介导多药耐药的ABC转运蛋白超家族与MTX耐药性的关系研究

细胞耐药性的产生是导致肿瘤化疗失败的重要因素, 尤其是多药耐药是目前研究的一个重点。ABC转运蛋白超家族成员介导药物的外排, 与多药耐药密切相关。为了解该家族成员与MTX耐药的相关性, 进一步探讨MTX的耐药机制, 应用SuperArray基因芯片对MTX耐药前后编码ABC转运蛋白超家族成员的mdr1、mrp1、mrp2、mrp3、mrp5、mrp6和abcg2 7个基因进行检测, 并对MRP1和MRP5蛋白表达进行了验证。结果显示, 与MTX耐药性相关的ABC转运蛋白超家族成员主要为多药耐药相关蛋白, 其中mrp1和mrp5呈现高表达, 并且, 在MTX抗性细胞中, MRP5在mRNA及蛋白水平的表达均明显增强, 提示其在MTX耐药机制中起重要作用, 可能为潜在的药物作用靶点。     

纳米颗粒Gd@C_(82)(OH)_(22)抑制哺乳动物细胞外排转运的研究

目的 探讨纳米颗粒Gd@C_(82)(OH)_(22)体外对哺乳动物细胞外排转运的影响,研究该外排转运抑制作用与MRP1蛋白和ATP酶活性间的关系,为Gd@C_(82)(OH)_(22)应用于耐药肿瘤治疗提供初步实验依据.方法 通过Calcein-AM(C-AM)摄入法,以仓鼠肾细胞BHK-21、转染表达多药耐药相关蛋白MRP1的BHK-21/MRP1细胞以及肿瘤细胞PC-3为模型测定Gd@C_(82)(OH)_(22)对细胞外排转运的整体影响;用比色法测定Gd@C_(82)(OH)_(22)对MRP1蛋白截短体及BHK-21/MRP1质膜微囊的ATP酶活性的影响.结果 经Gd@C_(82)(OH)_(22)处理后,3种细胞的C-AM摄入量均上调,BHK-21与BHK-21/MRP1摄入量增加相似;用MRP1抑制剂MK571处理BHK-21/MRP1后,细胞C-AM摄入增长趋势不变;Gd@C_(82)(OH)_(22)对MRP1蛋白截短体及质膜微囊的ATP酶活性没有抑制作用.结论 表明Gd@C_(82)(OH)_(22)可抑制哺乳动物细胞的外排转运,其抑制作用并不是通过抑制MRP1蛋白或ATP酶活性来实现的.     

乳腺癌耐药蛋白的研究进展

乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP/ABCG2)是新近发现的ATP结合盒(Adenosine triphosphate-binding cassette,ABC)膜转运蛋白超家族成员。它作为细胞膜上的药物排出泵,可以将一系列细胞毒药物转运至胞外从而介导肿瘤细胞多药耐药。在很多血液肿瘤和实体瘤中均检测到ABCG2表达。ABCG2在肿瘤的多药耐药上发挥重要作用。本文对ABCG2的发现、基因表达特征、与造血干细胞分化的关系、转运底物及其耐药逆转和临床意义等方面的研究进展进行综述。     

长链非编码RNA SNHG16的表达对肺癌细胞增殖和化疗耐药影响的作用机制

目的:研究长链非编码RNA SNHG16对肺癌细胞系增殖和吉西他滨化疗药物耐药的影响机制。方法:qRT-PCR检测肺癌组织和相应癌旁组织中SNHG16的表达量,检测肺癌细胞系HCC827、A549、NCI-H1395、NCIH1975及肺上皮细胞系BEAS-2B中SNHG16的表达量;慢病毒包装构建sh-SNHG16-1、sh-SNHG16-2,分为sh-NC组、sh-SNHG16-1组、sh-SNHG16-2组,qRT-PCR检测各组NCI-H1395细胞中SNHG16的表达量,CCK-8检测各组NCI-H1395细胞增殖率及对吉西他滨耐药的影响;软件预测靶向SNHG16的miRNA,双萤光素酶报告基因实验验证SNHG16作为海绵拮抗miR-520a-3p的表达;分为sh-NC组、sh-SNHG16组、sh-SNHG16+miR-520a-3p-inhibitor组,CCK-8检测各组NCI-H1395细胞增殖率及对吉西他滨耐药的影响,蛋白质印迹检测MRP1、MRP2、ABCG2转运蛋白的表达水平。结果:肺癌组织中SNHG16的表达量明显高于癌旁组织,肺癌细胞系中SNHG16的表达量明显高于肺上皮细胞系。相比sh-NC组,sh-SNHG16-1组及sh-SNHG16-2组中SNHG16表达量明显下调,细胞存活率明显下调,吉西他滨耐药能力明显下调;SNHG16作为海绵降低miR-520a-3p的表达。相比sh-NC组,sh-SNHG16组细胞增殖率明显下调,吉西他滨耐药能力明显下调,MRP1、MRP2、ABCG2转运蛋白的表达水平明显下调;sh-SNHG16+miR-520a-3p-inhibitor组与sh-NC组相比没有明显差异。结论:SNHG16促进肺癌细胞NCI-H1395的增殖及对吉西他滨耐药的能力。     

乳腺癌耐药蛋白介导多重耐药机制及其逆转

近年发现的乳腺癌耐药蛋白属于ATP结合框转运体家族中的G亚家族,是主要的介导肿瘤细胞多药耐药机制的跨膜转运蛋白之一,在临床抗肿瘤治疗中具有重要的意义。本文综述了乳腺癌耐药蛋白的结构特点、表达特征,及其介导的肿瘤细胞多重耐药机制与逆转等方面的研究进展,并展望了今后的研究方向。     

凋亡相关蛋白与多药耐药相关蛋白在结肠癌的表达及其意义

目的研究凋亡相关蛋白Bcl-2、P53和多药耐药相关蛋白Pgp、MRP在结肠癌中的表达,探讨之间的相关性及病理意义。方法用免疫组织化学SP法检测43例结肠癌和16例正常结肠中的Bcl-2、P53、Pgp和MRP的表达。结果Bcl-2、P53、Pgp和MRP在结肠癌组织中的阳性表达率分别为79％、74％、91％和77％,明显高于在正常结肠组织中的表达（P〈0．05）。Bcl-2的表达与结肠癌的分化程度密切相关（P〈0．01）,Pgp的表达与结肠癌的淋巴结转移和临床分期密切相关（P〈0．05）,MRP的表达则与结肠癌的分化程度、淋巴结转移、临床分期均密切相关（P〈0．05）。结肠癌组织中Bcl—2与P53、Pgp、MRP的表达之间呈显著的正相关（r=0．324,P〈0．05;r=0．330,P〈0．05;r=0．508,P〈0．01）。结论结肠癌中存在Bcl-2、P53、Pgp和MRP蛋白表达的显著上调,提示结肠癌组织可存在多种多药耐药发生机制。Pgp和MRP的阳性表达与临床病理特征密切相关,可将二者阳性表达率的上调作为结肠癌预后不良的指针。结肠癌组织中Bcl—2表达与种多药耐药相关因子P53、Pgp、MRP密切相关,提示结肠癌的发生与笺药耐药相关因子之间可能存在一定内在的联系,而Bcl-2在结肠癌多药耐药发生过程中发挥极其重要的作用。     

肿瘤多药耐药性中的ABC转运蛋白及其调节

ABC转运蛋白是一类利用ATP水解能量,逆浓度方向将一系列化合物转运通过膜结构的膜蛋白,这一类蛋白能转运离子,糖,氨基酸,维生素,多肽,多糖,激素,脂类及生物异源物质.P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)和乳腺癌耐药蛋白(BCRP)等ABC转运蛋白还具有转运抗癌药物的能力,因此对化疗的有效性有负面的影响.近年来,许多研究涉及到如何逆转由ABC转 运蛋白引起的肿瘤多药耐药性.本文概述了近年来在蛋白水平,mRNA水平或DNA水平上对ABC转运蛋白调控的研究.     

黄芪甲苷IV调节MRP3的表达及功能研究

目的:研究黄芪甲苷IV(AS-IV)对人肝癌细胞HepG2中多药耐药相关蛋白-3(MRP3)的调节作用,为AS-IV可能引发的药物相互作用阐明机制。方法:培养HepG2细胞,用不同浓度AS-IV进行干预,Western blotting方法检测细胞中MRP3的蛋白水平,流式细胞术检测胞内5-羧基荧光素(5-CF)的荧光强度,反映MRP的功能;给予MRP3 si RNA干扰,观察AS-IV诱导的MRP3蛋白表达是否增加其外排转运功能;提取胞核、总蛋白,检测胞核核因子E2相关因子2(Nrf2)、总Nrf2蛋白水平;给予Nrf2 si RNA干扰,观察AS-IV诱导的MRP3蛋白表达是否依赖于Nrf2。结果:200μmol/L AS-IV作用48 h后,细胞MRP3的蛋白水平显著增加(P0.05),胞内5-CF的平均荧光强度(MFI)明显低于对照组(P0.05),与单独给予AS-IV组相比,给予MRP3 si RNA干扰显著增加了胞内5-CF的MFI(P0.05)。AS-IV增加了胞核内Nrf2的蛋白水平(P0.01),亦增加了总Nrf2的蛋白表达(P0.01)。给予Nrf2 si RNA干扰后,AS-IV诱导上调的MRP3被显著抑制(P0.05)。结论:AS-IV可通过上调MRP3的蛋白表达,增加其外排转运功能,Nrf2的激活在AS-IV诱导MRP3蛋白表达中起着重要的作用。本研究提示,AS-IV与MRP3底物合用时,可能会产生药物-药物相互作用。     

MRP2 蛋白在食管鳞癌中的表达及其与化疗耐药的相关性

目的:探讨MRP2蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其与食管癌化疗耐药的关系。方法:收集原发性食管鳞癌手术标本70例,采用免疫组织化学Envision法检测食管鳞癌组织及其癌旁组织中MRP2蛋白的表达情况,并采用MTT法检测食管鳞癌组织对临床常用化疗药物的敏感性,分析其表达与食管癌化疗耐药的关系。结果:70例食管鳞癌组织及其癌旁正常组织中的阳性表达率分别为58.6%及5.0%。MRP2蛋白在食管鳞癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常食管组织(P<0.01)。食管鳞癌组织对环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、顺铂、卡铂、阿霉素、长春瑞滨、羟喜树碱等化疗药物的敏感性与其相应癌组织中MRP2表达明显相关(P<0.01)。结论:MRP2的表达与食管鳞癌对多种化疗药物耐药有较好的相关性,推测食管鳞癌组织中MRP2的高表达可能对化疗耐药性的发生发展具有促进作用。     

ABC细胞膜转运蛋白及其介导的细胞多药耐药研究进展

ABC细胞膜转运蛋白是一个能转运多种底物的蛋白质家族,其在宿主对异物的防御机制和肿瘤细胞对抗癌药物的耐药性中发挥重要作用。ABC转运蛋白能将已进人细胞的外源性物质从胞内泵出胞外,是造成肿瘤细胞多药耐药的主要原因,其基因表达水平与细胞内药物浓度和耐药程度密切相关。近年来,肿瘤细胞多药耐药性研究炙手可热。我们简要综述ABC细胞膜转运蛋白的特点、分布、表达及其介导的细胞多药耐药方面的研究进展。     

胆石患者术后胆盐转运子BSEP、MRP2、NTCP的水平变化及意义

目的:探讨腹腔镜联合胆道镜微创手术对胆囊结石患者胆盐转运因子胆盐输出泵(BSEP)、多重耐药蛋白2(MRP2)和牛黄胆酸钠转运蛋白(NTCP)水平的影响。方法:选取我院普外科收治的胆囊结石患者20例排除手术和麻醉禁忌症,予腹腔镜联合胆道镜微创手术治疗。治疗结束后,对比治疗前后患者BSEP、MRP2、NTCP水平变化。结果:1治疗后患者肝脏组织中BSEP、MRP2水平明显比治疗前升高,差异有统计学意义(P0.05);2治疗后患者肝组织中NTCP水平与治疗前水平无明显变化,差异无统计学意义(P0.05)。结论:腹腔镜联合胆道镜微创手术治疗胆囊结石能升高患者胆盐转运因子BSEP、MRP2水平,提高患者术后对胆盐的转运和胆汁酸的代谢,降低胆囊结石复发率,对临床具有指导意义,值得临床推广。     

白念珠菌药物流出泵蛋白质的表达调节及其逆转剂与耐药的关系

白念珠菌Cdr1p和Cdr2p与耐药密切相关,对转运蛋白及其抑制剂的研究,是解决临床耐药的理论基础。该文介绍白念珠菌细胞膜流出泵蛋白的表达调节与耐药的关系,及对蛋向质逆转剂研究的新进展。     

脂多糖诱导的慢性阻塞性肺病模型大鼠肺支气管上皮MRP1功能分析

目的分析脂多糖(LPS)造模方法对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠的肺支气管上皮细胞多药耐药相关蛋白1(MRP1)功能的影响。方法利用LPS造模方法制备COPD模型大鼠,设置正常对照组、造模14d组和造模28 d组,分别测定其呼吸功能;以酚红外排水平评价大鼠肺支气管上皮MRP1的功能;同时采用免疫组化法分析各组大鼠肺支气管上皮MRP1的表达。结果与正常对照组比较,LPS处理组造模进程中随时间的延长大鼠的各项肺功能指标明显下降;静脉给予酚红后其BALF中酚红浓度与血浆酚红浓度的比值降低;其肺支气管上皮MRP1蛋白表达显著性降低。结论 LPS造模方法制备COPD模型大鼠,随着造模的进程,其肺支气管上皮细胞MRP1蛋白的功能随之下调。     

siRNA介导多药耐药相关蛋白(MRP1)的表达沉默

利用pSIREN-RetroQ载体构建了3个沉默多药耐药相关蛋白（MRP1）基因表达质粒pSI REN-siRNAs.并通过限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序鉴定,将截断MRP和全长MRP1 cDNA分别克隆到真核表达载体pEGFP-N2和pcDNA3.1中,产生了pEGFP-MRP1T和pcDNA-MRP1表达质粒．质粒pEGFP-MRP1T分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞沉默MRP1T-GFP靶基因,pSIREN-siRNA1作为阴性对照.荧光显微镜下显示结果表明,与pSIREN-siRNA1相比,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3产生的siRNA能够有效沉默MRP1T-GFP融合蛋白的表达．为了沉默全长MRP1基因的表达,pcDNA-MRP1分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞．Western印迹和MTT分析表明,pSIREN-siRNA2和pSIREN- siRNA3能有效抑制190 kD MRP1在HEK293细胞中的表达,而pSIREN-siRNA1则不能．pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能逆转MRP1转染HEK293细胞产生的多药耐药性．RNA二级结构预测结果分析表明,siRNA1靶序列mRNA局部自由能热动力参数ΔG低于siRNA2和siRNA3靶序列mRNA局部自由能热动力参数,siRNA1的GC含量和Tm值高于siRNA2和siRNA3．这些数据提示,siRNA和局部靶结构可能影响siRNA对MRP1 mRNA表达的沉默作用．     

多药耐药基因产物在宫颈癌中的研究进展

化疗多药耐药是影响宫颈癌化疗疗效的重要因素.目前关于多药耐药(multidmgresistance,MDR)产生机制的研究报道很多,主要包括以下几个方面:(1)典型性多药耐药:如多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDRI)及其编码的蛋白P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)和肺耐药蛋白(lung resistance-related protein,LRP)基因及其编码的蛋白的过度表达;(2)谷胱苷肤-S-转移酶-π的表达;(3)非典型性多药耐药:由拓扑异构酶Ⅱ(Topo Ⅱ)介导的耐药机制;(4)细胞凋亡抑制(例如:突变型P53和癌基因Her-2/neu/C-erbB-2表达增加)等.这些因素之问还可以相互影响、共同作用,造成宫颈癌对多种抗肿瘤药物的耐药[2].本文就多药耐药基因产物在宫颈癌中的研究进展进行综述.     

枯草杆菌耐药转运蛋白Bmr及其基因bmr的表达调控研究进展

枯草杆菌多重耐药转运蛋白Bmr是其主要的耐药外排蛋白之一,由位于基因组DNA的bmr基因编码,介导对多种抗生素、杀菌剂等药物的耐药性。bmr基因的表达受到BmrR及MtaN的转录调控,二者均属于MerR家族调节子。关于近年对多重耐药转运蛋白Bmr和调节蛋白BmrR、MtaN的结构、生理功能及作用机制等研究情况进行综述。     

PstS和PstB调控无机磷酸盐转运和介导细菌耐药的机制

无机磷酸盐(Pi)在菌体遗传、能量代谢及细胞内的信号传导等生物过程中发挥重要的作用。在细菌中,主要由磷酸盐特殊转运系统(Pst)和磷酸盐转运系统(Pit)来完成对Pi的吸收和利用。其中,Pst是在低磷胁迫下转运Pi的关键系统。近年来的研究表明,Pst系统除在调控Pi的代谢和平衡中发挥重要作用外,还介导细菌耐药、产毒和侵袭等。Pst系统是ABC转运蛋白家族的一种,一般由PstS、PstC、PstA、PstB和PhoU5个蛋白组成。其中,PstS和PstB蛋白是该系统中的关键蛋白。本文重点对PstS和PstB调控Pi转运和介导细菌耐药的分子机制进行综述,旨在为深入研究该系统与细菌耐药的关系,以及研发以PstS和PstB为靶点的新药提供参考。     

多核酶表达系统在HEK293细胞中对多药耐药相关蛋白（MRP1）的表达抑制作用

为了研究多核酶表达系统在HEK293细胞中对多药耐药相关蛋白表达抑制的作用．我们构建了含有20个可以自身切割的顺式作用核酶和10个靶向MRP1基因特定位点的反式作用核酶的多核酶表达系统。利用RT—PCR、Westem blot和MTT分析了多核酶系统分别与MRP1靶基因质粒和MRP1 全长基因质粒共转染的HEK293细胞。结果显示．多核酶表达系统能够明显降低荧光融合蛋白在HEK293细胞中的表达。RT—PCR分析表明．懈用靶mRNA降低程度与多核酶表达系统所含的反式作用核酶数目有关。Westernblot分析显示了与RT—PCR相似的结果。Mrrr分析表明,多核酶表达系统能够逆转由MRP1基因转染HEK293细胞产生的多药耐药性。结果提示．含有多个核酶的表达系统对MRP1基因的抑制效应优于单核酶的表达系统。因此．该策略可能用于基因治疗肿瘤或其他疾病．     

白血病耐药细胞系U937/ADR的建立及其生物学性状

目的：建立白血病耐药细胞系U937/ADR模型,并检测其多药耐药相关基因及其生物学性状的改变。方法：以大剂量阿霉素(IC50浓度),短时间(2h)暴露法诱导人白血病细胞系U937细胞的阿霉素耐药性。检测细胞的生长曲线,计算阿霉素耐药倍数,流式细胞术分析细胞周期分布;罗丹明123检测药物外排功能;荧光定量PCR（FQ-PCR）检测MDR1、MRP1、NF-Κb、Bcl-2、Bax mRNA水平变化;Western blot 检测Akt、p-Akt、P65、P-gp、MRP1和Bcl-2蛋白水平变化。结果：成功构建耐阿霉素U937/ADR细胞系,对阿霉素耐药指数为亲代U937细胞的11倍,U937/ADR群体倍增时间为43.6h,高于亲代细胞8.9h;流式细胞分析显示与U937细胞相比,U937/ADR的G0/G1期细胞增多,而G2/M期细胞减少。并对多种化疗药物产生交叉耐药性。罗丹明123外排试验显示,U937/ADR细胞外排明显增加。U937/ADR细胞MDR1、NF-Κb、Bcl-2 mRNA表达水平明显增加,P-gp及p-Akt、P65表达水平增加。结论：成功构建的U937/ADR细胞系其生物学特性明显不同与亲代U937细胞,对多种化疗药物产生多药耐药,高表达多药耐药蛋白P-gp,同时激活p-Akt及NF-Kb。     

外排转运蛋白介导的抗真菌药物耐药研究进展

近年来,随着广谱抗生素,免疫抑制剂,抗肿瘤化疗药物的广泛应用,器官移植的普遍开展以及AIDS患者的逐年增加,各系统侵袭性真菌感染日益增多。抗真菌药物的大量应用使得真菌耐药现象日渐严重。大量研究表明,耐药真菌细胞膜上外排转运蛋白的过量表达对抗真菌药物耐药形成起到重要作用。ATP结合盒式蛋白(ABC转运体)和易化扩散载体超家族蛋白(MFS转运体)便是其中最重要的两种。本文从ABC及MFS转运体的结构和功能出发,分析其在抗真菌药物耐药形成中的作用,并对相关研究进展进行综述。