘油产量特别高。 3．由于比较了各种不同属种酵母的发酵类型,发现生理特性与分类间有一定相关性。 4．接合酵母属与酵母属的发酵类型显然不同,这一事实支持了将两属分开的意见,而不同意象L(9dder和Kregel～van一酬的井为一属的意见。     

丙酸发酵的研究

北京丙酸杆菌(Propionibacrerium beijingense)不能利用无机氮。蛋白胨和酵母膏的种类对该菌生长和产酸的影响显著,其中以酵母膏最好,浓度以l一2％为宜。丙酸发酵最适温度为25一30℃,最适pH为6．5,葡萄糖浓度以1-2％为佳。使用下列发酵培养基(％)：葡萄糖2．酵母膏2,CaCO3,1．5,丙酸产量为9．35g／L,对糖的产率达51．94％,丙酸对乙酸的比例近5：l。