激光扫描共聚焦显微镜在医学研究中的应用

激光扫描共聚焦显微镜（Confocal laser scanning microscope,CLSM）具有高分辨率、高灵敏度、三维重建、动态分析等优点,使图像更为精确清晰和数字化。该仪器现已广泛应用于细胞生物学、生理学、病理学、遗传学和药理学等研究领域中。本文简述了激光扫描共聚焦显微镜的结构、工作原理并归纳了其在医学各领域研究中的应用。     

激光扫描共聚焦显微镜系统及其在细胞生物学中的应用

激光扫描共聚焦显微镜是近十年发展起来的医学图象分析仪器,现已广泛应用于荧光定量测量、共焦图象分析、三维图象重建、活细胞动力学参数监测和胞间通讯研究等方面。其性能为普通光学显微镜质的飞跃,是电子显微镜的一个补充。本文以美国Ｍｅｒｉｄｉａｎ公司的ＡＣＡＳＵＬＴＩＭＡ３１２为例简要介绍了激光扫描共聚焦显微镜系统的结构、功能和生物学应用前景。     

利用激光扫描共聚焦显微镜研究视皮层脑片长时程增强过程中？…

本文使用１５－２０天龄幼年大鼠视皮层脑片的标本,在通氧状态下,用荧光探针ＡＯ染色,激光扫描共聚焦显微镜对全脑片不同层面进行共聚焦断层扫描,沿纵轴每２０μｍ扫一次,共扫描１６次。再利用总值方式的投影算法对其三维重建,分析幼年大鼠视皮层脑片长时程增强过程中核酸的变化。     

激光扫描共聚焦技术分析中药8892对U_（14）癌细胞的作用

我们证明中药８８９２对小鼠生存率和抑瘤率有明显效果的同时,并应用激光扫描共聚焦显微镜观察了中药８８９２对纯小鼠Ｕ１４癌细胞的作用,实验结果证明中药８８９２能直接破坏癌细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ,抑制癌细胞增殖,这为中药抗癌作用的临床应用提供有力的依据。本文还讨论了激光共聚焦显微镜（ＣＬＳＭ）的功能,细胞断层抄描光切片（细胞ＣＴ）,三维重建,立体旋转等等,这在普通显微镜下是见不到的。因此应用这种新技术会促进中医药研究的发展。     

激光共聚焦显微技术在植物学中的应用

激光扫描共聚焦显微镜（Ｌａ－ｓｅｒ　Ｓｃａｎｎｉｎｇ　Ｃｏｎｆｏｃａｌ　Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ,ＬＳＣＭ）是近年来发展起来的一种新型高精度显微镜,它在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装置,使用可激发的荧光探针对样品进行标记,利用计算机进行图像采集处理,从而可得到样品内部细微结构的荧光图像。目前此种显微技术不仅用于观察经固定的各种细胞和组织结构,而且还可对活细胞的形态、结构,离子实时动态等进行观察和定量荧光测定,以及定量图像分析。另外,该仪器还具备样品断层扫描,三维图像重建的独特功能。因此,共聚焦…     

激光扫描共聚焦显微镜活细胞成像方法优化

激光扫描共聚焦显微镜可用于固定样品和活细胞样品的成像,近年来得到了广泛的应用。本文介绍了激光扫描共聚焦显微镜的基本原理及其在活细胞成像中的应用,并以FV10-ASW Viewer4.2软件为例,从扫描速度、分辨率、降噪、光电倍增调节、多参数协同优化、成像质量评估、图像后期处理等多个角度总结了激光扫描共聚焦活细胞成像系统的方法优化和推荐参数设置。本文的工作可以为活细胞实验提供一定参考。     

利用激光扫描共聚焦显微镜研究视皮层脑片长时程增强过程中核酸的变化

本文使用 1 5— 2 0天龄幼年大鼠视皮层脑片的标本 ,在通氧状态下 ,用荧光探针 AO染色 ,激光扫描共聚焦显微镜对全脑片不同层面进行共聚焦断层扫描 ,沿纵轴每 2 0μm扫一次 ,共扫描 1 6次。再利用总值方式的投影算法对其三维重建 ,分析幼年大鼠视皮层脑片长时程增强过程中核酸的变化。     

共聚焦显微技术简介

共聚焦显微镜在生物学研究中得到广泛应用,共聚焦显微技术按照显微镜构造原理的不同分成激光扫描共聚焦和数字共聚焦显微技术两种,共聚焦技术具有成像清晰,获得三维图像,进行多标记观察,活细胞内动态生理反应的实时观察记录,定性定量分析等优势,与共聚焦显微技术相关的技术有荧光染料的选择,荧光指示剂装载以及图像数据处理等。     

激光共聚焦显微镜与光学显微镜之比较

激光扫描共聚焦显微镜在活细胞的动态检测、光学切片和三维结构重建等方面较光学显微镜有质的飞跃。本文对激光扫描共聚焦显微镜和光学显微镜进行了比较和讨论,并简单介绍多光子激光扫描显微镜。     

用激光扫描共聚焦显微镜观察雪松花粉和花粉管

为更直观地观察和显示花粉和花粉管中细胞结构及其细胞核的状态与行为。雪松花粉和花粉管经卡诺液固定,分别以埃氏苏木精、曙红、Hoechst 33243单染和曙红-Hoechst 33342双染后,用冬青油整体透明,在激光扫描共聚焦显微镜下观察。4种染色法观察效果不同;以曙红-Hoechst 33342双染的样品观察效果最佳,在紫外光激发下清晰地显示出细胞核,在488 nm激光激发下不仅能清晰看到花粉和花粉管壁结构,且能分辨管细胞、柄细胞及体细胞的结构特点和空间位置关系。建立了一种快速简便的适于在激光扫描共聚焦显微镜下观察花粉和花粉管中成员细胞结构及其细胞核的状态、行为的制片技术;激光扫描共聚焦显微镜具有独特的共轭成像装置、连续光学扫描、图像三维重组和多通道检测等功能,极好地展示了雪松花粉和花粉管的结构特点,相比于传统的光学显微镜和荧光显微镜,其观察到的图像更清晰、更直观、更具立体感。     

Principles and practices of laser scanning confocal microscopy

The laser scanning confocal microscope (LSCM) is an essential tool for many biomedical imaging applications at the level of the light microscope. The basic principles of confocal microscopy and the evolution of the LSCM into today's sophisticated instruments are outlined. The major imaging modes of the LSCM are introduced including single optical sections, multiple wavelength images, three-dimensional reconstructions, and living cell and tissue sequences. Practical aspects of specimen preparation, image collection, and image presentation are included along with a primer on troubleshooting the LSCM for the novice.     

激光共聚焦显微镜在肿瘤免疫治疗检测中的应用

目的:通过激光共聚焦显微镜对肿瘤生物治疗后患者的外周血淋巴细胞进行亚群计数,为生物治疗后外周血淋巴细胞无法分群的肿瘤患者提供新的监测免疫功能状态的方法。方法:收集35例肿瘤生物治疗后患者的外周血标本,通过激光共聚焦显微镜和流式细胞仪两种方法分别对患者外周血淋巴细胞亚群进行分类计数。结果:流式细胞仪和激光共聚焦显微镜同时分类计数的患者外周血细胞标本30例,两种方法在检测CD3、CD3~+/CD4~+、CD3~+/CD8~+、CD3-/CD16~+56~+、CD3-/CD19~+细胞时均无统计学差异(P值0.05);5例流式细胞仪无法将患者外周血淋巴细胞分群的样本,通过激光共聚焦显微镜可以进行分类计数。结论:激光共聚焦显微镜亦可以用于外周血淋巴细胞的分类计数。     

激光扫描共聚焦显微镜在花粉研究中的应用

激光扫描共聚焦显微镜（Laser scanning confocal microscope,LSCM）是普通光学显微镜、激光、计算机及其相应的软件技术结合的产物,能实现连续光学切片和生物三维结构重组及动态分析.作为一种先进的技术手段,LSCM技术已经为花粉生物学的研究提供了有价值的新资料,大大地推动了植物生殖生物学的发展.本文综述了LSCM技术在花粉粒形态（形状、大小及三维重建）、花粉的内部结构（如细胞骨架）、花粉的遗传学、花粉的发育、花粉的萌发、花粉自发荧光特性、孢粉研究等方面中的应用,并指出了LSCM的不足之处,最后提出了LSCM技术在花粉研究中的应用展望.未来LSCM技术应该与多光子技术、活细胞工作站技术相结合使用,才能更准确地进行花粉动态研究的实时监测.     

用激光共聚焦显微镜鉴别可疑笔迹与印章

本文采用激光共聚焦显微镜鉴别可疑笔迹和印章及其它的文件。法医在鉴别可疑文件时通常都是凭经验和用普通光学显微镜,找出其中的一些物理特征。但还是有许多文件的笔迹顺序无法确定,尤其是墨水写的笔迹,为解决法医的这一问题,我们用激光共聚焦显微镜鉴别了72例不同铅笔和圆珠笔写的肉眼难于鉴别的交叉笔顺和其他的一些文字文件。在激光共激光共聚焦显微镜下大多数笔迹和印章都能发出荧光,因此很容易鉴别其笔顺和印章的特征,必要时还可以进行笔顺的三维图象构建,以帮助鉴别。结论：激光共聚焦显微镜可以更准确地鉴别可疑笔迹和印章。印章和笔迹的交叉也很容易分辨出来。     

激光共聚焦扫描显微镜和透射电镜观察大鼠纹状体内谷氨酸能突触连接的对比观察

目的 探讨使用激光共聚焦扫描显微镜 (Laser scanning confocal microscope,LSCM)观察大鼠纹状体内谷氨酸能突触连接的方法的可行性.方法 12只正常大鼠分为两组,6只大鼠进行纹状体中等棘刺神经元的CM-DiI 单细胞标记,然后Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporter 1,VGluT1 )免疫荧光标记,LSCM层扫后三维重建,观察VGluT1阳性位点在中等棘刺神经元树突上的分布.另外6只大鼠用TEM观察不对称性突触在纹状体神经元树突上的分布.对两种方法的结果进行比较.结果 用LSCM 和TEM方法观察到的纹状体神经元上谷氨酸能突触连接分布情况一致,没有统计学差异.但LSCM更具优越性的是,可以对图像进行三维重构,从而有利于对神经元之间突触连接的空间分布观察和定量分析.结论 神经细胞荧光标记技术结合LSCM观察是考察纹状体神经元上谷氨酸能突触连接的有效方法.     

The Immunofluorescent Localization of Subventral Pharyngeal Gland Epitopes of Preparasitic Juveniles of Heterodera glycines Using Laser Scanning Confocal Microscopy

Laser scanning confocal microscopy (LSCM) was used to localize the reactivity of a monoclonal antibody (Sv2) that binds to the subventral pharyngeal glands of preparasitic juveniles of Heterodera glycines. The greater resolution, magnification, and image analysis of LSCM compared with conventional epifluorescent microscopy enabled Sv2 binding to be localized much more precisely to the periphery of the secretory granules. A linear increase of about 55% in fluorescent intensity was found over a 23-μm length of subventral pharyngeal gland just distal to the terminal ampullae. LSCM is a rapid and effective technique for precise immunolocalization of epitopes.     

激光扫描共聚焦显微镜在植物学中的应用

激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)是普通光学显微镜与激光和计算机及其相应的软件技术组合的产物,实现了连续光学切片,能在亚细胞水平观察细胞骨架的动态变化、细胞内特异蛋白、钙等离子的变化,并结合电生理等技术观察细胞生理活动与细胞形态及运动变化的相互关系。并广泛应用于生物三维结构重组及动态分析。本文综述了应用激光扫描共聚焦显微镜技术在植物细胞学、植物发育、组织化学以及基因表达、检测等领域取得的进展。     

利用激光扫描共聚焦显微镜的肿瘤血管在体成像研究

传统的观察血管的方法需将组织制成切片,然后通过光学显微镜进行观察。显示的只是血管的某一片段而无法观察到血管的全貌。应用激光扫描共聚焦显微镜,可对活体动物血管进行断层成像,从而再现血管的结构。本方法为对肿瘤等病变组织血管进行研究提供了一种新的检测手段。