阿魏酸在缺氧条件下促进人脐静脉内皮细胞血管形成的实验研究

目的:研究阿魏酸(ferulic acid,FA)在缺氧条件下对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖、迁移和管腔样结构形成的影响。方法:原代培养人脐静脉内皮细胞,在缺氧实验条件下,细胞被分为7组,即1个对照组和6个实验组。对照组采用1%酒精处理,实验组用不同浓度(1×10~(-8)、1×10~(-7)、1×10~(-6)、1×10~(-5)、1×10~(-4)及1×10~(-3) mol/L)的阿魏酸处理。分别采用MTS法、划痕法、Matrigel法分析不同浓度阿魏酸处理对人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移和管腔样结构形成的影响。结果:缺氧条件下,浓度为1×10~(-6)~1×10~(-4)mol/L的阿魏酸处理能明显促进HUVECs的增殖(P0.05),以1×10~(-5) mol/L处理的效果最好(P0.01);与对照组相比,1×10~(-6)mol/L(P0.05)、1×10~(-5) mol/L(P0.01)及1×10~(-4) mol/L(P0.01)阿魏酸处理均能明显促进HUVECs横向迁移,以1×10~(-5) mol/L处理迁移的细胞数量最多;1×10~(-8)~1×10~(-4) mol/L阿魏酸处理能不同程度地促进HUVECs管腔样结构的形成,以1×10~(-5) mol/L处理形成管腔样结构的数量最多(P0.01)。结论:阿魏酸在缺氧条件下能促进人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移和管腔样结构形成。     

大黄蒽醌衍生物对酪氨酸酶的抑制作用

大黄素对酪氨酸酶有显著的竞争性抑制作用,K_i值为1.51×10~(-4)mol,50％抑制的药物浓度为36.6μg/ml;大黄酸的抑制作用较弱,芦荟大黄素几乎无抑制作用。氯化铜(3.3×10~(-7)mol/L)、半胱氨酸(3.3×10~(-7)mol/L)和牛血清白蛋白(1.0mg/ml)对大黄素抑制酪氨酸酶有较强的拮抗作用,恢复率分别为60.0％、45.7％和61.1％。大黄素能与牛血清白蛋白非特异性结合形成复合物,引起吸收光谱红移55毫微米。大黄蒽醌衍生物对酪氨酸酶的抑制作用可能是大黄抗黑色素瘤的作用机制之一。     

封面植物介绍--印度蛇菰

印度蛇菰[Balanophora indica(Arn.)Griff.]隶属于蛇菰科蛇菰属,是一种寄生植物。根状茎黄橙色到棕色,表面粗糙并具有星状疣;分枝近球形,直径0.5~5.6 cm,很少圆筒状。雄花序红色,卵球形椭圆形,(5~10)cm×(2~6)cm。雄花:略带红色,辐射对称,每朵被一个粗壮的截形苞片包围。花被裂片4~6,椭圆形披针形,(3~7)mm×(1~2.5)mm,聚药雄蕊椭圆形卵形,长2.5~5 mm,具柄;花药4或5,U形,纵向开裂。雌花序球状,直径3~5 cm。附属体棍棒状,长约2 mm,顶端1/2~1/3椭圆状倒卵球形。雌花生于花序基部和主轴上。花期10~12月。     

几种抑制剂对钾和IAA诱导的离体黄瓜子叶不定根形成的影响

应用离体黄瓜(Cucumis sativus L.)子叶生根试法测定了几种抑制剂对钾和IAA诱导生根的影响。实验结果表明:7×10~(-4)～7×10~(-1)mmol/L的5-氟尿嘧啶和3.5×10~(-4)～1.05×10~(-2)mmoL/L的环已亚胺明显抑制钾和IAA诱导的离体黄瓜子叶的生根;0.1～1.0mmol/L的钒酸钠显著抑制钾和IAA诱导的离体黄瓜子叶的生根;2×10~(-4)～2×10~(-1)mmol/L的2,3,5-三碘苯甲酸也明显抑制钾和IAA诱导的离体黄瓜子叶的生根。钾诱导的生根与IAA诱导的生根密切相关,有可能钾对生根的促进作用是通过影响内源IAA的水平而实现的。     

沙门氏菌荧光实时定量PCR检测试剂的研制及应用

荧光实时定量PCR技术是近年来广泛应用于沙门氏菌快速检测的现代方法之一,本研究建立了检测沙门氏菌快速、敏感、特异以及准确定量的FQ-PCR方法。采用沙门氏菌fimY基因序列,设计特异引物和探针,通过对Taq酶、Mg2 和引物探针浓度等反应体系和条件的优化,然后进行特异性和适用性实验。最优化结果为:Taq酶用量2.5U;Mg2 浓度为3.75×10-3mol/L;引物浓度为0.65×10-6mol/L,探针浓度为0.30×10-6mol/L;循环条件为step1:95℃2min,step2:95℃5s,60℃40s,40cycles。结果表明该FQ-PCR检测试剂具有快速、简单、灵敏度高、特异性强和适用范围广等优点,可应用于食品卫生监管、商品检验检疫以及临床诊断等领域。     

接种密度对大鼠海马神经元产出量的影响

目的:观察不同接种密度对海马神经元细胞数量、形态和神经网络连接的影响,以获得成熟的海马神经元。方法:利用机械分离和胰酶消化的方法获得海马神经元,将所得神经元细胞接种于1×104/cm2、2×104/cm2、4×104/cm2、8×104/cm2,16×104/cm2等5个不同的密度组中,在倒置显微镜镜下观察神经元细胞生长状态,培养5~7 d时行微管相关蛋白2免疫荧光染色鉴定。结果:海马神经元细胞培养7 d后,倒置显微镜下可见在4×104/cm2、8×104/cm2的接种密度下成熟神经元的数量相较其他组差异明显,并且神经元形态典型,建立了丰富的网络连接。结论:适宜的接种密度能提高神经元的成熟数量,为神经元网络的形成和进一步的实验奠定了基础。     

大鼠、小鼠胰蛋白酶的分离纯化及动力学性质

采用STI-Sepharose 4B亲和层析的方法,从鼠新鲜胰脏中分离得到纯的胰蛋白酶。大鼠胰蛋白酶的比活为24 615BAEEU/mg蛋白,总活性回收率47％,小鼠胰蛋白酶的比活为32 768BAEEU/mg蛋白,总活性回收率55％。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,大鼠、小鼠胰蛋白酶均呈现单一蛋白带,两者的分子量都是24kD。用等电聚焦电泳测定,二者的等电点均为p19.5以上。对它们的动力学性质作了研究,大鼠胰蛋白酶的Km值为2.33×10~(-4)mol/L,K,值为0.92×10~(-5)mol/L,小鼠胰蛋白酶的Km值为5.60×10~(-4)mol/L,K:值为1.27×10~(-5)mol/L。     

水杨酸、萘乙酸和青霉素对大白桩菇、褐环粘盖牛肝菌及野蘑菇菌丝生长的影响

研究了水杨酸、萘乙酸及青霉素对大白桩菇、褐环粘盖牛肝菌及野蘑菇菌丝生长的影响。结果表明:对大白桩菇,水杨酸的致死浓度不大于1.94×10-4g/mL,培养基中浓度大于1.07×10-4g/mL抑制大白桩菇菌丝生长,浓度在(5.6×10-7)~(5.6×10-5)g/mL范围内能够促进菌丝生长,浓度小于5.6×10-8g/mL则没有明显影响。对褐环粘盖牛肝菌,培养基中水杨酸浓度大于4.76×10-6g/mL有抑制菌丝生长的作用,致死浓度不大于1.90×10-4g/mL。培养基中水杨酸浓度在大于5.6×10-6g/mL条件下对野蘑菇菌丝生长有一定的抑制作用。培养基中萘乙酸浓度在0.056 6~2.264 mg/L范围内对大白桩菇菌丝生长有一定的促进作用。培养基中萘乙酸浓度在0.95~4.75、0.056 6~1.132 mg/L范围内分别对褐环粘盖牛肝菌、野蘑菇菌丝生长基本无影响。培养基中青霉素浓度在(4.57×10-7)~(4.57×10-3)g/mL范围内对褐环粘盖牛肝菌菌丝生长具有抑制作用。培养基中青霉素浓度较低时对大白桩菇菌丝生长起促进作用,浓度大于1.88×10-3g/mL时对大白桩菇菌丝生长起抑制作用。而培养基中青霉素浓度在(1.88×10-7)~(1.88×10-3)g/mL范围内对野蘑菇菌丝生长无明显作用。     

前列腺素E在骨髓基质调节造血中的作用

小鼠骨髓细胞体外液体培养,形成基质细胞层(SL),能影响在其上培养的粒系祖细胞(CFU-GM)增殖。培养1周,SL明显抑制CFU-GM,约为对照的50％;2周,SL之抑制减弱,3周,SL则促进CFU-GM,约达对照140％。在CFU-GM培养体系中加入消炎痛(1×10~(-7)mol/L),却使1周SL上CFU-GM增加,2周SL上者增加更显著,第3周者则无明显改变。在CFU-GM培养体系中加入PGE_1(1×10~(-8)mol/L),各周SL上CFU-GM均大为减少。若同时再加消炎痛(2×10~(-7)mol/L),基质层上CFU-GM,1周者上升到约为对照42.6％,2周者则接近对照。而3周者则用消炎痛1×10~(-7)mol/L,即可使CFU-GM产率恢复。说明SL培养1周,能生成一定量PGE,2周时PGE生成减少,3周则几乎为零。故SL影响CFUGM,至少部分地以PGE为中介。     

固相二抗放射免疫法测定表皮生长因子

本实验制备的兔抗鼠表皮生长因子(EGF)抗血清放免效价为1:10~6,抗体的特异性强,亲和常数K为8.29×10~(-10)mol/L,最大结合容量B_(max)为2.61×10~(-10)mol/L。在固相二抗放射免疫法测定中,0.1～100ng的EGF可以竞争性抑制~(125)I-EGF的结合,Logit分析相关系数为-0.993,低限检出量为0.5ng/ml。本方法的回收率及变异系数分别为92％～102％和5.7％～7.0％。应用此方法测定小鼠颌下腺中EGF的含量约为0.66mg/g腺体。     

胶束增敏荧光法测定丹参中丹参酮ⅡA的含量研究

本文以十二烷基磺酸钠为胶束增敏试剂,在优化的实验条件下,对丹参中的丹参酮Ⅱ_A进行了定量测定,其线性范围在2×10~(-8)～8×10~(-7)g/ml,检测下限达1.2×10~(-9)g/ml,平均回收率为94.9％,测定市售丹参中丹参酮Ⅱ_A为0.539％,效果良好。     

封面植物介绍——印度蛇菰

印度蛇菰[Balanophora indica(Arn.)Griff.]隶属于蛇菰科蛇菰属,是一种寄生植物。根状茎黄橙色到棕色,表面粗糙并具有星状疣;分枝近球形,直径0.5~5.6 cm,很少圆筒状。雄花序红色,卵球形椭圆形,(5~10)cm×(2~6)cm。雄花:略带红色,辐射对称,每朵被一个粗壮的截形苞片包围。花被裂片4~6,椭圆形披针形,(3~7)mm×(1~2.5)mm,聚药雄蕊椭圆形卵形,长2.5~5 mm,具柄;花药4或5,U形,纵向开裂。雌花序球状,直径3~5 cm。花期10~12月。     

环孢素A抑制骨水泥颗粒诱导破骨细胞形成及功能

目的:探讨环孢素A对颗粒诱导破骨细胞形成及功能的影响。方法:取SD仔鼠双侧股骨和胫骨的骨髓,以不含血清的α-MEM培养液洗涤并收集骨髓细胞,再将细胞重悬于含10%胎牛血清及10~(-8)mol/L1,25-(OH)_2D_3的α-MEM培养液中,细胞计数后配成1.5×10~7/ml的细胞悬液,加入聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)颗粒和不同浓度的环孢素A(10~((-8)mol/L、10~(-7)mol/L、10~(-6) mol/L)于24孔培养板进行培养,并设置阳性对照组(只加PMMA颗粒)和阴性对照组(PMMA颗粒和CsA均不加),每组均有4孔放置骨磨片1片进行培养。培养2周后,行抗酒石酸(TRAP)染色检测破骨细胞形成;骨磨片行甲苯胺蓝染色观察。结果:PM- MA颗粒能够诱导大量TRAP染色阳性的破骨细胞形成,骨磨片有吸收陷窝形成;用环孢素A(10~(-8)mol/L、10~(-7)mol/L)和PMMA颗粒共同培养下TRAP染色阳性的破骨细胞形成数量明显减少,环孢素A浓度达到10~(-6)mol/L时无TRAP染色阳性的破骨细胞形成;环孢素A浓度在(10~(-8)mol/L、10~(-7)mol/L)时骨磨片有吸收陷窝形成,但少于阳性对照组,在10~(-6)mol/L时骨磨片则无吸收陷窝的形成。结论:环孢素A对PMMA颗粒诱导的破骨细胞的形成有着明显的抑制作用,且呈剂量依赖性。     

强啡肽抑制离体血管收缩效应的机制

用离体血管电场刺激收缩模型观察到强啡肽明显抑制电场刺激引起的兔耳中心动脉及兔肠系膜上动脉的收缩效应,且呈剂量反应关系,而对股动脉的电场刺激收缩反应无明显影响,强啡肽抑制血管收缩达50％时的用量(IC_(50)值)分别为8.5±1.2×10~(-6)mol/L、5.02±1.3×10~(-7)mol/L及>10~(-6)mol/L。 用药物分析法看到,酚妥拉明(10~(-6)mol/L)可取消电场刺激及去甲肾上腺素引起的血管收缩作用,而强啡肽仅抑制电场刺激致血管收缩作用。 用HPLC法测定孵育液中去甲肾上腺素的含量变化时看到,应用强啡肽(5×10~(-7)mol/L)后孵育液中去甲肾上腺素的含量从对照组的340.56±73.13pg/ml下降至67.91±10.26pg/ml,两组差别有极显著意义(P<0.01)。纳洛酮(10~(-6)mol/L)可完全拮抗强啡肽的这一抑制效应。 以上结果提示强啡肽可能通过抑制交感神经末梢释放去甲肾上腺素,从而产生抑制血管的收缩作用。     

阿利克仑抑制血管紧张素原-肾素双转基因高血压小鼠心肌成纤维细胞增殖

本研究旨在观察阿利克仑(aliskiren)在血管紧张素原-肾素(AGT-REN)双转基因高血压(double transgenic hypertension,d TH)小鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖中的作用。将培养的AGT-REN d TH小鼠CFs分为高血压组(d TH)和阿利克仑干预组;另培养同品系野生C57B6小鼠CFs作为对照(WT)。采用MTT法观察不同浓度阿利克仑(1×10~(-6)、1×10~(-7)、1×10~(-8)、1×10~(-9) mol/L)对d TH小鼠CFs增殖的影响;选取1×10~(-7) mol/L阿利克仑作用d TH小鼠CFs 24 h,羟脯氨酸试剂盒定量检测细胞胶原含量;Western blot法检测细胞I、III型胶原蛋白表达,观察细胞胶原合成变化;Western blot法检测α-SMA表达,观察细胞转化;DHE检测细胞内活性氧表达,Western blot法检测细胞内NADPH氧化酶蛋白表达,观察细胞内氧化应激反应的改变。结果显示,随年龄增长,AGT-REN d TH组小鼠血压及血浆Ang II水平均呈明显升高趋势,与WT组小鼠相比,CFs增殖明显。1×10~(-6)、1×10~(-7)、1×10~(-8) mol/L阿利克仑均能抑制AGT-REN d TH小鼠CFs增殖。1×10~(-7) mol/L阿利克仑使d TH小鼠CFs表达α-SMA减少,胶原合成及I、III型胶原蛋白表达下降,活性氧表达减少;同时,阿利克仑降低了d TH小鼠CFs内NADPH氧化酶NOX2及NOX4的蛋白表达。阿利克仑抑制AGT-REN d TH小鼠CFs增殖、表型转化及胶原合成,这一过程可能与其抑制细胞内氧化应激反应有关。     

桑白盾蚧病原真菌Simplicillium lanosoniveum的致病性

从太原市白蜡树上采集的自然染病死亡的桑白盾蚧Pseudaulacaspis pentagona虫尸上分离获得一株病原真菌,菌株号为TYL001。经过形态观察和分子鉴定,该菌株为Simplicillium lanosoniveum。用该菌株5种浓度的孢子悬浮液(1.0×10~6孢子/m L、5.0×10~6孢子/m L、1.0×10~7孢子/m L、5.0×10~7孢子/m L、1.0×10~8孢子/m L)感染桑白盾蚧雌成虫,感染6d后,孢子悬浮液对桑白盾蚧的感染率分别为80.00%、83.33%、86.67%、90.00%、93.33%,说明该菌株对桑白盾蚧具有较强的感染力,且有浓度效应;感染症状出现的高峰期在72–120h之间,且孢子浓度越大,感染症状出现的越早;5种孢子浓度的感染中时IT50依次为106.95h、97.00h、91.46h、87.73h、79.38h,说明感染致病所用时间也具有浓度效应。本研究为生物防治桑白盾蚧提供了新菌种。     

单扫描极谱法快速测定胱氨酸

用单扫描极谱法研究了胱氨酸在乙醇胺-HCl介质中产生的吸附还原波,并应用该方法测定了头发样品及胱氨酸片剂中胱氨酸的含量。结果表明,极谱波高与8.2×10~(-7)～1.2×10~(-5) mol/L的胱氨酸呈线性关系,检测限为3.5×10~(-7)mol/L,且多种氨基酸在较高浓度共存的情况下不干扰胱氨酸的测定。     

阿米巴痢疾并急性典型菌痢1例

患者,女性,35岁.因发烧,腹泻,解粘液、脓血便一天入院.入院前一天感下腹部隐痛,继之腹泻,共解粘液、脓血便14次.T38.0℃,呕吐胃内容物2次.有里急后重.小便正常.Bp12.5/8kPa.神清,急性病容,轻度脱水貌,下腹部压病( ),无反跳痛,肝脾肋下未触及,肠鸣音活跃;血常规:WBC11.3×10~9/L,N0.8.大便脓血 ,粘液 ,RBC(?),WBC(?),脓球(?).大便培养出福氏、志贺氏痢疾杆菌,两次找到阿米巴滋养体.予以服灭滴灵、黄连素、TMP,肌注庆大霉素等药物治疗11天,治愈     

人类免疫缺陷病毒阴性隐球菌性脑膜炎患者外周血淋巴细胞亚群分析

目的分析人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)阴性隐球菌性脑膜炎(Cryptococcal meningitis,CM)患者外周血淋巴细胞亚群改变特点,深化对隐球菌病发病机制的认识。方法筛选HIV阴性CM患者31例和健康献血员21例进行淋巴细胞亚群分析,CM患者根据是否存在免疫抑制基础疾病分为两个亚组,比较3组研究对象淋巴细胞亚群中B、NK、CD_4~+T、CD_8~+T细胞亚群,CD_4~+T及CD_8~+T细胞的第二信号受体CD28表达比例及CD_8~+T细胞激活标记物HLA-DR、CD38的表达水平。结果有基础病CM组B、NK、CD_4~+T和CD_8~+T 4种亚群中位数依次为56×10~6/L、86×10~6/L、218×10~6/L、164×10~6/L,显著低于健康对照组的223×10~6/L、280×10~6/L、695×10~6/L、521×10~6/L(P值均0.001),同时存在CD_8~+T细胞激活亚群比例较健康对照显著升高。无基础病CM患者上述4种细胞亚群中位数依次为128×10~6/L、128×10~6/L、567×10~6/L、527×10~6/L,除CD_8~+T细胞计数水平与健康对照相似以外,B(P=0.02)、NK(P=0.002)和CD_4~+T细胞(P=0.03)计数均低于健康对照,其CD_8~+T细胞激活亚群比例与健康对照组相似。CD_4~+T和CD_8~+T细胞的CD28表达水平在3组间未见显著差异。结论 HIV阴性CM患者,无论是否存在免疫抑制基础疾病,外周血B、NK及CD_4~+T 3种细胞计数可出现同时减少。     

Sysmex XN-1000血液分析仪检测血小板3种方法的比较

目的:评价Sysmex XN-1000血液分析仪检测血小板(PLT)3种方法的准确性。方法:收集广州总医院2017年1、2月住院病人血液标本共166例,分别用手工法和XN-1000血液分析仪的电阻抗法(PLT-I)、光学法(PLT-O)、荧光染色法(PLT-F)检测同一标本的血小板计数,以手工法为参考标准,比较XN-1000血液分析仪3种方法的准确性。结果:当PLT计数范围为100×10~9~300×10~9/L和300×10~9/L时,3种仪器法与手工法结果比较,差异无统计学意义(P0.05);当PLT100×10~9/L时,仪器法中的PLT-O和PLT-F法与手工法结果比较,差异无统计学意义(P0.05),而PLT-I法与手工法结果比较,差异有统计学意义(P0.05),其与手工法的相关性比较依次为PLT-FPLT-OPLT-I。结论:当PLT100×10~9/L时,仪器检测血小板计数3种方法的准确性均较好;当PLT100×10~9/L时,PLT-F和PLT-O法的检测准确性优于PLT-I法。