合成芪类化合物抑制肿瘤细胞增殖并诱导Bel-7402细胞凋亡

芪类化合物在癌的起始、促进和发展阶段均有化学抗癌活性,对其化学结构进行改造并进行作用机制研究,提高其抗肿瘤活性,有可能发现新的抗肿瘤药物.在合成23种芪类化合物的基础上,以MTT法测定其对9种肿瘤细胞系的抑制作用,发现多种化合物对SMMC-7721、BGC-823、HepG2、Bel-7402、MCF-7、SGC-7901细胞系具有较明显的抑制活性.以细胞周期分析、Hoechst 33258荧光染色及线粒体膜电位变化进行检测,发现经抑制作用较强的化合物HCQ-10处理后的 Bel-7402细胞发生G₂/M期阻滞,并继发细胞凋亡.实验结果说明,合成芪类化合物对SMMC-7721、BGC-823、HepG2、Bel-7402、MCF-7、SGC-7901细胞具有较为明显的增殖抑制作用,其抑制Bel 7402细胞增殖的作用机制为阻滞细胞于G₂/M期并诱导细胞继发凋亡.     

rhddADAM15抑制肝癌细胞Bel-7402增殖的作用研究

ADAMl5属于跨膜蛋白ADAM家族中的一员,在乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌等多种实体瘤中均发现其表达量提高。ADAMl5在降解细胞外基质、介导细胞的黏附、细胞间信号转导及在肿瘤发展进程中起到重要作用。因其去整合素区域含有RGD序列,ADAMl5可与多种整合素相互作用。在前期工作中,实验组利用大肠杆菌表达系统表达了重组人ADAMl5去整合素区域蛋白,记作rhddADAMl5。该研究将进一步针对rhddADAMl5抑制肝癌细胞Bel-7402增殖的机理进行分析及探讨。SRB法显示,rhddADAMl5可抑制Bel-7402细胞增殖并呈剂量依赖性,IC50为1．14gmol／L;利用DAPI核染发现,rhddADAMl5可显著诱导Bel-7402细胞凋亡;流式细胞仪分析发现,rhddAD—AMl5浓度为6gmol／L时,（87．44±7．25）％的细胞发生凋亡;PI单染分析细胞周期表明,rhddADAMl5作用后,部分Bel-7402细胞周期被阻滞于S期及G2／M期,并呈剂量依赖性,4gmol／LrhddADAMl5处理后G0／Gl期含量下降约14％;Westernblot分析显示,rhddADAMl5可下调Bel-7402细胞周期蛋白CDC26的表达,抑制CDC2-TyrM的去磷酸化,引起G2／M期的阻滞。     

MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制研究

MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO) 是一种蛋白酶体抑制剂,它可逆地抑制蛋白酶体活性,从而抑制泛素-蛋白酶体通路所介导的蛋白质降解,诱导细胞凋亡．实验研究MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制．采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、透射电子显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测、AnnexinⅤ/PI流式细胞术、Western blot分别检测MG132 对Bel-7404细胞的形态学变化、细胞内质网压力变化、自噬泡形成、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡水平、凋亡及自噬信号途径中相关蛋白质表达的影响．结果显示,MG132能明显抑制Bel-7404细胞生长．通过增加内质网压力激活Caspase-12,也可通过线粒体途径调节Bcl-2/Bax水平,促进细胞色素c的释放,两者皆可激活下游效应Caspase-3,剪切PARP,诱导细胞凋亡．同时,MG132可诱导Beclin 1 和LC3B的上调,促使Bel-7404细胞发生自噬,可在透射电镜下观察到自噬泡形成．上述结果表明,MG132作用Bel-7404细胞涉及两类细胞程序性死亡途径：细胞凋亡和自噬．     

黄芩甙对肝癌细胞BEL-7402形态学的影响

目的观察黄芩甙对肝癌细胞BEL-7402凋亡的影响,同时观察对肝癌细胞形态及超微结构、线粒体超微结构、线粒体膜电位和细胞内Ca^2＋的影响,探讨线粒体损伤在黄芩甙诱导肝癌细胞凋亡中的作用及可能的机制。方法应用细胞培养技术培养肝癌细胞BEL-7402,光镜、倒置显微镜、扫描电镜、透射电镜观察细胞形态及超微结构的变化尤其是线粒体的变化,应用流式细胞仪检测细胞凋亡百分率及线粒体膜电位、细胞内Ca^2＋的改变,免疫组化法检测细胞Bcl-2、Pax蛋白表达。结果黄芩甙诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡呈剂量依赖关系,细胞形态、超微结构及线粒体超微结构出现明显改变,降低肝癌细胞线粒体膜电位,使细胞内Ca^2＋增加,细胞Pax表达增加,广泛分布于胞核和胞质中,Bcl-2表达减少。结论黄芩甙诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡,线粒体损伤在黄芩甙诱导肝癌细胞凋亡中起重要作用,其机制可能为抑制肝癌细胞Bcl-2蛋白表达,促进Pax蛋白表达及细胞内Ca^2＋增加,激发线粒体膜通透性转运孔开放,线粒体跨膜电位降低,使肝癌细胞凋亡。     

枸杞子水提取物对Bel-7402人肝癌细胞增殖的影响

目的:探讨枸杞水提取物对Bel-7402人肝癌细胞增殖的影响。方法:用RPMI-1640完全培养液温育Bel-7402人肝癌细胞,分为空白对照组和药物组,空白对照组给予培养液处理,药物组分为低剂量组(100μg/m L)和高剂量组(200μg/mL),实验过程加入相应剂量的枸杞子水提取物。于倒置显微镜下观察三组细胞形态学变化,采用流式细胞仪观察细胞的凋亡状况及活性氧簇(ROS)含量,采用MTT法检测细胞增殖的抑制作用,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Bel-7402细胞中bax m RNA和bcl-2 m RNA的表达。结果:在倒置显微镜下观察,枸杞子水提取物使Bel-7402细胞生长受到抑制,表现为细胞贴壁减少、脱落增加,脱落的细胞浮悬于培养液中,呈圆形,体积缩小。枸杞子水提取物可促进Bel-7402细胞凋亡,药物组Bel-7402细胞的凋亡率比空白对照组明显增加(P0.01),G0/G1期细胞比率减少(P0.05),G2/M2期细胞比率增加(P0.05),且ROS含量增加(P0.05)。枸杞子水提取物对Bel-7402细胞的生长有明显抑制作用,且抑制率随着培养时间的延长而增加,且高剂量组在96小时时抑制率最高。药物组Bel-7402细胞中bax基因灰度比值显著高于空白对照组(P0.01),bcl-2基因灰度比值显著低于空白对照组(P0.01)。结论:枸杞子水提取物可抑制Bel-7402人肝癌细胞的增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡,增加ROS含量,促进bax基因表达,抑制bcl-2基因表达,该实验结果可为枸杞子抗肝癌作用提供实验依据。     

ASPP2增强结肠癌HCT116细胞对奥沙利铂的化疗敏感性

为研究ASPP2对奥沙利铂诱导的结肠癌细胞系HCT116 p53+/+(野生型)凋亡及周期的影响.利用ASPP2（rAd-ASPP2）及p53腺病毒（rAd-p53）感染HCT116 p53+/+细胞,经奥沙利铂50 μmol/L诱导细胞凋亡及周期改变.Western印迹检测ASPP2及p53的表达水平;MTT法检测ASPP2腺病毒对奥沙利铂诱导的HCT116细胞活性的影响;Calcein/PI吸收试验检测细胞凋亡情况;流式细胞术分析细胞周期分布. 结果显示,ASPP2、p53共同过表达,或者ASPP2单独过表达均能增强奥沙利铂诱导的HCT116 p53+/+细胞增殖抑制,以及S期抑制并伴有细胞凋亡水平的升高;而无奥沙利铂诱导时,ASPP2对HCT116 p53+/+细胞的活性、细胞周期及细胞凋亡水平的影响无统计学意义. 上述结果表明,ASPP2能够增强奥沙利铂诱导HCT116 p53+/+细胞的增殖抑制、细胞周期抑制和细胞凋亡.     

PHA-767491联合TRAIL抑制肝癌细胞Bel-7404增殖

将小分子抗癌药物PHA-767491和携带TRAIL基因的非复制型腺病毒(Ad-TRAIL)共同作用于肝癌细胞Bel-7404,探讨PHA-767491联合TRAIL蛋白对肝癌细胞增殖的协同抑制作用及其作用机理. MTT法检测细胞存活率,Hoechst 33342荧光检测细胞凋亡现象和流式细胞仪检测细胞凋亡水平. 结果表明,PHA-767491联合Ad-TRAIL抑制Bel-7404细胞增殖的能力显著优于单一用药. Western印迹进一步分析蛋白表达水平显示,PHA-767491可以通过下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Xiap的表达,从而显著增强TRAIL蛋白诱导Bel-7404细胞凋亡的能力;PHA-767491联合Ad-TRAIL处理Bel-7404细胞后,不仅Bel-7404细胞凋亡水平显著增加,并且伴随着PARP和Caspase3的大量剪切. 本研究证实, PHA-767491和TRAIL的联合使用对抑制肝癌细胞Bel-7404增殖表现出了显著的协同效应,为今后癌症药物的联合治疗提供了新的思路.     

蒽贝素(Embelin)通过阻断NF-κB信号通路抑制肝癌细胞Bel-7404生长的研究

蒽贝素(Embelin)是一种X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein, XIAP)的小分子抑制剂,可以抑制XIAP的生成和活性,从而解除XIAP的抗凋亡作用,使凋亡顺利进行．研究了Embelin抑制肝癌细胞Bel-7404增殖的机制．采用不同浓度梯度,通过荧光显微镜、Hochest33342染色、MTT检测、AnnexinⅤ/PI流式细胞术和Western blot分别检测Embelin对Bel-7404细胞的形态学变化、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡水平、凋亡信号转导相关蛋白表达的影响．结果显示,Embelin能明显抑制Bel-7404细胞增殖,并通过激活caspase通路以及阻断NF-κB信号通路诱导Bel-7404细胞凋亡,为进一步利用Embelin进行肝癌治疗的研究打下一定的基础．