微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)银染法的改良

为了筛选和检测绵羊种群中具有较好表现的微卫星多态性,采用Touch-down PCR方法扩增绵羊基因组上的微卫星DNA序列后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,采用改良的银染法对微卫星位点进行多态性检测,染色结果与常规银染法相比,该方法具有灵敏度高、背景浅、污染小、条带清晰等突出特点,能有效地控制染色背景,显著提高检测分辨率,整个染色过程所需时间短,具有广泛的推广价值。     

体细胞克隆山羊微卫星DNA分析

用10对山羊微卫星DNA多态性引物对2只体细胞克隆济宁青山羊、青山羊供体细胞、受体奶山羊母羊以及具有亲缘关系的3只对照济宁青山羊进行微卫星DNA分析.结果表明有5对山羊微卫星DNA多态性引物,即SR-CRSP1, SR-CRSP5, SR-CRSP6, SR-CRSP7和SR-CRSP24,扩增产物有明显的多态性.扩增产物经过6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染,结果2只体细胞克隆山羊的微卫星DNA指纹与供体细胞完全相同,而且不同于其受体母亲也不同于其他所有同品种不同个体的对照青山羊.证明体细胞克隆山羊基因组来源于供体细胞.     

聚丙烯酰胺凝胶快速、高效银染方法的建立

摘要: 聚丙烯酰胺凝胶电泳目前已经广泛应用在SSR标记、SNP标记以及遗传图谱的构建等过程中, 但是一直以来凝胶银染方法由于染色时间长、染色步骤繁琐, 使得对于开展大批量的实验研究极为不利。文章通过对常规方法的改良, 建立了一个银染步骤只需要10 min, 整个染胶过程只需约20 min的快速、高效的银染方法。     

微卫星PCR产物变性与非变性PAGE-银染检测方法的比较

用鸡的微卫星引物对6个中国地方鸡种的两个微卫星位点进行PCR扩增。将扩增产物在变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）上进行电泳,经银染,表明微卫星产物在二者上的电泳结果有明显的差异。在非变性聚丙烯酰胺凝胶中,表现为有较多的非特异带,而在变性胶中微卫星扩增产物条带清晰,易于鉴定。Abstract：The genomic DNAs from six chicken breeds in China were amplified using two microsatellite primers. The PCR products were detected by non-denatured and denatured PAGE gels respectively, and the gels were dyed by silver. There were distinct differences between the two kinds of gel. In non-denatured gels. There were many nonspecific bands while clear purposed bands were showed in denatured gels.     

随机扩增杂交微卫星方法在大仓鼠种群遗传多态性研究中的应用

随机扩增杂交微卫星(Random amplified hybridization microsatellites,RAHM)是一种复合RAPD扩增和寡核苷酸扫描的方法。该方法能够从RAPD产物凝胶上获得更多的信息,具有分析方法快速,高敏感性,能检测到高水平的多态性等优点。RAHM方法通过对RAPD扩增的DNA片段进行微卫星杂交来替代限制性内切酶对基因组DNA的消化,有助于揭示微卫星基因组克隆,进行微卫星引物的筛选。本文采用随机扩增杂交微卫星方法来检测小型哺乳动物大仓鼠(Techerskia triton)种群的遗传多态性,结果表明RAHM方法能够检测到大仓鼠种群中较高的多态性以及种群间的差异,这些条带模式可能代表真核基因组中另一种多态性标记的来源,可用于检测小型哺乳动物种群的遗传多态性。     

微卫星的构成及其检测技术

微卫星标记是近几年来发展起来的一种新型分子标记,由于其具有检测方便,多态性高、共显性遗传、符合孟德尔遗传定律、重复性好等优点,所以在动物遗传育种中作为标记辅助选择的手段日益得到广泛关注。试就微卫星的构成及特点、以及检测技术及应用作一综述,旨在为该技术的推广应用提供理论依据。     

改良聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA

本文介绍了应用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA的改进方法。与以往方法相比,本方法从配制凝胶储备液,无需封口的水平灌胶,适当地提高电泳的电压梯度,采用改良银染法检测,省却凝胶固定,银染法DNA的纯化方法,及溴化乙锭染色法的操作等一系列改进措施,使聚丙烯酰胺凝胶电泳检测DNA的操作得到简化,更便捷,并减小了对人与环境的毒害作用。     

微卫星位点获取方法的研究进展

微卫星标记(simple sequence repeat,SSR)是进行分子遗传学研究的一种有效手段,并以其多态性高、信息含量大、保守性等特点成为最受人们欢迎的分子标记之一.但微卫星标记具有种族特异性,必须采用特异引物进行PCR检测,因而存在引物开发的问题.本文就筛选基因组文库法、微卫星富集法、数据库查找法、近缘物种筛选法、TOMMI法和FI-ASCO法等具有代表性的微卫星标记开发策略进行了综述,旨在为分子生态学研究过程中微卫星位点筛选方法的选择提供参考.     

PCR-SSCP分析方法的优化

目的：优化PCR-SSCP分析方法。方法：选择野生型Kir2．3质粒和突变型Kir2．3（2123L）质粒为样本,其PCR结果的鉴定采用2％的琼脂糖凝胶EB显色,SSCP分析采用12％的非变性聚丙烯酰胺凝胶DNA银染显色。PCR产物变性比较了三种方法：即碱变性、SDS变性、直接变性。聚丙烯酰胺凝胶根据丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺及甘油的比例设计了六个实验组,每组采用两种条件电泳,即：30mA恒流快速电泳和100V恒流过夜电泳。结果：选择直接变性的PCR产物作为变性上样液,并确定了三种凝胶配及该条件下适用的电泳条件。即：丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为49比1,凝胶中含1％甘油,4℃,500V高压电泳3min接着30mA恒流快速电泳3h;丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为49比1,凝胶中含5％甘油,4℃,500V高压电泳3min接着30mA恒流快速电泳3h;丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29比1,凝胶中不合甘油,4℃,500V高压电泳3min接着100V恒流过夜电泳12h。结论：条件优化的PCR-SSCP是一种筛查基因突变简便、有效的实验方法。     

小鼠39个微卫星的PCR条件及其运用

目的探索小鼠基因组39个微卫星的PCR条件,评价微卫星在小鼠遗传检测中的运用.方法采用梯度法探索39个微卫星的PCR条件;选择本中心不同来源及引种时间的C57BL/6、BALB/c、DBA/2J、CBA/N、FVB/NJ、ICR共6个品系(8个组)小鼠,每组采用10只个体的鼠尾,提取DNA并混合成DNA池,用39个微卫星扩增后电泳观察、比较种系纯度.结果小鼠微卫星的PCR条件差异较大,Mg2+浓度多数在1.5 mmol/L左右,退火温度多数在59℃左右.在6个品系小鼠的39个微卫星位点中,C57BL/6、BALB/c、DBA/2J都是纯合的; 其余品系有1～3个杂合位点. BALB/c在D5Mitl68、D8Mit320、D13Mit262三个位点,DBA/2J在D14Mit205位点与数据库记录有差异.结论本研究为小鼠39个微卫星提供了候选的PCR条件,并对6个品系小鼠的微卫星概貌及微卫星的运用价值进行了探讨.