肺炎支原体及其人用疫苗研究进展

肺炎支原体是老年人慢性阻塞性肺炎和儿童社区获得性肺炎的重要病原体,近几年引起的难治性和重症肺炎支原体肺炎有增多趋势,对儿童和老年人健康危害严重。疫苗是预防肺炎支原体肺炎的最有效手段,但全球尚无人用肺炎支原体疫苗研制成功,而兽用肺炎支原体减毒活疫苗和灭活疫苗在国内外都已上市。因此,对肺炎支原体的相关致病机制及人用肺炎支原体疫苗的研究逐渐成为热点,通过对肺炎支原体致病机制的深入探索可对人用肺炎支原体疫苗的研发提供重要启示。     

肺炎球菌疫苗人血清学评价方法概述

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,简称肺炎球菌)感染是一种引起全球各年龄段人群呼吸系统高发病率及较高死亡率的主要原因之一。目前，为了预防肺炎球菌引起的疾病，已上市2种可预防多种血清型肺炎的多价肺炎球菌疫苗。在评价新研发的肺炎球菌疫苗的保护效果时，疫苗的效力通常取决于接种者疾病发生率的差别。然而，由于疾病的病原学诊断和监测难度大，以及现有疫苗接种在人群中诱导产生的免疫保护力，因此对疾病的保护效果评估存在困难。如果能确定疫苗保护效力的血清学替代指标，将极大地提升新疫苗的研发效率。因此，研究人员开发了针对肺炎球菌疫苗的人血清学评价方法，用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)和调理吞噬杀菌试验(opsonophagocytic killing assay, OPKA)方法作为该疫苗保护效力的替代指标，并成为其主要评价方法。现就肺炎球菌疫苗人血清学评价方法ELISA和OPKA作一概述。     

支原体培养基的改良及其效果评价

为了改良支原体培养基配方,评价其效果。按《中华人民共和国药典》(以下简称药典)中规定的灵敏度比较方法,将实验室制备的新型支原体改良培养基与《药典》中支原体检查法推荐的处方培养基和商品化支原体培养基进行灵敏度效果比较试验。结果表明,改良后的支原体肉汤和半流体培养基,与接种口腔支原体和肺炎支原体及其它支原体的精氨酸培养基、支原体肉汤培养基无显著差异;与接种肺炎支原体的支原体半流体培养基无显著差异;与接种口腔支原体的支原体半流体培养基差异显著。因此经改良后的支原体培养基灵敏度能够满足药典规定的要求,但其操作简便,且成本低于现有的支原体培养基。     

每次稀释后减少试验动物数量对人用狂犬病疫苗效力评价的影响

正狂犬病疫苗质控中最重要的参数是效力,效力参数是通过接种大量试验动物小鼠后检测得到的。因为目前全世界进行动物实验时普遍遵循"3Rs"原则[Reduction (减少) Replacement (替代) Refinement(优化)],所以有必要制定一个替代方法在保证疫苗具有生产持续性的同时还可以减少实验动物的用量。因此,本研究观察了在NIH实验中减少小鼠用量对疫苗效力评价的影响。     

猪支原体肺炎基因工程疫苗的研究进展

猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumoniae of swine,MPS)是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumonia,Mhp)引起的一种慢性呼吸道传染病,该病给养猪业造成了巨大的经济损失。疫苗接种是目前减轻或预防由猪肺炎支原体感染引发经济损失的主要手段。对猪支原体肺炎基因工程疫苗近年来的研究进展进行综述,主要包括黏附因子相关疫苗、核苷酸还原酶相关疫苗、DNA疫苗、表达文库疫苗和肽疫苗等,最后对基因工程疫苗研究工作的继续开展提供了建议。     

乙肝疫苗免疫保护接种乙肝病毒的黑猩猩获得成功

<正> 在男性同性恋者中,对乙肝疫苗的效力进行了观察。试验发现接种乙肝疫苗的同性恋者患乙型肝炎人数明显比不接种疫苗的同类人少。可以设想疫苗对处于潜伏期的个体有抑制乙肝临床表现的作用。为检验这个假设,先给四只黑猩猩注射一定量确定滴度的乙肝病毒,然后分别在4-72小时后接种第一针乙肝疫苗,第二和第三针备在2和6周后接种。     

探讨接种时间和剂量对小鼠肺炎支原体肺炎模型建立的影响

目的 用不同时间和剂量建立BALB/c小鼠的肺炎支原体肺部感染模型,探索小鼠急性肺炎支原体感染的过程.方法 BALB/c小鼠随机分为Ⅰ、Ⅱ两组,Ⅰ组在0、1、2 d滴鼻接种肺炎支原体菌液3次,Ⅱ组在0 d滴鼻接种小剂量肺炎支原体菌液1次后于8、9 d再接种和Ⅰ组相同的肺炎支原体菌液2次,均设立不同剂量、批次的生理盐水对照组.全部实验动物在3～18 d内分批处死.所有小鼠均取肺组织做病理切片.以组织病理学评分来确定小鼠的肺部炎症反应程度.取肺组织匀浆及肺泡灌洗液(BALF)进行肺炎支原体培养做病原学检测.结果 接种后实验动物全部存活无死亡.实验组动物均出现不同程度的肺炎支原体肺炎样病理改变,组织病理学评分为1.5～14.3分,分别于第5、6天和第11天达到最高,平均分为4.9分;Ⅰ组实验组动物多呈轻、中度改变,Ⅱ组实验组动物多呈中、重度改变.所有实验组动物肺组织匀浆及BALF的肺炎支原体培养在接种后1月内先后出现阳性结果.对照组动物未出现明显肺部炎症改变,组织病理学评分为0～1分,肺炎支原体培养为阴性.结论 成功建立BALB/c小鼠的肺部肺炎支原体感染模型;组织病理学评分方法可用以评价肺部炎症反应的严重程度;不同接种时间和剂量所致的病变程度不同.     

肺炎支原体抗独特型卵黄抗体的制备与鉴定

目的制备肺炎支原体(M.pneumonia)抗独特型卵黄抗体(vitelline Ab2),鉴定其生物学特性,探讨其作为动物疫苗的潜在应用价值。方法首先制备兔、小鼠抗肺炎支原体抗体(Ab1),筛选出对肺炎支原体有免疫中和性的兔抗体和小鼠抗体,再用兔抗体免疫产蛋鸡,筛选并收集有高效价抗独特型卵黄抗体的鸡蛋,分离蛋黄,破碎蛋黄组织,用蒸馏水稀释和酸化提取抗独特型卵黄抗体。用冷酒精沉淀法纯化抗独特型卵黄抗体。用ELISA检测肺炎支原体抗独特型卵黄抗体(Ab2)的效价、质量浓度和特异性。用竞争抑制试验和动物免疫检测卵黄Ab2β。结果兔抗肺炎支原体抗体的效价为1×10~(-6),Ab1的效价为1×10~(-4)～1×10~(-5);以上抗体均只和肺炎支原体发生免疫反应,不和解脲支原体发生免疫反应;它们和肺炎支原体混合后能中和肺炎支原体的活性,使其不能在条件培养基生长。Ab2效价为1×10~(-5),质量浓度为8 mg/mL。该抗独特型卵黄抗体只和Ab1发生免疫反应,不和小鼠抗解脲支原体抗体发生免疫反应。该Ab2和Ab1结合能被肺炎支原体竞争抑制,且Ab2能诱导小鼠产生肺炎支原体抗体(Ab3),该Ab3能和肺炎支原体发生免疫反应。结论成功制备了特异性强、效价高的β型Ab2,具有作为动物肺炎支原体疫苗的潜在应用价值。     

乙型肝炎疫苗接种:保护性能持续多久?

<正>Jilg博士及其同事(8月25日,P458)对健康受试者接种乙肝疫苗(Merk疫苗)后抗—HBs抗体的持久性进行了研究,确定了疫苗再接种的最佳时间。我们对参加巴斯德疫苗效力试验的92名健康受试者给予全程免疫并进行长期随访,包括第一次疫苗注射后18±1(SD)月,38±2月和60±1月的抗-HBs滴度的测定。     

无细胞百日咳疫苗的质量控制及其标准化

无细胞百日咳疫苗在全世界范围内已逐渐用于婴幼儿的计划免疫和加强注射中,但到目前为止没有完全令人满意的效力试验方法。小鼠保护试验不适合对无细胞百日咳疫苗进行效力评估,免疫原性试验在衡量制品一致性方面是有用的,但与临床保护之间缺乏相关性,最近建立的气雾攻击主动保护试验为功能性效力试验开创了美好的前景。用生物学结合物理化学方法对疫苗抗原含量,纯度,安全性和免疫原性的研究,对新开发的尚无有效效力试验方法的同类疫苗质量控制及标准化问题提供了指导。     

双抗体夹心ELISA与NIH法在狂犬病疫苗抗原检测中的比较

通过用单克隆抗体制备双抗体夹心ELISA,快速检测狂犬病疫苗中狂犬病毒糖蛋白(G)的含量,将狂犬病疫苗的检定时间由28天缩短至2个工作日,以此缩短疫苗库存待检时间,提高疫苗的生产和销售效率,并最终替代NIH动物法.将待检的狂犬病疫苗样品在同一性别12～14g昆明鼠体内作效力检定试验(NIH),同时用双抗体夹心ELISA检测狂犬病疫苗中狂犬病毒G蛋白含量,用Microsoft Office Excel做出标准品和各样品疫苗的线性关系图并计算出疫苗效力值E-NIH.结果用双抗体夹心ELISA所得的E-NIH与对应的小鼠效力试验所得结果M-NIH之间呈正相关性;同一批狂犬病疫苗分次测得E-NIH值在2.41～5.85之间,而相应的M-NIH值在5.11～10.19之间.从而得出E-NIH与相应的M-NIH之间存在明显的线性关系;与NIH法比较,ELISA具有重复性好、成本低、快速等优点;用双抗体夹心ELISA替代小鼠效力试验是可能并可行的.     

双抗体夹心ELISA与NIH法在狂犬病疫苗抗原检测中的比较

通过用单克隆抗体制备双抗体夹心ELISA,快速检测狂犬病疫苗中狂犬病毒糖蛋白(G)的含量,将狂犬病疫 苗的检定时间由28天缩短至2个工作日,以此缩短疫苗库存待检时间,提高疫苗的生产和销售效率,并最终替代 NIH动物法。将待检的狂犬病疫苗样品在同一性别12～14g昆明鼠体内作效力检定试验(NIH),同时用双抗体夹 心ELISA检测狂犬病疫苗中狂犬病毒G蛋白含量,用Microsoft Office Excel做出标准品和各样品疫苗的线性关 系图并计算出疫苗效力值E-NIH。结果用双抗体夹心ELISA所得的E-NIH与对应的小鼠效力试验所得结果M- NIH之间呈正相关性;同一批狂犬病疫苗分次测得E-NIH值在2．41～5．85之间,而相应的M-NIH值在5．11～ 10．19之间。从而得出E-NIH与相应的M-NIH之间存在明显的线性关系;与NIH法比较,ELISA具有重复性好、 成本低、快速等优点;用双抗体夹心ELISA替代小鼠效力试验是可能并可行的。     

母婴接种肺炎球菌多糖疫苗

<正>幼龄预防肺炎球菌感染有其必要性,可通过母亲接种疫苗或者婴儿尽可能早接种疫苗来实现。在一项开放对照的研究中,给孕妇接种23价肺炎链球菌多糖疫苗(PPV)、B型流感嗜血杆菌结合疫苗和破伤风类毒素,或者单独接种破伤风类毒素。     

接种23价肺炎球菌多糖疫苗预防慢性阻塞性肺疾病急性发作的经济成本效益分析

目的了解23价肺炎疫苗对COPD患者急性发作的预防保护效果及成本效益分析。方法从2013年9月汉滨区新型农村合作医疗报销登记数据库中,随机抽取8个乡镇COPD症状的患者230人作为研究对象,以收集对象接种23价肺炎疫苗前后各一年的治疗成本及住院天数,并进行对比分析两组数据。结果接种23价肺炎疫苗后治疗成本、住院天数均显著低于接种前。接种疫苗后总效益803 716元,接种疫苗后效益成本比为11.4∶1,接种疫苗后净效益达到733 336元。结论 23价肺炎疫苗能有效预防COPD的急性发作,并降低COPD急性发作所致的治疗成本。     

开发裸DNA疫苗的新方法

University of Texas Southwestern Medical Center的研究人员开发了一种“基因组”疫苗,预防小鼠支原体肺炎(结核状病)。其疫苗是通过有效分离产抗原蛋白基因获得的,证实用这种方法可制备抗任意抗原的疫苗。 上述方法是用酶在随机位置酶切病原基因组,产生整组病毒基因片段,然后将各组片段克隆到质粒中     

肺炎链球菌荚膜多糖特异性IgG抗体定量ELISA检测及质量控制要求

检测肺炎链球菌荚膜多糖(PPS)特异性抗体的酶联免疫吸附试验多年来经历了两次主要改进。介绍了WHO推荐的人血清抗肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)荚膜多糖抗体IgG定量ELISA(Pn PS ELISA)检测方法、关键试剂、局限性以及方法验证等内容。ELISA定量检测法,为预防肺炎链球菌的婴幼儿侵袭性疾病提供准确的抗体水平,并对肺炎链球菌疫苗的临床评价提供血清学证据。人血清中肺炎链球菌荚膜多糖抗体IgG是判断肺炎链球菌疫苗效力的重要指标。     

纯化乙型脑炎疫苗的研制

将乙脑P3毒株接种地鼠肾细胞,制备病毒原液,经灭活、浓缩、层析纯化后收集抗原,再经除菌、配制,制备乙脑纯化疫苗。结果表明：病毒浓缩液经纯化后,杂蛋白去除率大于99％,牛血清蛋白残留量也明显降低;纯化疫苗主要指标检定均达到预期效果;效力试验结果显示当纯化原液蛋白含量稀释至15μg/ml时,疫苗效力符合要求。     

疫苗现场效果评价方法

<正> 疫苗的防病效果主要取决于疫苗本身的质量及使用是否正确。已有一些实用的技术可用于疫苗效力及宿主免疫应答的检测。效力试验对监测疫苗生产及“冷链”运输的情况是很重要的。在后一种情况下,一般是从现场回收疫苗进行检测,以保证所用的疫苗有效。这里的“效力试验”是就其广义而言的,例如病毒性活疫苗的病毒滴度测定等也包括在内。     

25岁以上妇女使用人乳头瘤病毒16/18AS04-佐剂疫苗的效力、安全性和免疫原性

正虽然青少年时期的女性是人乳头瘤病毒(HPV)疫苗的主要接种人群,但是存在患宫颈癌风险的年长女性依旧可以接种疫苗。该研究将还在进行中的VIVIANE研究的中期数据进行汇总整理,目的是评估HPV 16/18 AS04-佐剂疫苗的效力、安全