金黄色葡萄球菌RNaseH Ⅰ、RNaseH Ⅱ和RNaseH Ⅲ突变菌株的构建及功能研究

目的:在金黄色葡萄球菌中分别构建RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ的突变菌株,并研究它们在金黄色葡萄球菌中的生物学功能。方法:利用同源重组的方法在金黄色葡萄球菌中分别构建RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ的插入突变菌株,检测突变株生长速度、溶血活性及外分泌蛋白表达水平与野生型的差异,进一步通过流式细胞术检测突变株外分泌蛋白细胞毒性的改变,同时在体外检测突变株在全血中的存活能力。结果:构建了金黄色葡萄球菌RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ的插入突变菌株;表型检测结果显示,与野生型菌株相比,3种突变株的生长速度减慢,溶血素和外分泌蛋白明显减少;流式细胞术检测结果显示3种突变株毒性比野生型菌株减弱;全血杀伤实验结果显示3种突变株在全血中的存活率低于野生型菌株。结论:RNaseHⅠ、RNaseHⅡ和RNaseHⅢ在金黄色葡萄球菌生长繁殖、毒素产生和侵袭机体的过程中有重要作用,它们可能与金黄色葡萄球菌的致病性相关。     

类SCC样甲氧西林敏感性金黄色葡萄球菌的基因组学分析

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S. aureus), 作为一种常见的致病菌常可导致严重感染性疾病. 金黄色葡萄球菌的主要特点是易产生耐药性. 临床上运用多重PCR方法对S. aureus耐药菌株进行分型. SCC作为一种mecA基因的转运载体, 介导金黄色葡萄球菌产生耐药性. 本研究报道了一株新甲氧西林敏感性金黄色葡萄球菌的全基因组序列信息, 即类SCC样MSSA463菌株, 经多重PCR方法, 该菌株被误鉴定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌, 结果与药敏结果相冲突. 为此, 运用焦磷酸测序方法完成了该菌株的全基因组测序, 并与已知金黄色葡萄球菌的基因组序列信息不同, 发现可读框(CZ049; AB037671)存在于attL, attR反向重复序列的临近下游. 这些结果提示, 在金黄色葡萄球菌与其他微生物之间可能存在一种水平基因转移, 并改变了金黄色葡萄球菌对药物的敏感性, 推测attL, attR反向重复序列可能作为外源性基因的插入部位而存在.     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及其肠毒素的检测和耐药性分析

目的评价乳胶结合试验检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)及其肠毒素(SE),并进行耐药性分析.方法收集130株金黄色葡萄球菌临床分离株,通过药敏试验将其分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),用反向间接血凝试验(RPHA)检测金黄色葡萄球菌肠毒素.结果67株MR-SA产肠毒素,19株MSSA产肠毒素,MRSA产肠毒素率为100%,MSSA产肠毒素率为30%.结论实验室应重视金黄色葡萄球菌肠毒素的检测.     

儿童下呼吸道感染的金黄色葡萄球菌耐药性分析

对 4 2 38例下呼吸道感染患儿深部痰液标本中的金黄色葡萄球菌进行分离培养 ,并用细菌自动分析系统Vitek 6 0进行菌种鉴定和药物敏感试验。金黄色葡萄球菌分离阳性率为 2 .1% (89/ 4 2 38)。所分离的89株金黄色葡萄球菌中 ,95 .5 % (85 / 89)菌株产 β 内酰胺酶 ;但仅 4 .5 % (4 / 89)菌株耐苯唑西林 (MRSA) ,其中 3株显示多重耐药。 96 .6 %和 4 8.3%的菌株分别对青霉素和红霉素耐药 ,14 .6 %～ 2 5 .9%分别对四环素、林可霉素、复方新诺明耐药 ;对其余临床常用抗生素 ,如庆大霉素、苯唑西林、氨苄西林 /舒巴坦、阿莫西林 /克拉维酸、头孢唑啉、环丙沙星、左氧氟沙星等的耐药率均低于 10 %。上述实验结果提示 ,本地区引起患儿下呼吸道感染的金黄色葡萄球菌对多数临床常用抗生素仍敏感 ,β 内酰胺酶阳性菌株极为普遍 ,但MRSA所占比例不高。     

253株金黄色葡萄球菌耐药现状分析

目的 了解医院金黄色葡萄球菌临床分布情况及其对常用抗菌药物的耐药率,为临床合理使用抗菌药物提供依据.方法 回顾分析医院2010年5月至2011年4月检出的金黄色葡萄球菌,采用VITEK-AMS全自动微生物分析仪进行菌种鉴定和药敏分析.结果 共检出金黄色葡萄球菌253株,菌株的主要来源为痰130株(51.4％)、血液39株(15.4％)、创面24株(9.5％);菌株主要科室分布前3位是神内科35株(13.8％)、ICU30( 11.8％)、脑外科26株(10.3％);其中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( MRSA)为165株(65.2％),MRSA对多种抗菌药物耐药率＞70.0％,MSSA为88株(34.8％),对除青霉素、红霉素外的大多数抗菌药物敏感,未发现耐万古霉素菌株.结论 MRSA检出率高,耐药现状严重,应加强对金黄色葡萄球菌耐药性的监测,并根据药敏试验结果合理使用抗菌药物.     

产SEB金黄色葡萄球菌α-溶血毒素基因缺失菌株的构建

构建产肠毒素B(Staphylococcal enterotoxin B ,SEB)的金黄色葡萄球菌α-溶血毒素（α-hemolysin, α-HL)缺失菌株。首先构建用于α-HL基因敲除的同源重组质粒pMHL-α,经金黄色葡萄球菌RN4220修饰后再通过原生质体转入金黄色葡萄球菌SM-01。含重组质粒pMHL-α的金黄色葡萄球菌SM-01在42℃诱导条件下培养多代,最终筛选出α-溶血毒素基因缺失菌株。经序列分析和血平板溶血实验结果证明最终获得产SEB金黄色葡萄球菌α-HL缺失菌株。为野生型金黄色葡萄球菌的体内遗传操作及构建产超抗原药物金黄色葡萄球菌基因工程菌株提供了一定的理论基础和方法。     

葡萄球菌下呼吸道感染的细菌学分类及抗生素敏感性分析

目的：探讨葡萄球菌下呼吸道感染的细菌学分类情况及抗生素耐药性特点。方法：利用复星公司FOUTUNE IMS细菌鉴定药敏分析系统,凝固酶试验用试管法。结果：47株菌株分离到6种葡萄球菌,排在前3位的是施氏葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、木糖葡萄球菌,其中金黄色葡萄球菌占29．8％。耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）占78．7％,耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）占凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）78．8％;MRS对万古霉素敏感率为81．1％。MRS建议用药依次为万古霉素、呋喃妥因、氯霉素、四环素和喹诺酮类,未发现对万古霉素耐药的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）。结论：凝固酶阴性、耐甲氧西林葡萄球菌成为下呼吸道球菌感染的主要菌株,MRS比例上升,MRS治疗首选万古霉素。     

临床分离金黄色葡萄球菌药物敏感性及其生物膜形成能力的研究CSCD

目的 初步探讨临床分离金黄色葡萄球菌药物敏感性与其生物膜形成的关系。方法 收集2020年1月至2022年1月大同市第二人民医院检验科临床送检的痰液、尿液、血液和伤口分泌物等样本。采用VITEK-2全自动微生物菌株鉴定系统分离出非重复致病性金黄色葡萄球菌60株;采用刚果红试验定性鉴定产膜菌株和非产膜菌株;采用VITEK-2全自动微生物药敏试验系统进行药敏分析;采用96微孔板试验半定量鉴定菌株产膜能力。结果 通过VITEK-2全自动微生物菌株鉴定系统检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)32例(53.3%),甲氧西林敏感型金黄色葡萄球菌(MSSA)28例(46.7%)。生物膜阳性菌30株(50.0%),生物膜阴性菌30株(50.0%)。其中,MRSA菌株产膜率53.1%,MSSA菌株产膜率46.4%,二者差异无统计学意义(P>0.05)。96微孔板试验筛选出强产膜菌株7株(23.3%),弱产膜菌株23株(76.7%)。强产膜菌株中,MRSA菌株6株,占85.7%,耐药5种以上占71.4%;弱产膜菌株中,MRSA菌株11株,占47.8%,耐药5种以上占26.1%;30株生物膜阴性菌,耐药5种以上占26.7%。结论 本研究临床分离的金黄色葡萄球菌中,MRSA菌株产膜能力强于MSSA菌株,产膜菌株耐药种类高于非产膜菌株。     

美洲大蠊肠道内生细菌的分离及其初步抑菌活性研究

分离鉴定美洲大蠊肠道内生细菌,并初步研究了其抑菌活性。采用平板稀释法对美洲大蠊肠道内生细菌进行分离纯化,分离菌株通过形态学观察和16S rDNA基因序列BLAST比对进行种属鉴定。以金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌4株细菌为对象,采用牛津杯法初步鉴定各分离菌株的抑菌活性。BLAST比对分析结果表明:从15只美洲大蠊肠道内分离鉴定出125株内生细菌,分属12科20属。初步抑菌活性显示:部分菌株对金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌有明显抑菌活性。美洲大蠊肠道内生菌种类繁多,而且较多菌株具有抑菌活性。     

金黄色葡萄球菌耐药基因及新型抗菌药物的研究进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus),简称金葡菌,是一种临床常见致病菌,可引起皮肤化脓性感染、肺炎、心包炎、败血症及脓毒血症等多种疾病。目前临床上金黄色葡萄球菌的多重耐药情况已十分严峻,特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的出现,已成为临床抗感染治疗的棘手难题,严重危害人类健康。本文主要介绍金黄色葡萄球菌基因水平的耐药性、新型抗菌药物的研发及临床治疗金黄色葡萄球菌感染三方面的进展,为金黄色葡萄球菌的耐药性研究及耐药菌株的临床有效治疗提供科学依据。