植物材料光学和电镜蛋白A-金胶体结合体标记技术

这里介绍一种可在光学显微镜薄切片和电子显微镜超薄切片上标记的技术。我们初步应用这一技术来做燕麦球蛋白的定位,结果是成功的(图版图1,2)。现将操作方法简述如下: 一、样品制备 1.把切成2—3微米~3的新鲜材料,用磷酸缓冲液(pH 7.1)配制的3—4％甲醛(加2.5％蔗糖),在室温固定2小时; 2.用磷酸缓冲液清洗两次,每次30分;     

安徽歙县并殖吸虫囊蚴感染报告

1964年4月我们在皖南石台的华溪蟹(Sinopotamon)检到囊蚴后。1965年4月又从歙县西溪南公社依坑溪(黄山南20余公里)的华溪蟹中检获二种囊蚴:一种为其他科吸虫囊蚴,将另文报告;一种为卫氏并殖吸虫(Paragonimus westermani)囊蚴,感染猫、犬后获得该虫成虫,兹将结果报道如下。 材料与方法 所有华溪蟹系1965年4月从歙县西溪南公社依坑溪采集。按体重、性别分10克以上、5—10克、5克以下(以下简称大、中、小蟹)三组,捣碎水洗沉淀。在解剖镜下观察并测量囊蚴。     

一种快速观察四膜虫纤毛的方法

器材与药品离心机,三用水箱,天平,染色缸。席夫试剂(schiff reagent),漂白液,乙醇二甲苯,磷酸缓冲液(PH7.2)。亮绿(溶剂是95％的乙醇) 步骤 1.取四膜虫浮液3—5ml,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 2.用PH7.2磷酸缓冲液洗涤,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 3.涂片。用甲醇固定液固定。 4.水解处理。室温下先在1NHCl中处理1分钟,后移至1NHCl(60℃)中处理7—9分钟(水解     

电针颧髎穴和尾部电流致痛后c—fos在大鼠中枢脑桥延髓内DBH阳性神经元中的表达

本研究在大鼠上分别用电针大鼠面部颧髎穴和尾部电流刺激致痛后,报道DBH阳性神经元与c—fos蛋白在中枢神经系统中的共存。实验在雄性SD大鼠上进行。刺激后2小时,经心脏用4％多聚甲醛磷酸缓冲液灌注固定,脑组织作冰冻冠状切片。在同一切片上顺序进行Fos抗体—ABC—DABni和DBH抗体—PAP—DAB双免疫细胞化学方法染色,并以不刺激动物作对照,结果表明:针组和痛组动物均可在脑干若干核团内观察到Fos样免疫阳性(FLI)显示神经元在细胞核上,星紫黑色。光镜下在A_1、A_2、A_3蓝斑与蓝斑下核处有DBH样免疫阳性(DLI)在细胞体、突起和终末上,呈棕黄色,但胞核不染。光镜下出现三种形式神经元:1.仅有FLI胞核染色。2.仅有DLI胞质、突起和终末染色。3.FLI胞核存在DLI胞体中(即共存)。统计分析表明。在脑干部位,FLI在网状外侧核(RL)、孤束核(nts)、延髓头端腹侧区(RVM)和导水管周围灰质的腹侧、腹外侧和外侧部位(PAG)针组显著多于痛组。共存神经元仅在A_1部位针组显著地多于痛组,A_2、A_5及蓝斑部位。针组与痛组的共存数差异不显著。     

DISTRIBUTION PATTERN OF CHINA MAINLAND-ENDEMIC SINOPOTAMON ( CRUSTACEA, DECAPODA, POTAMIDAE)

华溪蟹属Sinopotamon是中国淡水蟹类的特有属.在构建种群数据库的基础上,对华溪蟹属的分布格局进行了深入的研究.结果显示:迄今,华溪蟹属已报告75种和9亚种,占中国淡水蟹总数的29.68％ (84/283),系中国淡水蟹36个属中所含种及亚种最多的一个类群,广泛分布于赣、鲁、苏、皖、浙、闽、湘、鄂、粤、桂、川、黔、豫、晋、陕、陇、冀计17个省区.华溪蟹属的分布格局与中国自然地理环境区域分异密切相关,自然地理的阻限等因素是导致华溪蟹属在中国高度分化的主要原因,表现出该属下物种对现代自然条件的适应及其遗传与分化至现阶段的结果.依照中国淡水蟹类地理区划的划分,华溪蟹属分属于西南区、华中区、华南区、华北区及其各亚区的东部季风区内,以东洋界物种成分为绝对优势,其地理分布约以24°N为其南限,37°N为北限,经度则为103°E以东直至东南沿海地区.在垂直分布上,该属物种多分布在海拔200～1 000 m.又以长江中下游一带物种最为丰富,而黄河与淮河流域则相对贫乏.秦岭及其淮河一线成为华溪蟹属东洋界和古北界物种的明显分野地域,但二界之间存在广泛过渡与渗透.据此,华溪蟹属的地理分布,均受制于中国第2级阶梯和第3级阶梯内的秦岭、雪峰山、巫山、太行山、南岭、武夷山等主要山脉及其低岗丘陵与平原地域.     

不同类型的蛇毒对B_(16)F_(10)黑色素瘤和软骨肉瘤的细胞毒性

本文研究各种眼镜蛇科、响尾蛇科和蝰蛇科蛇素在体外.体内对 B16F10黑色素瘤和体内对软骨肉瘤的细胞毒性。细胞毒性的测定在体外采用瘤细胞培养法:把含10~5黑色素瘤细胞的悬液1ml 置于3厘米的佩特里细菌培养皿中,每个培养皿加含6微克天然蛇毒的磷酸缓冲液(0.01M,PH7.0)10微升,培养24小时。用倒置相差显微镜连续观察瘤细胞,通过计数受损细胞(失去突起和与基质分离)的数量来决定细胞毒性的大小。体内试验通过在 C_(57)黑小鼠皮下或尾静脉注射瘤细胞与蛇毒的混悬液来进行,对照组只注射瘤细胞,2——3周后观察注射部位及肺部的肿瘤。     

河南华溪蟹金属硫蛋白的GST融合表达及工程菌吸附重金属的研究

目的:构建河南华溪蟹金属硫蛋白(MT)的GST融合表达系统,诱导其可溶性表达,并检测转MT工程菌吸附重金属的能力。方法:采用基因工程技术,将河南华溪蟹MT的cDNA克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达。在此基础上采用火焰原子吸收分光光度计测定工程菌对重金属离子Cu~(2+)、Cd~(2+)、Zn~(2+)的吸附能力。结果:pGEX-6p-1-MT重组质粒构建成功,SDS-PAGE分析表明GST-MT为可溶性表达,表达菌体对3种重金属的生物吸附能力均显著高于空菌体(P0.01)。结论:实现了华溪蟹MT的GST融合表达,转MT工程菌对Cu~(2+)、Cd~(2+)、Zn~(2+)具有显著吸附作用,且对Cd~(2+)的吸附作用最强。     

肺吸虫囊蚴感染华溪蟹一例报告

1983年8月下旬,我们在江西万载县官元山采育林场的三洋坑溪内,捕获一只重约26克的雄性华溪蟹。为了解肺吸虫囊蚴感染情况,将蟹分为螯肢、步肢和胸体部三份,用直接分离检查法检出囊蚴并分别计数。现将结果报告如下。 整只蟹共检出囊蚴6,599只,其中螯肢部检出933只,占总数的15.05％,步肢部检出2,175     

蝗虫性细胞减数分裂制片方法的改良

最近,我室采用分离、滴片方法观察蝗虫性细胞减数分裂,取得良好效果。现介绍如下。 1.取材在麦熟和稻熟季节采集蝗虫。取其精巢固定于卡诺液中0.5—1小时。去固定液,用95％酒精洗3次,移于70％酒精中,置于低温下可长期保存。 2.制片方法 (1)用眼科镊把精巢取出,装入瓶中,加入碎玻璃反复振荡,使组织捣碎。 (2)用吸管吸取捣碎液放入离心管内,以1000转/分的速度离心3—5分钟。去上清液,     

金鱼精子鞭毛发生的特点

金鱼(Carassius auratus)是鲤形目鲤科硬骨鱼,精子为初级型,但在鞭毛上存在许多液泡。本文着重描述了在它的精子发生过程中,鞭毛形成的特点。现报告如下: 材料与方法 在不同季节从二龄金鱼(红龙睛)睾丸上不同部位取出小块组织,或在生殖季节用轻压腹部法挤出成热精子,即用2％戊二醛在室温下固定0.5小时,缓冲液稍洗后,在含0.8％亚铁氰化钾缓冲液内浸     

酶的微波孵育

我们在酶组织细胞化学技术中,应用微波辐射对生物组织进行快速孵育处理,获得满意的效果。具体操作;将小鼠断椎处死后立即打开腹腔,取出心、肾等组织,用刀片切成1mm~3左右的小块,放入2％多聚甲醛和2.5％戊二醛混合固定液中固定2小时。再用0.1mol/L二甲胂酸钠缓冲液浸洗3次,每次10分钟。     

激素和活性多肽

921338盆组组缅生长激紊的大规模一提纯和再折扭〔英〕/Sugimoto,5.…了Agrie Biol.Chem。一1991,55(6)一1635~1637[译自DBA,1991,10(15),91一10383〕 在Manton Gaulin均化器中搅匀含有细鳗重组生长激素(rEST)的大肠杆菌细胞折射体。在s000rPm下离心匀浆(40min),用IM蔗糖洗涤片状沉淀物,然后用4%TritonX一100、20 mM磷酸缓冲液和1 mM EDTA(P H7.2)使之溶解,从而产生折射体。用6M盐酸服、50 mM Tris-HCI和0.005%吐温50(pHs.0),于4℃下搅拌2小时,溶解折射体,然后经离心(80oorpm、40m她)回收之。为使rEST分子再折叠,用10皿MTris…     

水牛和黄牛肉孢子虫包囊超微结构研究

左仰贤(1988)曾报道一种寄生于水牛的肉孢子虫未定种(Sarcocystis sp.)包囊,其光学形态和梭形肉孢子虫(S.fusiformis)、莱氏肉孢子虫(S.levinei)、枯氏肉孢子虫(S.cruzi)、毛肉孢子虫(S.hirsuta)的包囊均不同。本文用扫描和透射电镜对这五种肉孢子虫包囊的超微结构进行观察。 材料和方法 将包囊分别用0.85％生理盐水清洗,然后用2.5％戊二醛固定,(1)经脱水、干燥、喷金,用 Jsm 3.5 型扫描电镜观察;(2)用 0.1mol/L、pH7.2 磷酸盐缓冲液洗两次,1％ 锇酸固定,经脱     

大蒜根的扫描电镜图象

将蒜根切成1-2毫米长的小段,放在2%戌二醛固定液中固定4小时,并用抽气泵抽去组织中的空气;用缓冲液冲洗几次后放入5-6%高锰酸钾固定液中固定48小时,再用缓冲液冲洗后,乙酸逐级脱水,然后喷碳喷金.这种二次固定制取的样品很脆,一碰就碎,这有利于     

中国大陆特有华溪蟹属分布格局探讨(甲壳纲,十足目,溪蟹科)

华溪蟹属Sinopotamon是中国淡水蟹类的特有属。在构建种群数据库的基础上,对华溪蟹属的分布格局进行了深入的研究。结果显示:迄今,华溪蟹属已报告75种和9亚种,占中国淡水蟹总数的29.68%(84/283),系中国淡水蟹36个属中所含种及亚种最多的一个类群,广泛分布于赣、鲁、苏、皖、浙、闽、湘、鄂、粤、桂、川、黔、豫、晋、陕、陇、冀计17个省区。华溪蟹属的分布格局与中国自然地理环境区域分异密切相关,自然地理的阻限等因素是导致华溪蟹属在中国高度分化的主要原因,表现出该属下物种对现代自然条件的适应及其遗传与分化至现阶段的结果。依照中国淡水蟹类地理区划的划分,华溪蟹属分属于西南区、华中区、华南区、华北区及其各亚区的东部季风区内,以东洋界物种成分为绝对优势,其地理分布约以24°N为其南限,37°N为北限,经度则为103°E以东直至东南沿海地区。在垂直分布上,该属物种多分布在海拔200～1000m。又以长江中下游一带物种最为丰富,而黄河与淮河流域则相对贫乏。秦岭及其淮河一线成为华溪蟹属东洋界和古北界物种的明显分野地域,但二界之间存在广泛过渡与渗透。据此,华溪蟹属的地理分布,均受制于中国第2级阶梯和第3级阶梯内的秦岭、雪峰山、巫山、太行山、南岭、武夷山等主要山脉及其低岗丘陵与平原地域。     

幼龄猪囊虫的形态及活力观察

最近我们对幼龄猪囊虫的形态学及活力作了一些观察,简报如下。一、幼龄猪襄虫形态学观察细心剥离新鲜的含小型囊虫的“米猪肉”,取囊虫置入生理盐水中肉眼观察后,把囊虫置入40%胆汁生理盐水中42℃孵育2h,头颈部孵出后以生理盐水洗涤数次,随意取囊虫20个在光学显微镜下观察。部分孵育后的囊虫(含未能孵出头颈部的囊虫)按常规制成染色玻片标本,取20个于光镜下观察形态,对小钩做计数和测量。另将若干孵育后囊虫经2.5%戊二醛前固定,0.2M Molloning缓冲液冲洗,1%锇酸后固定,梯度酒精脱水,临界点干燥,扫描电镜(SEM)观察其形态。肉眼及光镜所见:…     

羟基磷灰石柱层析纯化小鼠腹水中抗结肠癌单克隆抗体

 <正> 我们在Stanker工作的基础上研究了抗结肠癌单克隆抗体H b3(IgM)Ga_3(Ig G_2a)的分离纯化,均获得较满意的结果。 材料与方法 HAp层析柱:HAp经0.01mol/L磷酸缓冲液(PB)pH6.8,含0.02％NaN_3浸泡过夜,用自然沉降法装柱,经上述PB液平衡后,即可进行层析。 小鼠腹水予处理:取小鼠腹水数毫升,用水稀释(1:5),在4℃下,经4000r/min离心机离心30分钟,弃去沉淀物。     

脂多糖对镉致河南华溪蟹免疫因子毒性的调节作用

目的:探讨免疫刺激剂脂多糖对镉处理后的河南华溪蟹是否有调节作用,以及脂多糖的作用机理。方法:设置5个脂多糖处理组(0.5、1.0、2.0、4.0和8.0μg/m L)和1个对照组(无菌生理盐水),分别刺激溪蟹12、24和48 h后,根据机体中血淋巴细胞总数和溶菌酶活力的变化,选取脂多糖最佳作用条件;镉暴露溪蟹96 h后,按最佳作用条件注射脂多糖(8.0μg/m L,24 h),测定血清中溶菌酶和酸性磷酸酶活力。结果:脂多糖刺激溪蟹后,血细胞数量和溶菌酶活力的变化表现出时间-剂量效应;镉暴露后注射脂多糖,溪蟹血清中溶菌酶活力无显著变化,而酸性磷酸酶活力与镉单独作用组相比显著升高。结论:脂多糖对河南华溪蟹免疫系统有良好的刺激作用,该研究为探讨脂多糖对甲壳动物刺激作用机理提供了理论基础,同时也可为脂多糖作为免疫增强剂在水产养殖中的研究应用提供参考。     

从小白鼠血液制备染色体的快速方法

每只小白鼠注射(I.P)0.1毫升秋水仙素(0.6毫升/毫升),四小时后杀死。从心脏取血,用肝素抗凝。取10滴左右血液置于一刻度离心管中,管内预先装好3—5毫升0.7％柠檬酸钠,放在37℃下温浴,摇匀后加一滴稳定的玻璃酸酶(150N.F.单位/毫升)。在37℃下温浴20分钟。用温浴的最后五分钟配制3∶1甲醇-醋酸固定液。温浴完毕时加2滴固定剂并温和地摇匀。600转离心机离心5分钟弃去上清液(留1毫升左右)再加3毫升固定剂,加塞后放置冰箱30分钟。在600转离心机离心5分钟弃去上清液(留1毫升),再加预冷固定液3毫升,用吸管来回搅匀。离心弃去上清液。再加2毫升冷固定剂,并在冰箱中过夜。第二天离心后弃去上清液,用甲醇洗,吸去甲醇,取一     

盐生杜氏藻(Dunaliella salina)可溶性蛋白毛细管电泳分离

目的建立毛细管电泳技术分离分析盐生杜氏藻(Dunaliella salina)可溶性蛋白的方法.方法河北永年石英毛细管柱57cm i.d×75μm o.d;有效长度50cm.运行缓冲液50 mmol*L-1 pH7.2磷酸缓冲液;分离电压20KV;运行温度20°C;分离时间20min;检测波长280nm;压力进样,5MPa×10s.结果所建立的毛细管分离分析方法将10多种盐生杜氏藻可溶性蛋白有效分离,迁移时间及峰高重现性分别小于2%及10%.结论所建立的毛细管分离分析方法简单、方便价廉和快速.